本文關(guān)鍵詞：上海地區(qū)兒童流感病毒的分子流行病學(xué)研究

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【摘要】：流感病毒是引起人類急性呼吸道感染疾病的主要病因,人類普遍易感。由于流感病毒易發(fā)生抗原變異,每年都可在全球發(fā)生季節(jié)性的流行。流感每年可引起全球大約5%-20%人群感染,導(dǎo)致300-500萬重癥病例和25-50萬死亡病例。20世紀(jì)人類歷史曾記載過三次流感大流行,其中1918年的西班牙流感最為嚴(yán)重,導(dǎo)致全球近三分之一人口的感染,死亡人數(shù)達(dá)5000萬。世界衛(wèi)生組織(WHO)從1957年起就開始對流感病毒的流行進(jìn)行全球化監(jiān)測,以應(yīng)對隨時可能出現(xiàn)的流感暴發(fā)和大流行。 流感病毒根據(jù)其核蛋白的不同可以分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。其中甲型流感病毒的致病力最強(qiáng),也更容易引起較為嚴(yán)重的疾病,乙型流感病毒只能感染人類,致病性相對較低,丙型流感病毒很少造成流行,往往只是在兒童中引起輕微的上呼吸道感染。國外的研究顯示兒童是流感病毒的易感人群,也是社區(qū)傳播流感病毒的主要人群。而且,兒童流感可更易發(fā)生并發(fā)癥,導(dǎo)致更高的住院率和疾病負(fù)擔(dān)。但是國內(nèi)及上海地區(qū)鮮有兒童流感的流行病學(xué)監(jiān)測報(bào)道。流感病毒監(jiān)測的主要內(nèi)容包括流行趨勢、流行株的抗原進(jìn)化和變異以及耐藥性。基于兒童流感的重要性以及國內(nèi)兒童流感研究的差距,以及2009年6月起全球進(jìn)入新型甲型H1N1流感大流行的背景,我們于2009年6月-2012年5月對上海地區(qū)兒童流感進(jìn)行分子流行病學(xué)監(jiān)測研究,對本地區(qū)兒科人群中流感病毒流行株的血凝素(Hemagglutinin, HA)、M2基質(zhì)蛋白和神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase, NA)片段的相關(guān)位點(diǎn)進(jìn)行基因序列分析,研究本地區(qū)兒童流感病毒抗原進(jìn)化規(guī)律,監(jiān)測本地區(qū)兒童流感病毒對抗病毒藥物的耐藥現(xiàn)況。為本地區(qū)兒童流感的合理防治提供科學(xué)依據(jù)。 第一部分 2009年6月-2012年5月上海地區(qū)兒童流感的流行趨勢 目的：了解2009年6月-2012年5月上海地區(qū)兒童流感病毒的流行特征,為兒童流感防治策略提供依據(jù)。 方法：我們前瞻性地搜集2009年6月至2012年5月期間復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院門診因流感樣疾病就診患兒的鼻咽拭子或者咽喉拭子標(biāo)本,采用一步法實(shí)時熒光定量RT-PCR檢測季節(jié)性甲型H3N2和H1N1病毒、乙型流感病毒以及新型甲型H1N1流感病毒。 結(jié)果：連續(xù)三年共有3475例患兒入選,其中978(28.1%)例被確診感染流感病毒。978份流感病毒陽性標(biāo)本中,甲型流感病毒陽性共577(59.0%)份,包含344份季節(jié)性甲型H3N2、222份新型甲型H1N1和4份季節(jié)性甲型H1N1(其中3份為新型甲型H1N1與季節(jié)性甲型H3N2混合感染),此外還包含7份甲型流感病毒未分出亞型的標(biāo)本,乙型流感病毒陽性共有421(43.0%)份；其中20(2.0%)份為甲型和乙型流感病毒均檢測陽性的標(biāo)本。 結(jié)論：2009年6月至2012年5月期間,上海地區(qū)每年都會發(fā)生流感病毒在兒童中暴發(fā)流行,流行季節(jié)可以發(fā)生在秋季、冬季和春季,季節(jié)性甲型H3N2、新型甲型H1N1及乙型流感病毒交替流行。為了更好的防治兒童流感,我們建議流感疫苗在秋季入學(xué)前接種。 第二部分 上海地區(qū)兒童甲型H3N2流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律和耐藥研究 目的：監(jiān)測甲型H3N2病毒株的血凝素((hemaagglutinin, HA)抗原位點(diǎn)進(jìn)化規(guī)律以及對抗病毒藥物的耐藥情況。 方法：根據(jù)時間分布隨機(jī)選取71株甲型H3N2病毒的,對其HA1片段、M2基質(zhì)蛋白和神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase, NA)部分片段進(jìn)行基因測序。與疫苗株比較分析HA抗原位點(diǎn)的基因進(jìn)化特征,檢測M2和NA介導(dǎo)抗病毒藥物耐藥的氨基酸位點(diǎn)突變標(biāo)志。 結(jié)果：與當(dāng)季疫苗株相比,每年甲型H3N2流行株至少發(fā)生3個HAl抗原決定區(qū)域相關(guān)氨基酸位點(diǎn)的突變,系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示不同季節(jié)流行株分屬于不同譜系(Clade),新的譜系往往在當(dāng)季流行的高峰臨近結(jié)束時出現(xiàn)。71株甲型H3N2病毒均攜帶介導(dǎo)對金剛烷胺耐藥的S31N突變標(biāo)志,未發(fā)現(xiàn)甲型H3N2病毒株攜帶對奧司他韋耐藥的分子標(biāo)志。 結(jié)論：甲型H3N2流感病毒的HA抗原區(qū)域存在持續(xù)的氨基酸位點(diǎn)突變,可能引起流行株抗原性發(fā)生變化,導(dǎo)致人群中暴發(fā)流行,影響季節(jié)性疫苗的保護(hù)效果。甲型H3N2流感病毒對金剛烷胺的耐藥率已達(dá)100%,尚未發(fā)現(xiàn)奧司他韋耐藥株,不宜再使用含有金剛烷胺的藥物來防治流感。 第三部分 上海地區(qū)兒童新型甲型H1N1流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律和耐藥研究 目的：監(jiān)測新型甲型H1N1流感病毒HA抗原區(qū)抗原位點(diǎn)變異及其基因進(jìn)化,以及攜帶H275Y突變特征的奧司他韋耐藥株。 方法：根據(jù)時間分布隨機(jī)選取37株新型甲型H1N1病毒株,對其HA1片段和NA部分片段進(jìn)行基因測序。與疫苗株比較分析HA抗原位點(diǎn)的基因進(jìn)化特征,檢測介導(dǎo)奧司他韋耐藥的氨基酸位點(diǎn)突變標(biāo)志。 結(jié)果：新型甲型H1N1病毒HA序列分析顯示上海地區(qū)流行株與疫苗株高度同源,僅發(fā)現(xiàn)E區(qū)抗原位點(diǎn)S83P突變。未檢測到NA基因片段具有H275Y和N295S特征突變的奧司他韋耐藥株。 結(jié)論：上海地區(qū)兒童在2009-2011年經(jīng)歷了2次新型甲型H1N1流感的暴發(fā)流行波以后,2012年未出現(xiàn)流行。上海地區(qū)流行的新型甲型H1N1與疫苗株抗原位點(diǎn)高度同源,尚未發(fā)現(xiàn)奧司他韋耐藥株。 第四部分 上海地區(qū)兒童乙型流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律和耐藥研究 目的：了解2009年5月至2012年6月上海地區(qū)兒童乙型流感病毒的流行譜系,監(jiān)測其HA抗原位點(diǎn)的分子突變以及與奧司他韋耐藥有關(guān)的變異株流行情況。 方法：隨機(jī)選取55株乙型流感病毒代表株進(jìn)行HA和NA基因測序,從GENEBANK上下載不同區(qū)域和不同時間乙型流感流行株的HA基因序列,構(gòu)建分子進(jìn)化樹。用MEGA4.0軟件鄰接法(Neighbor-Joining NJ)繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹。 結(jié)果：55株乙型流感病毒中有36株屬于Victoria系,19株為Yamagata系。Victoria系分為兩個Clade A和Clade B兩個譜系,Clade A以B/Malaysia/2506/04為代表,主要包括2009年-2010年的流行株,Clade B以疫苗株B/Brisbane60/08為代表,主要包括2010-2012流行株。而Yamagata系所有的病毒株抗原性與B/Florida/4/06相似。在55株乙型流感病毒株中,未檢測到攜帶奧司他韋耐藥的分子標(biāo)志。 結(jié)論：乙型流感病毒存在Victoria系和Yamagata系共同流行,尚未發(fā)現(xiàn)乙型流感病毒對奧司他韋耐藥。
【關(guān)鍵詞】：流感病毒 流行特征 血凝素 抗原位點(diǎn) 基因進(jìn)化 耐藥 上海 兒童
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 摘要5-10
• Abstract10-15
• 引言15-20
• 參考文獻(xiàn)18-20
• 第一部分：2009年6月至2012年5月上海地區(qū)兒童流感病毒的流行趨勢20-29
• 前言20
• 研究材料和方法20-24
• 結(jié)果24-28
• 討論28-29
• 第二部分：上海地區(qū)兒童甲型H3N2流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律及耐藥特征29-39
• 前言29-30
• 研究材料和方法30-33
• 結(jié)果33-34
• 討論34-39
• 第三部分：上海地區(qū)兒童新型甲型H1N1流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律及耐藥株監(jiān)測39-46
• 前言39-40
• 研究材料和方法40-41
• 結(jié)果41-43
• 討論43-46
• 第四部分：上海地區(qū)兒童乙型流感病毒的抗原進(jìn)化規(guī)律及耐藥分析46-52
• 前言46
• 研究材料和方法46-48
• 結(jié)果48-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52
• 創(chuàng)新點(diǎn)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 附錄58-91
• 致謝91-92

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;供求[J];資源再生;2010年01期

，

本文編號：912542