本文關(guān)鍵詞：γ-氨基丁酸A受體α1和γ2亞單位調(diào)質(zhì)對(duì)未成熟鼠反復(fù)驚厥發(fā)作的遠(yuǎn)期作用

  更多相關(guān)文章： 未成熟鼠 驚厥 GABA(A)受體 α1和γ2亞單位 調(diào)質(zhì) 氯硝西泮 氟馬西尼

【摘要】：目的：探討γ-氨基丁酸A受體（GABA(A)受體）調(diào)質(zhì)（激動(dòng)劑氯硝西泮(CZP)與拮抗劑氟馬西尼(FMZ)）對(duì)未成熟鼠反復(fù)驚厥(Recurrent seizures，RS)發(fā)作后，海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位的表達(dá)變化及其遠(yuǎn)期神經(jīng)行為學(xué)影響，以了解GABA(A)受體調(diào)質(zhì)在未成熟鼠驚厥腦損傷中的干預(yù)作用及其意義。 方法：出生5d（Postnatal day5，用P5表示，下同）的健康Waster大鼠160只，隨機(jī)分為五組：正常對(duì)照組（CONT組，n=32）、驚厥組（RS組，n=32）、驚厥后生理鹽水干預(yù)組（NS干預(yù)組，n=32）、驚厥后氯硝西泮干預(yù)組（CZP干預(yù)組，n=32），驚厥后氟馬西尼干預(yù)組（FMZ干預(yù)組，n=32）。除CONT組外其余四組驚厥動(dòng)物模型為每日反復(fù)吸入三氟乙醚誘導(dǎo)大鼠驚厥發(fā)作5次，每?jī)纱伍g隔時(shí)間2h，連續(xù)5d；CONT組大鼠進(jìn)行同樣的操作但不吸入三氟乙醚。CZP干預(yù)組和FMZ干預(yù)組大鼠于驚厥結(jié)束后１d起分別給予氯硝西泮6.0mg/(kg·d)、氟馬西尼1.0mg/(kg·d)干預(yù)，連續(xù)5d；NS干預(yù)組大鼠于驚厥結(jié)束后１d起給予等量生理鹽水灌胃干預(yù)，連續(xù)5d。在不同的時(shí)間通過(guò)負(fù)趨地性、前肢懸掛、平面翻正、懸崖回避實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、平衡木實(shí)驗(yàn)以及Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行評(píng)價(jià)其神經(jīng)行為情況；并將各組大鼠分別于末次干預(yù)后當(dāng)天（即P15）及20d（即P35）、55d（即P70）留取海馬組織，采用免疫印跡技術(shù)及熒光定量RT-PCR法分別測(cè)定大鼠海馬GABA(A)受體α1和γ2亞單位的表達(dá)。 結(jié)果：1、神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果：（1）懸崖回避實(shí)驗(yàn)：RS組及NS干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時(shí)間較CONT組均明顯延長(zhǎng)(P0.05)；CZP干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時(shí)間較NS干預(yù)組均明顯延長(zhǎng)(P0.05)；FMZ干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時(shí)間較NS干預(yù)組無(wú)顯著性差異(P0.05)；（2）負(fù)趨地性實(shí)驗(yàn)：RS組及NS干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時(shí)間較CONT組明顯延長(zhǎng)(P0.05)。CZP干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時(shí)間較NS干預(yù)組均明顯延長(zhǎng)(P0.05)；FMZ干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時(shí)間較NS干預(yù)組明比較無(wú)顯著性差異(P0.05)；（3）曠場(chǎng)試驗(yàn)表明，中央格停留時(shí)間CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組均明顯延長(zhǎng)(P0.05)；中央格停留時(shí)間FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組無(wú)顯著性差異；跨越方格數(shù)CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組均顯著減少(P0.01)。跨越方格數(shù)FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組無(wú)顯著性差異(P0.05)；（4）平衡木試驗(yàn)提示，RS組及NS干預(yù)組大鼠平均評(píng)分均明顯低于CONT組（P 0.05），CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組評(píng)分均明顯降低(P 0.05)。FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組評(píng)分無(wú)顯著性差異(P0.05)。 2、學(xué)習(xí)記憶能力（Morris水迷宮檢測(cè)結(jié)果）：（1）登臺(tái)潛伏期：經(jīng)過(guò)連續(xù)5天（P61-P65）定位航行試驗(yàn)，五組鼠的逃避潛伏期均呈逐漸縮短的趨勢(shì)。試驗(yàn)第3d和4d，RS組和NS干預(yù)組大鼠尋找平臺(tái)的時(shí)間明顯長(zhǎng)于CONT組(P0.05)；CZP干預(yù)組大鼠尋找平臺(tái)的時(shí)間明顯長(zhǎng)于NS干預(yù)組(P0.05)；第5d時(shí)RS組和NS干預(yù)組大鼠尋找平臺(tái)的時(shí)間均顯著長(zhǎng)于CONT組(P0.01)；CZP干預(yù)組大鼠尋找平臺(tái)時(shí)間顯著長(zhǎng)于NS干預(yù)組(P0.01)；FMZ干預(yù)組大鼠尋找平臺(tái)時(shí)間與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。（2）搜尋策略：CONT組大鼠多采用直線和趨向式策略，而RS組、NS干預(yù)組、CZP干預(yù)組和FMZ干預(yù)組大鼠則多以邊緣式和隨機(jī)式為主。（3）穿越平臺(tái)次數(shù)：RS組和NS干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)較CONT組均明顯減少(P0.05)；CZP干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)較NS干預(yù)組均明顯減少(P0.05)。FMZ干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。 3、Western blot檢測(cè)結(jié)果：隨著大鼠日齡的增長(zhǎng)，五組大鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位的蛋白表達(dá)水平均逐漸升高。末次干預(yù)后當(dāng)天（即P15），CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）；CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比明顯減少（P0.05）；FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比均略有升高，但無(wú)顯著性差異（P0.05）；末次干預(yù)后20d（即P35），CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較均明顯減少（P0.05）；FMZ干預(yù)組GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）；末次干預(yù)后55d（即P70），CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較均明顯減少（P0.05）。FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。 4、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：隨著各組大鼠日齡的增長(zhǎng)，各組大鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA的表達(dá)水平逐漸升高。末次干預(yù)后當(dāng)天（即P15）：CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1亞單位mRNA在海馬地表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少（P0.01）；CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體γ2亞單位mRNA在海馬地表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比無(wú)顯著性差異（P0.05）；FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比均略有升高，但無(wú)顯著性差異（P0.05）；末次干預(yù)20天（即P35）：CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少（P0.05）；FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）；末次干預(yù)后55d（即P70），CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少（P0.05）。FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平與NS干預(yù)組相比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。 結(jié)論：（1）化學(xué)致痙劑三氟乙醚可以誘導(dǎo)Waster大鼠反復(fù)驚厥，新生期大鼠反復(fù)驚厥后給予GABA(A)受體激動(dòng)劑CZP早期干預(yù)，將會(huì)對(duì)大鼠產(chǎn)生一定程度的腦損害，使大鼠生長(zhǎng)發(fā)育落后，神經(jīng)反射延遲，并產(chǎn)生成年期新環(huán)境適應(yīng)能力下降，以及遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)、記憶能力損害。 （2）未成熟大鼠反復(fù)驚厥后給予GABA(A)受體激動(dòng)劑CZP早期干預(yù)，，短期內(nèi)即明顯影響海馬GABA(A)受體α1和γ2亞單位相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，且該影響將長(zhǎng)期存在，并影響蛋白的表達(dá)，這可能對(duì)腦發(fā)育期神經(jīng)功能的發(fā)育產(chǎn)生長(zhǎng)期的影響。 （3）未成熟大鼠反復(fù)驚厥發(fā)作后給予GABA(A)受體激動(dòng)劑CZP早期干預(yù)，將導(dǎo)致其遠(yuǎn)期神經(jīng)行為學(xué)改變和認(rèn)知損害，也改變了成年期鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體亞單位α1和γ2亞單位的表達(dá)，這些亞單位表達(dá)的長(zhǎng)期改變參與到了成年期大鼠記憶損傷和學(xué)習(xí)的發(fā)生過(guò)程里，對(duì)腦功能產(chǎn)生遠(yuǎn)期影響。 （4）未成熟鼠反復(fù)驚厥發(fā)作后給予GABA(A)受體拮抗劑FMZ早期干預(yù)，未見(jiàn)明顯神經(jīng)行為學(xué)及GABA(A)受體α1和γ2亞單位表達(dá)的影響，推測(cè)可能與“FMZ拮抗作用的發(fā)揮主要體現(xiàn)在已用苯二氮卓類(lèi)藥物的情況下”有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：未成熟鼠 驚厥 GABA(A)受體 α1和γ2亞單位 調(diào)質(zhì) 氯硝西泮 氟馬西尼
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R742.1;R720.597
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-16
• 實(shí)驗(yàn)流程圖16-17
• 材料與方法17-32
• 結(jié)果32-45
• 討論45-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 綜述60-69
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文69-70
• 中英文對(duì)照縮略詞表70-71
• 致謝71-72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 索國(guó)玲;唐洪麗;;γ-氨基丁酸A型受體基因變異與癲沲關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國(guó)際兒科學(xué)雜志;2006年03期

2 湯繼宏 ,包仕堯;癲癇發(fā)作后海馬結(jié)構(gòu)GABA受體亞單位變化的研究[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2005年04期

3 湯繼宏;戚月鳳;朱玉霞;張兵兵;李巖;;氯硝西泮預(yù)處理對(duì)癲癇大鼠海馬區(qū)γ-氨基丁酸A受體γ2亞單位表達(dá)的影響[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2013年03期

4 朱海霞;蔡方成;張曉萍;;治療血濃度下抗癲vN藥對(duì)未成熟腦發(fā)育影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)科雜志;2007年03期

5 薄濤;陳勇;毛定安;朱曉華;李艷芳;;新生大鼠反復(fù)驚厥對(duì)腦內(nèi)γ-氨基丁酸A受體α1和β2亞單位表達(dá)的長(zhǎng)期影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年04期

本文編號(hào)：743103