本文關(guān)鍵詞：氫氣對氧化損傷腸上皮細(xì)胞的保護作用及機制的研究

  更多相關(guān)文章： 氫氣 Nrf2-ARE信號通路 氧化應(yīng)激反應(yīng) 抗氧化 新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎

【摘要】：目的探討氫氣對氧化損傷腸上皮細(xì)胞的保護作用及其分子機制,旨為臨床上新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)的防治提供可能的治療靶點。方法以人和大鼠腸上皮細(xì)胞Caco-2細(xì)胞株與IEC-6細(xì)胞株為研究對象,根據(jù)是否采用抗霉素A和氫氣處理,將上述細(xì)胞分為3組:抗霉素A(-)/H2(-);抗霉素A(+)/H2(-);抗霉素A(+)/H2(+),分別為對照組(antimycin A 0μg/ml,H2 0mM)、抗霉素A組(antimycinA 30μg/ml,H2 0mM)及氫氣組(antimycinA 30μg/ml,H2 0.6mM)。利用Western Blot、Real-time PCR、流式細(xì)胞儀、酶聯(lián)免疫吸附法實驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等研究方法檢測各組以下指標(biāo):(1)氧自由基(O2-?、H2O2和?OH)水平;(2)線粒體膜電位;(3)氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)和8-羥基鳥嘌呤(8-OH-G);(4)細(xì)胞凋亡率和乳酸脫氫酶(LDH)活性;(5)促炎癥因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)、抗炎癥因子(IL-10)、轉(zhuǎn)錄因子核因子-E2相關(guān)因子2(Nrf2)及其下游靶基因(HO-1、SOD、Cat、GPx)表達(dá);(6)磷酸化Nrf2蛋白表達(dá)。結(jié)果與抗霉素A組比較,氫氣可以顯著降低由抗霉素A誘導(dǎo)的氧化損傷,表現(xiàn)為降低細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平(O2-?、H2O2和?OH分別為抗霉素A組的0.236倍、0.456倍和0.124倍),使線粒體膜電位升高,顯著降低細(xì)胞內(nèi)氧化代謝產(chǎn)物的含量,而且降低細(xì)胞的凋亡率(對照組、抗霉素A組、氫氣組細(xì)胞凋亡率分別為5.8%、60.1±5.89%、23.7±3.48%)及乳酸脫氫酶(LDH)活性。另外,氫氣處理可以降低甲萘醌和Fenton反應(yīng)誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞的凋亡率及乳酸脫氫酶活性。最后,氫氣處理可以增加轉(zhuǎn)錄因子Nrf2磷酸化水平,并且氫氣組中炎癥因子的含量較抗霉素A組顯著下降。在抗霉素A組中,Nrf2下游基因HO-1,SOD,Cat,GPx的表達(dá)都有所升高,而氫氣的處理使轉(zhuǎn)錄因子Nrf2下游靶基因表達(dá)顯著增強。結(jié)論氫氣能夠降低抗霉素A誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞的氧化損傷,表現(xiàn)為降低了細(xì)胞內(nèi)活性自由基含量,修復(fù)線粒體膜電位,降低氧化代謝產(chǎn)物,抑制細(xì)胞凋亡并降低細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶活性。氫氣的這一保護作用可能是通過調(diào)控Nrf2-ARE信號通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：氫氣 Nrf2-ARE信號通路 氧化應(yīng)激反應(yīng) 抗氧化 新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 全文縮略語中英文對照10-11
• 第一部分 氫氣對腸上皮細(xì)胞受氧化應(yīng)激后生成氧化代謝產(chǎn)物的影響以及對細(xì)胞凋亡和活性的作用11-28
• 前言11-13
• 實驗材料與方法13-17
• 實驗結(jié)果17-27
• 結(jié)論27-28
• 第二部分 氫氣對腸上皮細(xì)胞內(nèi)Nrf2-ARE信號通路的調(diào)控28-47
• 前言28-30
• 實驗材料和方法30-39
• 實驗結(jié)果39-46
• 結(jié)論46-47
• 第三部分 討論47-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄：綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-66
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66

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本文編號：902737