本文關(guān)鍵詞：高通量測序分析乙肝疫苗接種失敗兒童及母親HBV全基因變異

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【摘要】：目的：探討乙型肝炎病毒（HBV）母嬰傳播的特征，以及乙肝疫苗接種失敗兒童及母親HBV全基因變異情況。 方法:選擇8對重慶地區(qū)乙肝疫苗接種失敗的兒童及其慢性HBV攜帶母親，從血清中提取HBV DNA，應(yīng)用PCR方法擴增HBV感染母子對的HBV基因組全長，將HBV全基因組打斷成小的片段，并通過PCR反應(yīng)在每個樣本的5’端加上特有的Barcode序列，膠回收250bp~500bp的目的片段。將膠回收產(chǎn)物進(jìn)行solexa高通量測序，并對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)和統(tǒng)計學(xué)分析。同時檢測HBV感染母子對乙肝兩對半、肝功能、HBV DNA等相關(guān)臨床指標(biāo)。 結(jié)果：（1）solexa測序平臺對HBV基因組測序的數(shù)據(jù)利用率約為39%，在HBV序列的nt900，nt1800和nt2600附近區(qū)域的測序深度低于其他區(qū)域。（2）HBV感染母子對之間的HBV全長序列總相對香農(nóng)熵（TRE）可明顯聚類，非母子對之間不能聚類；母子對HBV序列同源性為99%-100%。（3）8對母子HBV基因型均為B+C混合型，其中6對優(yōu)勢基因型為B型，2對為C型，母子對優(yōu)勢基因型相同。（4）8例免疫失敗兒童在HBV全基因組各區(qū)段均有多態(tài)性顯著增高核苷酸位點，其中較集中的區(qū)域為HBV S區(qū)的nt200-300和nt700-800，Pre C區(qū)nt1814-1901，C區(qū)的nt1950-2100，P區(qū)的nt2650-2850。（5）所有兒童均在“a”決定簇存在多態(tài)性顯著增高位點；8對母子中“a”決定簇區(qū)多態(tài)性顯著增高的氨基酸位點共有10個，，僅存在于兒童的有1個為aa143，僅存在于母親的有1個為aa124，發(fā)生優(yōu)勢氨基酸改變的位點有2個，分別為aa126位異亮氨酸突變?yōu)樘K氨酸（I126T），和aa145位甘氨酸突變?yōu)榫彼幔℅145R）。 結(jié)論：高通量測序技術(shù)可以檢測HBV低頻率變異，母嬰宮內(nèi)傳播可能是兒童HBV感染的重要途徑，是乙肝疫苗接種失敗的重要原因，重慶地區(qū)HBV感染者以B型為主導(dǎo)，乙肝疫苗免疫失敗兒童的HBV全基因組各區(qū)段均有多態(tài)性顯著增高位點，“a”決定簇區(qū)多態(tài)性顯著增高位點多數(shù)為母親傳播所致。
【關(guān)鍵詞】：高通量測序 乙型肝炎病毒 母嬰傳播 變異 免疫接種
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 符號說明5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-22
• 2 結(jié)果22-29
• 3 討論29-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 文獻(xiàn)綜述35-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：721495