本文關(guān)鍵詞：室間隔缺損血清候選蛋白標志物FN驗證研究

  更多相關(guān)文章： 先天性心臟病 室間隔缺損 纖維連接蛋白 生物信息學 生物標志物

【摘要】：先天性心臟病(Congenital Heart Disease, CHD)是人類最為常見的先天性畸形，是嬰幼兒期非感染死亡的首位病因。而室間隔缺損(ventricular septaldefect, VSD)是CHD中最為常見的一種先天性心臟畸形，在出生缺陷中占有重要地位。VSD的病因和發(fā)病機制十分復(fù)雜，可能涉及多種因素、多個基因和多條信號通路的改變，以往的研究主要集中在環(huán)境危險因素、遺傳基因等領(lǐng)域，但是要完整了解VSD發(fā)生的機制，必須要了解心臟在異常分化發(fā)育的過程中與之密切相關(guān)蛋白質(zhì)組及其功能。我們前期研究應(yīng)用同位素標記相對和絕對定量(iTRAQ)技術(shù)結(jié)合LC-MALDI-TOF/TOF方法篩選出21種與VSD相關(guān)的血清差異表達蛋白質(zhì)，其中VSD組較健康對照組表達量上調(diào)≥1.5倍的蛋白質(zhì)有13種，下調(diào)≤0.67倍的蛋白質(zhì)有8種。根據(jù)鑒定到肽段的匹配、置信度，纖維連接蛋白(Fibonectin,FN)很可能作為VSD患者血清候選蛋白標志物。本課題擬應(yīng)用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)技術(shù)對前期工作鑒定到的VSD患者血清候選蛋白標志物FN進行表達驗證，然后對其進行生物信息學分析，從蛋白組學角度探索VSD的發(fā)病機制，同時為應(yīng)用生物標志物在孕早期診斷CHD做出基礎(chǔ)工作。 目的：驗證纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)作為室間隔缺損血清蛋白標志物的可能性并對其進行生物信息學分析。方法：收集室間隔缺損(Ventricular septal defect,VSD)組、房間隔缺損(Atrial septal defect,ASD)組、法洛四聯(lián)癥(Tetralogy of Fallot,TOF)組和健康體檢組血清樣本各20例，應(yīng)用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA)檢測血清樣本中FN表達水平；利用生物信息學的方法對FN的基本理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能、代謝途徑，網(wǎng)絡(luò)調(diào)控等方面進行全面分析。結(jié)果：1.免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)N在VSD組、ASD組、TOF組和健康體檢組血清中均能檢測到，但在VSD組中的表達水平明顯高于其它三組(p0.05)。2. ELISA檢測顯示VSD組患者血清中FN濃度為(67.08±27.67)ug·L-1，ASD組患者為(37.65±15.07)ug·L-1、TOF組患者為(28.08±11.24)ug·L-1、健康體檢組為(31.15±11.18)ug·L-1，四組間差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；進一步進行兩兩比較，VSD組與其它三組差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)，而其它三組差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。3.生物信息學分析發(fā)現(xiàn)FN是分子量為250kDa亞單位組成的糖蛋白二聚體，是細胞外基質(zhì)中重要的細胞粘附分子，它的一條氨基酸鏈含有2386個氨基酸，262624.5Da, pI=5.46，具有調(diào)節(jié)細胞粘附、增殖、分化，促進細胞遷移、離子交換及信號轉(zhuǎn)導等功能。結(jié)論：纖維連接蛋白在VSD患者血清中的含量較高，其具有調(diào)節(jié)細胞粘附、增殖、分化，促進細胞遷移等生物學功能，有可能是VSD相關(guān)的血清候選標志物，，但其價值的評估尚待大樣本的臨床驗證。
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 室間隔缺損 纖維連接蛋白 生物信息學 生物標志物
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英漢縮略詞對照表10-13
• 前言13-18
• 參考文獻16-18
• 第一部分 VSD 血清候選蛋白標志物 FN 的表達驗證18-36
• 1 材料18-22
• 1.1 研究對象18
• 1.2 主要實驗試劑18-20
• 1.3 主要溶液配制20-21
• 1.4 主要實驗儀器21-22
• 2 方法22-27
• 2.1 血清樣本采集22
• 2.2 Western blot22-25
• 2.3 ELISA25-26
• 2.4 統(tǒng)計學分析26-27
• 3 結(jié)果27-30
• 3.1 病例與對照均衡性27
• 3.2 Western blot結(jié)果27-29
• 3.3 ELISA結(jié)果29-30
• 4 討論30-32
• 5 結(jié)論32-34
• 參考文獻34-36
• 第二部分 VSD 血清候選蛋白標志物 FN 生物信息學分析36-58
• 1 材料和方法36-37
• 1.1 主要用到的生物信息學數(shù)據(jù)庫及其分析軟件36
• 1.2 方法36-37
• 2 結(jié)果37-47
• 2.1 FN 的理化性質(zhì)和疏水區(qū)的檢索預(yù)測37-39
• 2.2 FN結(jié)構(gòu)域和功能域預(yù)測39-40
• 2.3 FN的功能性位點預(yù)測40
• 2.4 FN的空間結(jié)構(gòu)模型預(yù)測40-41
• 2.5 FN在不同發(fā)育階段表達豐度和組織表達豐度的預(yù)測41-43
• 2.6 FN的GO注釋43-44
• 2.7 FN參與的生物學通路44-46
• 2.8 FN相互作用的蛋白網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建46-47
• 3 討論47-52
• 3.1 FN的主要結(jié)構(gòu)48-49
• 3.2 FN 的主要功能49-50
• 3.3 FN 與心臟發(fā)育的關(guān)系50-51
• 3.4 FN 參與的通路與心臟發(fā)育的關(guān)系51-52
• 4 結(jié)論52
• 參考文獻52-58
• 綜述58-68
• 參考文獻65-68
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄68-69
• 致謝69-70

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本文編號：862202