發(fā)布時間：2017-09-16 23:15

  本文關(guān)鍵詞：乳鐵蛋白對脂多糖激活的U937細(xì)胞TLR4信號通路相關(guān)膜分子表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 乳鐵蛋白 脂多糖 U937細(xì)胞 Toll樣受體4 CD14 髓樣分化蛋白2

【摘要】：【目的】本研究旨在從蛋白質(zhì)和mRNA水平探索重組人乳鐵蛋白（Recombinant human lactoferrin，rhLF）對脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）活化的人單核巨噬細(xì)胞株U937細(xì)胞Toll樣受體4（Toll-likereceptor4，TLR4）通路相關(guān)膜分子TLR4、CD14及MD2表達(dá)的影響。 【方法】1、U937細(xì)胞經(jīng)10ng/ml佛波酯（Phorbol12-myristate13-acetate，PMA）誘導(dǎo)分化成熟后分為三個組，即正常對照組，LPS組（LPS100ng/ml）和rhLF干預(yù)組（給予LPS100ng/ml＋不同濃度的rhLF50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，500μg/ml）；2、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR方法分別檢測各組細(xì)胞TLR4、CD14及MD2mRNA的表達(dá)水平；3、應(yīng)用western免疫印跡方法分別檢測各組細(xì)胞TLR4、CD14及MD2蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。 【結(jié)果】1、采用10ng/ml PMA刺激U937細(xì)胞24h后，細(xì)胞停止增殖，，伸出偽足，變?yōu)槌示奂陨L的貼壁細(xì)胞，呈典型的巨噬細(xì)胞形態(tài)；2、經(jīng)PMA誘導(dǎo)的正常對照組U937細(xì)胞有一定基礎(chǔ)量的TLR4、CD14及MD2mRNA表達(dá)，給予LPS刺激后三者的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2mRNA在50μg/ml rhLF干預(yù)組的表達(dá)水平與LPS組比較不存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml rhLF干預(yù)組呈濃度依賴性地降低了TLR4、CD14國家級臨床重點�？疲貞c市重點學(xué)科建設(shè)項目(編號：2010-53)及MD2mRNA的表達(dá)水平（P＜0.05）；3、經(jīng)PMA誘導(dǎo)的正常對照組的U937細(xì)胞有一定基礎(chǔ)量的TLR4、CD14及MD2蛋白質(zhì)表達(dá)，給予LPS刺激后三者的蛋白質(zhì)表達(dá)是水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2蛋白質(zhì)在50μg/ml rhLF干預(yù)組的表達(dá)水平與LPS組比較不存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml rhLF干預(yù)組呈濃度依賴性地降低了TLR4、CD14及MD2蛋白質(zhì)的表達(dá)水平（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2三者蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化趨勢與mRNA的表達(dá)水平變化趨勢一致。 【結(jié)論】1、U937細(xì)胞經(jīng)10ng/ml PMA誘導(dǎo)后分化成為貼壁的巨噬細(xì)胞；2、未給予LPS刺激的正常對照組U937細(xì)胞即有一定基礎(chǔ)量的TLR4、CD14及MD2mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)；3、在給予LPS刺激活化U937細(xì)胞后，TLR4、CD14及MD2三者mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)均顯著上調(diào)，提示TLR4信號通路相關(guān)膜分子TLR4、CD14及MD2的表達(dá)可能與TLR4跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活引發(fā)的過度放大炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，這為防治膿毒癥的發(fā)生發(fā)展提供了重要思路；4、rhLF干預(yù)組呈濃度依賴性地降低了TLR4、CD14及MD2三者mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，推測LF可通過下調(diào)TLR4信號通路相關(guān)膜分子TLR4、CD14及MD2的表達(dá)水平，參與抑制細(xì)胞下游級聯(lián)放大的炎癥信號傳遞，減輕內(nèi)毒素的損傷效應(yīng)；這是對LF有效抑制膿毒癥引起的過度免疫反應(yīng)機制的進一步補充，也為LF在治療新生兒膿毒癥中的應(yīng)用提供新的理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：乳鐵蛋白 脂多糖 U937細(xì)胞 Toll樣受體4 CD14 髓樣分化蛋白2
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-24
• 2 結(jié)果24-30
• 3 討論30-33
• 全文小結(jié)33-34
• 參考文獻34-38
• 文獻綜述38-45
• 參考文獻41-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文46-47

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本文編號：865853