本文關(guān)鍵詞：直腸肛門畸形遠(yuǎn)端神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布及GDNF、GFRa1、RET表達(dá)情況研究

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【摘要】：目的： 了解不同類型的直腸肛門畸形(anorectal malformations, ARM)患兒直腸閉鎖遠(yuǎn)端腸壁神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布情況以及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體al (GFRα1)、酪氨酸激酶受體(RET)的表達(dá)情況,并探討其臨床意義。 方法： 1.選取天津市兒童醫(yī)院2009年1月至2012年12月間臨床診斷為“直腸肛門畸形”病人12例：男8例,女4例；年齡3日至2歲；高位畸形6例,中位畸形2例,低位畸形4例。取直腸盲端及距離盲端3cm處腸壁組織標(biāo)本,新鮮標(biāo)本提取RNA逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)情況；石蠟包埋組織切片檢測神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布情況,免疫組化技術(shù)檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子在腸壁內(nèi)的表達(dá)情況。 2.HE染色觀察神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布情況。 3.免疫組化SP法檢測GDNF、GFRα1、RET蛋白在低、中、高位ARM直腸盲端及距直腸盲端3cm處腸壁組織中的表達(dá)情況。 4. RT-PCR方法半定量分析GDNFmRNA、GFRα1mRNA和RETmRNA在低、中、高位ARM距直腸盲端3cm處腸壁組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.手術(shù)后肛門功能隨訪結(jié)果： 術(shù)后隨訪時間為3個月～4年。高位ARM中2例出現(xiàn)污便,1例出現(xiàn)稀便不能控制,無肛門失禁情況。中、低位ARM中有1例出現(xiàn)直腸黏膜脫出,經(jīng)坐浴肛門護(hù)理好轉(zhuǎn)；1例出現(xiàn)排氣時偶有污便,其余7例術(shù)后排便功能未見異常。按照中國醫(yī)科大學(xué)修定的肛門功能臨床評分標(biāo)準(zhǔn)6分法,評估結(jié)果如下：高位ARM組優(yōu)：50%(3/6),良：50%(3/6)；中低位ARM組優(yōu)：83%(5/6),良：17%(1/6)。 2.HE染色結(jié)果： (1)直腸盲端：高位、中位和低位ARM,均未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存在。 (2)距離直腸盲端3cm處取材的組織中：低位和中位ARM標(biāo)本中可見正常的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,而高位ARM標(biāo)本中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量明顯少,且細(xì)胞形態(tài)小,肌間神經(jīng)叢分布稀疏,且細(xì)。 3.免疫組化染色結(jié)果： 直腸盲端組織中三組標(biāo)本均未見神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)；距離直腸盲端3cm處組織中,觀察都有GDNF、GFRα1、RET蛋白的表達(dá),但是表達(dá)的量有所不同,中低位ARM標(biāo)本中GDNF、GFRα1、RET的表達(dá)明顯高于高位ARM的表達(dá)情況。 4. RT-PCR方法半定量檢測結(jié)果： 距離直腸盲端3cm處腸壁組織中存在GDNFmRNA.GFRα1mRNA和RET mRNA表達(dá)；結(jié)果均顯示低位ARM表達(dá)最高,中位ARM表達(dá)次之,高位ARM表達(dá)最低。 結(jié)論： 1.ARM患兒直腸盲端無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存在,距盲端3cm處腸壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)(包括神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞)存在發(fā)育異常。 2.ARM患兒直腸末端(距盲端3cm處)腸壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育程度與直腸肛門畸形類型密切相關(guān)。 3.在不同類型ARM中,GDNF、GFRα1和RET蛋白的表達(dá)情況以及GDNFmRNA、GFRα1mRNA和RETmRNA的表達(dá)情況均與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布情況相一致。GDNF、GFRα1和RET基因可能與ARM的發(fā)病存在相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：腸神經(jīng)系統(tǒng) 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 神經(jīng)叢 神經(jīng)營養(yǎng)因子 GDNF GFRα RET
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R726.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 對象和方法15-25
• 1.1 實驗對象及標(biāo)本制備15-16
• 1.1.1 實驗對象15-16
• 1.1.2 標(biāo)本制備16
• 1.2 方法16-25
• 1.2.1 HE染色16-18
• 1.2.2 免疫組化方法檢測各組直腸末端GDNF、GFR α1和RET的表達(dá)情況18-21
• 1.2.3 RT-PCR法測定各組距離直腸末端3cm處GDNF、GFR α1和RET基因表達(dá)21-25
• 結(jié)果25-33
• 2.1 手術(shù)后肛門功能隨訪結(jié)果25
• 2.2 HE染色表達(dá)情況25
• 2.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果25
• 2.4 RT-PCR實驗結(jié)果25-33
• 討論33-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明43-44
• 綜述44-59
• 綜述參考文獻(xiàn)53-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：993095