本文關鍵詞：ORMDL3單核苷酸多態(tài)性與兒童哮喘危險因素之間交互作用對兒童哮喘發(fā)病的影響

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【摘要】：研究背景：兒童哮喘是兒科系統(tǒng)中慢性疾病之一,盡管目前國內外衛(wèi)生醫(yī)療水平有了極大的提高,但研究顯示世界范圍內兒童哮喘發(fā)病率仍在逐年增長,對家庭、社會造成了巨大的負擔,目前有關哮喘的病因及發(fā)病機制一直是國內外研究的熱點。哮喘是由復雜的基因-基因及基因-環(huán)境引起的相關作用而發(fā)病的。到目前為止,研究顯示與哮喘相關的候選基因已超過200個,其中有43個已在多個人群中成功得到獨立重復實驗驗證。17號染色體血清類黏蛋白1樣蛋白3基因(oresomueo id 1-like protein 3,ORMDL3)是2007年Moffatt等首次用全基因組關聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)的一個新的哮喘候選基因。且多項研究結果顯示,ORMDL3基因僅與兒童期起病的哮喘相關,但對ORMDL3基因引發(fā)哮喘的發(fā)病機制尚不明確,普遍認為ORMDL3基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點調控ORMDL3基因表達水平,從而影響哮喘發(fā)生。ORMDL3與哮喘的關聯(lián)性已經(jīng)在多個人種的多個獨立重復研究中證實,但哮喘易感基因存在地區(qū)、種族和民族差異,這說明與某一人群哮喘發(fā)病相關的基因位點在其他人群中可能并不與哮喘相關。有研究發(fā)現(xiàn)位于ORMDL3臨近基因上的SNPrs7216389是哮喘最強烈的相關標記,此位點在蘇格蘭人、德國人、波多黎各人、墨西哥人、日本人和澳大利亞人等不同人種中均得到了證實；而在墨西哥兒童及美國黑人兒童中則為ORMDL3基因SNPrs12603332,rs 4378650。我國學者在研究ORMDL3基因與漢族哮喘相關性時,將SNP rs12603332及rs7216389進行基因分型后,對該基因在兩個位點不同基因型的正常個體和哮喘患者外周血中的表達進行檢測,證實調控ORMDL3基因表達水平的SNP位點可能是真正的易感位點,但由于這2個位點處于強烈的連鎖不平衡狀態(tài),尚不能確定哪個位點是真正的功能位點。另外,我國香港學者在對香港地區(qū)漢族兒童中ORMDL3基因SNP rs4378650進行研究時得出結論：ORMDL3基因SNP rs4378650被認為與兒童哮喘僅邊緣相關。而廣東地區(qū)如何,目前尚無研究。我們選擇了ORMDL3基因上2個SNP位點rs12603332、rs4378650進行多態(tài)性分析對廣東地區(qū)哮喘兒童可能具有重大收獲。2009年全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA)指出,影響兒童哮喘的主要因素有哮喘家族史、呼吸道病毒感染、特應性體質、母孕期吸煙史等,但由于生活環(huán)境因素的不同,各地兒童哮喘的發(fā)病率及高危因素亦有不同。在許多研究中哮喘家族史為最主要的危險因素,父母均患哮喘,其子女患哮喘的幾率是健康兒童的10倍,父母其中一方患有哮喘,其子女患病幾率高出健康兒童2-5倍。揭示了哮喘易感基因相對于其他影響兒童哮喘發(fā)病的危險因素更易導致哮喘的發(fā)生。流行病學調查顯示,哮喘患者中50%以上具有過敏史,患過敏性疾病使發(fā)生哮喘的危險增加30%,可見家族過敏史也是哮喘發(fā)病的主要危險因素之一。此外,父母過敏史會增加孩子發(fā)生呼吸道感染癥狀和哮喘的危險。研究顯示,哮喘患兒伴家族特應性病史者占32.6%,提示鼻炎、濕疹等特應性疾病同樣為哮喘的危險因素。母乳喂養(yǎng)對兒童是危險因素還是保護因素仍存在爭議,國外有研究通過出生隊列研究證實母乳喂養(yǎng)在有明顯遺傳家族史的哮喘兒童中有重要保護作用。而也有研究認為母乳喂養(yǎng)可增加兒童后期過敏原誘發(fā)或特應性疾病導致哮喘的風險,母親為特應性體質者這種影響尤為顯著。母親孕期吸煙是兒童哮喘發(fā)病的另一主要危險因素,胎兒期暴露于香煙煙霧環(huán)境中可影響胎兒氣道的發(fā)育,使嬰兒出生時氣道窄小,肺功能降低。某些食物變應原如牛奶、雞蛋、魚類等在胃腸道消化吸收,其變應原決定簇能導致炎性介質釋出、吸收進而直接作用于支氣管,誘發(fā)哮喘。呼吸道病毒感染是1～3歲兒童哮喘最重要的誘因,呼吸道病毒感染會破壞呼吸道上皮完整性、增加其通透性、導致對變應原敏感性增加；使氣道β2受體興奮性下調；破壞M2膽堿能受體功能,使膽堿能神經(jīng)反應性升高：使氣道β2受體興奮性下調；通過影響氣道各種炎性細胞因子參與支氣管哮喘發(fā)病機制調節(jié)。日本研究團隊曾報道,呼吸道病毒感染后,ORMDL3基因在體內表達明顯增高；近期研究結果顯示,17號染色體基因多態(tài)性與鼻病毒誘發(fā)的兒童哮喘密切相關,且鼻病毒感染患兒ORMDL3基因表達水平在外周血單核細胞中顯著升高,提示呼吸道病毒感染調控體內ORMDL3基因的表達水平,國外文獻報道,ORMDL3能引起一系列炎癥反應,進而導致哮喘的發(fā)生,進一步的說明了哮喘易感基因與呼吸道病毒感染共同作用促使哮喘的發(fā)生。這一結論為哮喘易感基因攜帶者日常護理及預防提供了理論依據(jù)。1997年,國外學者證實哮喘的發(fā)生和發(fā)展與飲食中多元不飽和脂肪酸(PUFAs)的增加以及飽和脂肪酸的消耗減少密切相關,提出w-6多聚不飽和脂肪酸在調節(jié)免疫反應以及炎癥反應中起到重要的作用。隨后,各國學者開始對脂質與哮喘的關系作出了研究。有研究顯示,磷脂酶A2 (PLA2)在細胞膜上水解產(chǎn)生花生四烯酸(AA)及Lyso-PC, AA作為增強血管及支氣管脂質形成的前炎性介質,在支氣管哮喘的炎性反應過程中起到重要的推動作用；Lyso-PC除了能導致肺損傷、增加毛細血管通透性、改變肺表面活性物質活性、誘導肥大細胞分泌和增加氣道高反應性外還可降低支氣管平滑肌上β腎上腺素敏感度；另外,Lyso-PC可增強細胞因子誘導干擾素γ在人T淋巴細胞中的表達以及生長因子基因在內皮細胞中的表達。近期對心血管疾病的研究報道顯示,載脂蛋白在炎性疾病中的改變比血漿脂質指標更為敏感。載脂蛋白可分為兩個子系統(tǒng)：apoB系統(tǒng),包括極低密度脂蛋白(VLDL-C),中間密度脂蛋白(IDL-C)以及低密度脂蛋白(LDL-C);載脂蛋白AI (apoAI)系統(tǒng),包括高密度脂蛋白(HDL-C)。 HDL-C運載周圍組織中的膽固醇,再直接通過膽汁從腸道排出或轉化為膽汁酸,體內HDL-C升高對機體起到保護作用。而VLDL-C、IDL-C、LDL-C升高則可造成體內膽固醇增多,血脂升高,進而產(chǎn)生動脈粥樣硬化及可導致氣道炎癥反應。另一方面,apoB通過抑制內生性纖維蛋白溶解以及刺激細胞因子的產(chǎn)生和炎癥反應增強纖維蛋白溶解系統(tǒng)作用,apoB與非過敏性喘息及炎癥有關。目的：1、通過調查問卷了解廣東祖籍兒童哮喘的相關高危因素；2、了解廣東祖籍漢族人群兒童哮喘ORMDL3基因多態(tài)性特點并探討其與哮喘危險因素之間交互作用對兒童哮喘發(fā)病的影響；3、分析脂質指標(溶血卵磷脂、載脂蛋白B)與哮喘兒童的ORMDL3基因型的相關性,探討ORMDL3基因是否對脂質代謝過程產(chǎn)生影響進而促進哮喘的發(fā)病,進而確定ORMDL3基因在哮喘發(fā)病中可能的作用機制。方法：采用多中心、大樣本、前瞻性病例對照研究方法,選取598例廣東籍兒童(哮喘組300例、對照組298例)。1、指導患兒家長填寫兒童哮喘危險因素問卷調查表,收集兩組問卷調查資料；2、抽取所有研究對象的靜脈血,從中提取基因組DNA及檢測溶血卵磷脂、載脂蛋白B水平；①通過TaqMan (Applied Biosystems)探針法進行SNP基因型分析；②通過酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測溶血卵磷脂、載脂蛋白B水平：3、采用卡方檢驗進行基因型和等位基因在兩組間分布的差異的比較分析；4、采用多分類Logistic回歸分析探索ORMDL3基因多態(tài)性與哮喘危險因素的交互作用對兒童哮喘的影響；5、采用t檢驗分析哮喘組及對照組溶血卵磷脂及β載脂蛋白水平的差異,采用方差分析比較不同基因型之間卵磷脂及β載脂蛋白水平的差異。結果：1、ORMDL3基因SNP rs12603332與廣東祖籍漢族兒童哮喘發(fā)病存在相關性,且CC基因型在哮喘病兒童中占據(jù)優(yōu)勢,而rs4378650與廣東祖籍漢族兒童哮喘發(fā)病無明顯相關性；2、ORMDL3基因SNP rs12603332 CC基因型與哮喘危險因素哮喘家族史(P=0.007, OR=1.845,95%CI=1.178-2.889)及呼吸道病毒感染史(P=0.007, OR =1.976,95%CI=1.206-3.235)有明顯相關性,與其他危險因素未見明顯相關性；3、ORMDL3基因SNP rs12603332 CC基因型、CT基因型、TT基因型均與哮喘家族史存在顯著正交互作用,OR分別為22.644(95%CI=9.390-54.606)、 33.500 (95%　CI=7.839-143.157)、11.167 (95%CI=1.319-94.559);4、SNP　rs12603332 CC基因型、CT基因型、TT基因型均與呼吸道病毒感染史存在顯著正交互作用,OR分別為32.476(95%CI=9.875-106.805)、12.667 (95%　CI=3.699-43.375)、7.917 (95%CI=0.909-68.945);5、哮喘組血清溶血卵磷脂、載脂蛋白B水平顯著高于對照組,CC基因型的溶血卵磷脂、載脂蛋白B水平顯著高于其余基因型。結論1、ORMDL3基因SNP rs12603332位點可能與廣東祖籍兒童哮喘相關,ORMDL3基因SNP rs 4378650與廣東祖籍兒童哮喘無明顯相關性。2、ORMDL3基因SNP rs12603332的CC基因型為兒童哮喘發(fā)病的危險因素,CT基因型、TT基因型與兒童哮喘無明顯相關性。3、在有哮喘家族史的哮喘患兒中ORMDL3基因SNP rs12603332的CC基因型出現(xiàn)頻率更高,SNP rs12603332的CC基因型的哮喘患兒可能更容易受到呼吸道病毒的侵襲進而致哮喘。4、相比本課題所選其他的哮喘危險因素,ORMDL3基因SNP rs12603332與哮喘家族史及呼吸道病毒感染史更易共同作用導致廣東祖籍兒童哮喘的發(fā)生。5、哮喘患兒血清Lyso-PC、apoB水平明顯高于對照組正常兒童,說明Lyso-PC及apoB可能干預哮喘發(fā)生的病理過程。6、攜帶ORMDL3基因CC基因型的哮喘患者其Lyso-PC、apoB顯著升高,提示血清中高Lyso-PC、apoB水平可能與ORMDL3基因SNP rs12603332共同作用導致廣東祖籍兒童哮喘的發(fā)生,ORMDL3表達水平增高可能導致脂質代謝的紊亂進而引發(fā)哮喘。
【關鍵詞】：ORMDL3基因 單核苷酸多態(tài)性 兒童哮喘 溶血卵磷脂 載脂蛋白B
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 第一章 前言18-33
• 第二章 研究對象與方法33-39
• 一、研究對象33-34
• 二、研究方法34-37
• 三、研究內容37
• 四、數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析方法37-39
• 第三章 結果與結論39-44
• 一、結果39-42
• 二、結論42-44
• 第四章 討論44-53
• 一、兒童哮喘的流行病學44
• 二、兒童哮喘與易感基因44-47
• 三、ORMDL3基因與哮喘危險因素47-49
• 四、兒童哮喘與脂質的關系49-51
• 五、總結51-53
• 參考文獻53-61
• 本研究的創(chuàng)新點61-62
• 本研究的不足之處62-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文63
• 致謝63-65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張有志,陳小東,張靜,陳臻;呼吸道病毒感染誘導哮喘急性發(fā)作的臨床分析[J];臨床肺科雜志;2005年06期

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本文編號：894053