本文關(guān)鍵詞：FGF-2調(diào)控C3H10細(xì)胞增殖及成軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：構(gòu)建成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2(fibroblast growth factor2, FGF-2)的真核表達(dá)質(zhì)粒，檢測(cè)其對(duì)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10增殖、成骨及成軟骨分化作用的影響。 方法：以質(zhì)粒pAd-Trace-FGF-2為模板，PCR擴(kuò)增目的基因FGF-2，經(jīng)BglⅡ、Sal I雙酶切后連接至pIRES2-EGFP表達(dá)載體中獲得pIRES2-EGFP-FGF-2真核表達(dá)質(zhì)粒，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到C3H10細(xì)胞中，另設(shè)pIRES2-EGFP空載體轉(zhuǎn)染組和空白細(xì)胞對(duì)照組。RT-PCR及Westernblot法檢測(cè)各處理組FGF-2的表達(dá)水平，MTT法和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞的增殖活力及細(xì)胞周期分布，RT-PCR檢測(cè)骨和軟骨相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)蛋白、Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因的mRNA水平表達(dá)變化，Western blot檢測(cè)Ⅱ型膠原（collagenⅡ,ColⅡ）的表達(dá)，甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)軟骨基質(zhì)的分泌情況。 結(jié)果：重組表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-FGF-2經(jīng)雙酶切及測(cè)序證實(shí)FGF-2正確插入相應(yīng)多克隆區(qū)域；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染C3H10細(xì)胞后，，F(xiàn)GF-2基因的mRNA和蛋白水平表達(dá)較兩個(gè)對(duì)照組明顯增高，細(xì)胞增殖活力明顯增高（P0.05），軟骨相關(guān)標(biāo)志物Ⅰ型膠原（collagenⅠ,ColⅠ）、ColⅡ、蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的mRNA水平較兩個(gè)對(duì)照組均顯著增高（P0.05），骨鈣蛋白（osteocalcin,OC）、骨保護(hù)素（osteoprotegerin,OPG）、骨橋蛋白（osteopontin,OPN）等成骨相關(guān)蛋白的mRNA轉(zhuǎn)錄水平無明顯升高（P＞0.05），Wnt信號(hào)通路相關(guān)分子Wnt5a及Fzd8mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低（P0.05），F(xiàn)GF-2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色呈現(xiàn)紫紅色異染。 結(jié)論：成功構(gòu)建FGF-2基因重組真核表達(dá)質(zhì)粒，F(xiàn)GF-2過表達(dá)可提高C3H10細(xì)胞的增殖活力，對(duì)C3H10細(xì)胞有成軟骨效應(yīng)，但短期成骨效應(yīng)不明顯，F(xiàn)GF-2對(duì)C3H10的生物學(xué)效應(yīng)可能與下調(diào)Wnt5a及受體Fzd8的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：FGF-2基因 真核表達(dá)載體 增殖 成骨分化 成軟骨分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R726.8
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 pIRES2-EGFP-FGF-2 的構(gòu)建與鑒定13-25
• 1 材料與方法13-19
• 2 結(jié)果19-23
• 3 討論23-25
• 第二部分 FGF-2 對(duì) C3H10 細(xì)胞增殖及成軟骨分化的研究25-37
• 1 材料與方法25-30
• 2 結(jié)果30-35
• 3 討論35-37
• 全文總結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間所發(fā)表的論文52-53

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本文編號(hào)：739415