發(fā)布時間：2017-10-06 14:48

  本文關(guān)鍵詞：宮內(nèi)亞臨床感染對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用及其相關(guān)機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 未成熟腦 亞臨床感染 缺氧缺血 表觀遺傳 促紅細(xì)胞生成素

【摘要】：背景與目的 隨著醫(yī)療技術(shù)水平的不斷提高，早產(chǎn)兒的存活率明顯提高，與此同時早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)病率亦呈逐年增高趨勢。早產(chǎn)兒腦損傷主要包括腦室或腦室周圍出血（PIVH）及腦室周圍白質(zhì)軟化（PVL），其中PVL是早產(chǎn)兒腦損傷中最常見的病理類型。流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，缺氧缺血（HI）和感染是導(dǎo)致PVL或腦癱的兩個重要因素。雖然單一HI或感染不足以導(dǎo)致腦損傷，但在圍生期兩者聯(lián)合作用可能會對未成熟腦造成嚴(yán)重?fù)p傷。孕母絨毛膜炎、胎膜早破及早產(chǎn)兒窒息缺氧等情況在臨床工作中均較常見，且常常同時存在。生后感染對HI的協(xié)同作用國外已有較多研究，而關(guān)于宮內(nèi)亞臨床感染對新生鼠HI是否具有增敏作用，目前國內(nèi)外尚無明確報道，且其相關(guān)的動物模型也不完全成熟。因此，本實驗首先建立宮內(nèi)亞臨床感染聯(lián)合新生鼠HI動物模型，從MBP、MAP-2及TNF-a等方面證明腦損傷的存在，并在此基礎(chǔ)上，驗證EPO對腦白質(zhì)損傷的保護(hù)作用，通過檢測未成熟腦損傷后組蛋白去乙�；福℉DACs）及組蛋白去乙�；�1mRNA（HDAC1mRNA）表達(dá)水平變化，從表觀遺傳學(xué)方面探討未成熟腦損傷可能的相關(guān)機(jī)制。 材料與方法 孕鼠分為LPS組和生理鹽水（N.S）組，于孕15天分別腹腔注射LPS0.3mg/kg或等劑量N.S，繼續(xù)飼養(yǎng)至分娩，稱取新生鼠出生體重。5日齡新生大鼠隨機(jī)分為對照組、LPS組、HI組、LPS+HI組。根據(jù)是否采用EPO干預(yù)，將LPS+HI組分為LPS+HI+N.S組、LPS+HI+EPO組。 缺氧缺血性腦損傷模型參照Rice等的方法并略加改進(jìn)。采用乙醚吸入麻醉，分離并雙結(jié)扎左頸總動脈，中間剪斷左頸總動脈，縫合皮膚傷口后放回鼠籠恢復(fù)1h，而后將其放入濕化、含氧氣濃度為8%的36℃恒溫箱內(nèi)40min即制成腦缺氧缺血模型，即HI組、LPS+HI組。對照組及LPS組動物只分離左頸總動脈，不進(jìn)行動脈結(jié)扎和缺氧處理。干預(yù)組在HI前4h和HI后立即腹腔內(nèi)注射EPO（5000U/kg）或等劑量N.S，每天用藥1次，持續(xù)應(yīng)用至HI后第4天（共5次）。 HI后6h、24h、7d處死新生鼠，留取腦組織。ELISA方法檢測腦組織中TNF-a及HDACs含量，免疫組化法檢測MAP-2的表達(dá)及HI后7d（即12日齡）腦組織MBP蛋白含量，，MAP-2mRNA及HDAC1mRNA含量采用Real Time PCR方法檢測。 結(jié)果 1.不同處理組孕鼠及新生大鼠一般情況比較 N.S組與LPS組孕鼠活動量、飲食、仔鼠死產(chǎn)率等無差異，兩組均未出現(xiàn)早產(chǎn)、死胎等。N.S組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重（6.560.33g）與LPS組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重（6.350.37g）相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.598，P=0.123）。 2. HI后TNF-a、MBP表達(dá)情況 HI后6h及24h，LPS+HI組新生大鼠腦組織TNF-a含量高于另外三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），而其余三組之間相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。HI后7d，LPS+HI組的MBP表達(dá)水平最低，與其他組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均0.05），另三組之間差異無統(tǒng)計學(xué)差異。 3. HI后MAP-2、MAP-2mRNA表達(dá)的變化 LPS+HI組MAP-2免疫組化染色在HI后24h出現(xiàn)散在壞死灶，其余3組均未出現(xiàn)壞死灶。LPS+HI組MAP-2mRNA在損傷后6h檢測到表達(dá)降低，后逐漸升高，與另外三組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。 4. EPO對未成熟腦損傷后的保護(hù)作用 HI后7d，LPS+HI+EPO組MBP的IOD值(131.592.24)明顯高于LPS+HI+N.S組(103.363.62)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 5.未成熟腦損傷后表觀遺傳學(xué)變化 HI后6h、24及7d，LPS+HI組HDACs及HDAC1mRNA的表達(dá)水平均最高，與其他組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均0.05），另三組之間差異無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論 1.宮內(nèi)亞臨床感染對新生大鼠缺氧缺血后腦損傷具有增敏作用。 2. EPO對未成熟腦損傷后的腦白質(zhì)具有保護(hù)作用。 3.宮內(nèi)感染聯(lián)合生后缺氧缺血所導(dǎo)致未成熟腦神經(jīng)損傷的機(jī)制與表觀遺傳學(xué)改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：未成熟腦 亞臨床感染 缺氧缺血 表觀遺傳 促紅細(xì)胞生成素
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R722.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞10-11
• 圖表清單11-12
• 1 引言12-14
• 2 材料與方法14-21
• 3 結(jié)果21-24
• 4 討論24-30
• 5 結(jié)論30-31
• 6 附圖31-37
• 7 參考文獻(xiàn)37-42
• 早產(chǎn)兒腦損傷與表觀遺傳學(xué)42-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：983345