本文關(guān)鍵詞：室間隔缺損血清候選蛋白標(biāo)志物FN驗(yàn)證研究

  更多相關(guān)文章： 先天性心臟病 室間隔缺損 纖維連接蛋白 生物信息學(xué) 生物標(biāo)志物

【摘要】：先天性心臟病(Congenital Heart Disease, CHD)是人類(lèi)最為常見(jiàn)的先天性畸形，是嬰幼兒期非感染死亡的首位病因。而室間隔缺損(ventricular septaldefect, VSD)是CHD中最為常見(jiàn)的一種先天性心臟畸形，在出生缺陷中占有重要地位。VSD的病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，可能涉及多種因素、多個(gè)基因和多條信號(hào)通路的改變，以往的研究主要集中在環(huán)境危險(xiǎn)因素、遺傳基因等領(lǐng)域，但是要完整了解VSD發(fā)生的機(jī)制，必須要了解心臟在異常分化發(fā)育的過(guò)程中與之密切相關(guān)蛋白質(zhì)組及其功能。我們前期研究應(yīng)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(iTRAQ)技術(shù)結(jié)合LC-MALDI-TOF/TOF方法篩選出21種與VSD相關(guān)的血清差異表達(dá)蛋白質(zhì)，其中VSD組較健康對(duì)照組表達(dá)量上調(diào)≥1.5倍的蛋白質(zhì)有13種，下調(diào)≤0.67倍的蛋白質(zhì)有8種。根據(jù)鑒定到肽段的匹配、置信度，纖維連接蛋白(Fibonectin,FN)很可能作為VSD患者血清候選蛋白標(biāo)志物。本課題擬應(yīng)用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)技術(shù)對(duì)前期工作鑒定到的VSD患者血清候選蛋白標(biāo)志物FN進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證，然后對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從蛋白組學(xué)角度探索VSD的發(fā)病機(jī)制，同時(shí)為應(yīng)用生物標(biāo)志物在孕早期診斷CHD做出基礎(chǔ)工作。 目的：驗(yàn)證纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)作為室間隔缺損血清蛋白標(biāo)志物的可能性并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。方法：收集室間隔缺損(Ventricular septal defect,VSD)組、房間隔缺損(Atrial septal defect,ASD)組、法洛四聯(lián)癥(Tetralogy of Fallot,TOF)組和健康體檢組血清樣本各20例，應(yīng)用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)血清樣本中FN表達(dá)水平；利用生物信息學(xué)的方法對(duì)FN的基本理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能、代謝途徑，網(wǎng)絡(luò)調(diào)控等方面進(jìn)行全面分析。結(jié)果：1.免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)N在VSD組、ASD組、TOF組和健康體檢組血清中均能檢測(cè)到，但在VSD組中的表達(dá)水平明顯高于其它三組(p0.05)。2. ELISA檢測(cè)顯示VSD組患者血清中FN濃度為(67.08±27.67)ug·L-1，ASD組患者為(37.65±15.07)ug·L-1、TOF組患者為(28.08±11.24)ug·L-1、健康體檢組為(31.15±11.18)ug·L-1，四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較，VSD組與其它三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)，而其它三組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)FN是分子量為250kDa亞單位組成的糖蛋白二聚體，是細(xì)胞外基質(zhì)中重要的細(xì)胞粘附分子，它的一條氨基酸鏈含有2386個(gè)氨基酸，262624.5Da, pI=5.46，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、增殖、分化，促進(jìn)細(xì)胞遷移、離子交換及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。結(jié)論：纖維連接蛋白在VSD患者血清中的含量較高，其具有調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、增殖、分化，促進(jìn)細(xì)胞遷移等生物學(xué)功能，有可能是VSD相關(guān)的血清候選標(biāo)志物，，但其價(jià)值的評(píng)估尚待大樣本的臨床驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 室間隔缺損 纖維連接蛋白 生物信息學(xué) 生物標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英漢縮略詞對(duì)照表10-13
• 前言13-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一部分 VSD 血清候選蛋白標(biāo)志物 FN 的表達(dá)驗(yàn)證18-36
• 1 材料18-22
• 1.1 研究對(duì)象18
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑18-20
• 1.3 主要溶液配制20-21
• 1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器21-22
• 2 方法22-27
• 2.1 血清樣本采集22
• 2.2 Western blot22-25
• 2.3 ELISA25-26
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 3 結(jié)果27-30
• 3.1 病例與對(duì)照均衡性27
• 3.2 Western blot結(jié)果27-29
• 3.3 ELISA結(jié)果29-30
• 4 討論30-32
• 5 結(jié)論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第二部分 VSD 血清候選蛋白標(biāo)志物 FN 生物信息學(xué)分析36-58
• 1 材料和方法36-37
• 1.1 主要用到的生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及其分析軟件36
• 1.2 方法36-37
• 2 結(jié)果37-47
• 2.1 FN 的理化性質(zhì)和疏水區(qū)的檢索預(yù)測(cè)37-39
• 2.2 FN結(jié)構(gòu)域和功能域預(yù)測(cè)39-40
• 2.3 FN的功能性位點(diǎn)預(yù)測(cè)40
• 2.4 FN的空間結(jié)構(gòu)模型預(yù)測(cè)40-41
• 2.5 FN在不同發(fā)育階段表達(dá)豐度和組織表達(dá)豐度的預(yù)測(cè)41-43
• 2.6 FN的GO注釋43-44
• 2.7 FN參與的生物學(xué)通路44-46
• 2.8 FN相互作用的蛋白網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建46-47
• 3 討論47-52
• 3.1 FN的主要結(jié)構(gòu)48-49
• 3.2 FN 的主要功能49-50
• 3.3 FN 與心臟發(fā)育的關(guān)系50-51
• 3.4 FN 參與的通路與心臟發(fā)育的關(guān)系51-52
• 4 結(jié)論52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 綜述58-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄68-69
• 致謝69-70

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