本文關鍵詞：WT1基因定量分析在兒童急性白血病MRD檢測中的研究

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【摘要】：目的： 采用實時熒光定量PCR(RQ-PCR)方法檢測WT1基因在急性白血病患兒外周血和骨髓中的表達,探討WT1基因在檢測微小殘留病(minimal residual disease,MRD)中的價值。 方法： 采用實時熒光定量PCR方法,檢測23例初治急性白血病患兒、80例次完全緩解患兒外周血及骨髓中WT1基因的表達水平,以10例非腫瘤患兒為正常對照；流式細胞術檢測MRD,并同時觀察白血病患兒疾病狀態(tài)。23例初治急性白血病患兒包括16例急性淋巴細胞白血病(ALL)及7例急性粒細胞白血病(AML),其中初治ALL組于治療前、治療第15天、33天及3個月,初治AML組于治療前、治療第15天、1個月、3個月分別采集外周血和骨髓標本,檢測WT1表達。80例次完全緩解組患兒(ALL56例次,AML24例次)于治療第3個月、6個月及12個月分別采集外周血和骨髓檢測WT1表達陽性率。 結果： 1、正常對照組兒童外周血及骨髓WT1表達陽性率均為0,初治白血病組患兒外周血及骨髓WT1表達陽性率均為65.2%,初治白血病組外周血及骨髓WT1的表達均明顯高于正常對照組(p=0.001)。ALL和AML外周血WT1表達陽性率比較,骨髓WT1表達陽性率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p=0.533)。完全緩解患兒治療第3個月、6個月外周血及骨髓WT1表達陽性率明顯高于第12個月(p均0.05)。2、初治ALL患兒治療前、治療第15天、33天及3個月外周血WT1表達量分別為0.53±0.14、0.24±0.13、0.18±0.05、0.15±0.11,各組間差異具有統(tǒng)計學意義(F=24.68,p0.001)；治療第15天、33天及3個月WT1表達量明顯低于治療前(p均0.05),第15天、33天及3個月兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。初治ALL患兒治療前、15天、33天及3個月骨髓WT1表達量分別為0.72±0.14、0.16±0.06、0.12±0.02、0.12±0.05,各組間差異具有統(tǒng)計學意義(F=135.27,p0.001),治療第15天、33天及3個月WT1表達量明顯低于治療前(p均0.05)。治療第15天、33天及3個月兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)所有初治ALL患兒皆于33天達完全緩解。3、初治AML患兒治療前、15天、1個月及3個月外周血WT1表達量分別為0.70±0.07、0.20±0.06、0.18±0.05、0.15±0.06,各組間差異具有統(tǒng)計學意義(F=139.29,p0.001),治療第15天、33天及3個月WT1表達量明顯低于治療前(p均0.05)治療第15天、33天及3個月兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。初治AML患兒治療前、治療第15天、1個月及3個月患兒骨髓WT1表達量分別為0.87±0.04、0.24±0.05、0.21±0.05、0.18±0.10,各組間差異具有統(tǒng)計學意義(F=241.29,p0.001),治療第15天、33天及3個月WT1表達量明顯低于治療前(p均0.05)。治療第15天、33天及3個月兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。全部初治AML患兒皆于1～2個月內獲得完全緩解。4、初治ALL患兒外周血WTl表達量與MRD成正相關,(r=0.999,p0.001)；初治ALL患兒骨髓WT1表達量與MRD成正相關(r=0.997,p0.001)。5、3例復發(fā)白血病患兒復發(fā)前3個月WT1水平上升。 結論： 1、實時熒光定量PCR方法檢測白血病患兒WTl表達簡便易行、準確性高、特異性好。2.WT1基因在非腫瘤兒童外周血及骨髓均不表達,而在急性白血病治療前高表達。3.初治急性白血病患兒誘導緩解化療后WT1表達水平明顯低于初治時。4.WT1陽性率隨著治療時間的延長明顯下降。5.ALL患兒外周血及骨髓中WT1表達量與流式細胞儀檢測的MRD呈正相關。對急性白血病患兒外周血及骨髓中WT1基因表達進行定量分析,可用于MRD的監(jiān)測。
【關鍵詞】：WT1 急性白血病 微小殘留病 實時熒光定量PCR
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• Abstract5-12
• 引言12-13
• 第1章 材料與方法13-20
• 1.1 材料13-15
• 1.1.1 研究對象13
• 1.1.2 實驗試劑13-14
• 1.1.3 實驗儀器14-15
• 1.2 WT1定量分析方法15-18
• 1.2.1 標本采集與保存15
• 1.2.2 總RNA的提取15-16
• 1.2.3 RNA濃度檢測及鑒定16
• 1.2.4 cDNA的合成16-17
• 1.2.5 PCR反應17-18
• 1.3 流式細胞儀MRD檢測18
• 1.4 數(shù)據(jù)處理18-19
• 1.5 統(tǒng)計學處理19-20
• 第2章 結果20-32
• 2.1 熒光定量PCR方法的準確性和特異性檢測20-22
• 2.1.1 引物特異性檢測20-21
• 2.1.2 擴增曲線21
• 2.1.3 溶解曲線21-22
• 2.2 急性白血病與正常對照組WT1表達陽性率比較22
• 2.2.1 急性白血病與正常對照組外周血WT1表達陽性率比較22
• 2.2.2 急性白血病與正常對照組骨髓WT1表達陽性率比較22
• 2.3 初治ALL與AML患兒WT1表達陽性率比較22-23
• 2.4 完全緩解組WT1表達陽性率比較23-25
• 2.4.1 ALL完全緩解患兒治療不同時間外周血WT1表達陽性率比較23
• 2.4.2 AML完全緩解患兒治療不同時間外周血WT1表達陽性率比較23-24
• 2.4.3 ALL完全緩解患兒治療不同時間骨髓WT1表達陽性率比較24
• 2.4.4 AML完全緩解患兒治療不同時間骨髓WT1表達陽性率比較24-25
• 2.5 初治急性白血病患兒不同時期WT1表達水平比較25-29
• 2.5.1 ALL患兒不同時間外周血WT1表達水平比較25-26
• 2.5.2 ALL患兒不同時間骨髓WT1表達水平比較26-27
• 2.5.3 AML患兒不同時間外周血WT1表達水平比較27-28
• 2.5.4 AML患兒不同時間骨髓WT1表達水平比較28-29
• 2.6 初治組WT1定量水平與流式細胞術檢測MRD相關性29-30
• 2.6.1 初治ALL外周血WT1定量水平與流式細胞術檢測MRD關系29
• 2.6.2 初治ALL骨髓WT1定量水平與流式細胞術檢測MRD關系29-30
• 2.7 急性白血病治療療效觀察和復發(fā)患兒WT1表達30-32
• 第3章 討論32-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-37
• 綜述37-53
• 綜述參考文獻47-53
• 攻讀學位期間的研究成果53-54
• 致謝54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 成楓;馮獻啟;趙洪國;楊頡;楊X;;WT1基因及蛋白在急性髓性白血病的表達及臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2010年13期

2 張科花;李廣倫;劉竹珍;楊頡;高順姬;;急性髓細胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表達及意義[J];齊魯醫(yī)學雜志;2011年04期

3 韓潔;朱曉華;高怡瑾;楊毅;吳s，

本文編號：974152