本文關鍵詞：高游離脂肪酸環(huán)境下GLP-1對內皮細胞NO生成的影響及機制

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【摘要】：目的：研究胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide1, GLP-1)能否緩解棕櫚酸(PA)導致的人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVECs) NO生成受損,并初步探討其作用機制。 方法：用不同濃度的PA (0,100μM,200μM,400μM)孵育HUVECs,硝酸酶還原法檢測培養(yǎng)液NO濃度,Western Blot檢測eNOS(Ser1177)的磷酸化水平,探討可能引起HUVECs的NO生成明顯受損的PA濃度。用不同濃度的GLP-1(0,1ng/ml,5ng/ml,10ng/ml)孵育HUVECs,檢測培養(yǎng)液NO濃度,Western Blot檢測eNOS(Ser1177)的磷酸化水平,摸索GLP-1的最佳有效濃度。用GLP-1干預PA孵育過的HUVECs,研究GLP-1能否緩解游離脂肪酸導致的HUVECs的NO生成受損,加或不加P13K抑制劑,探討其可能的作用機制。實驗分組如下：①對照組用含1%BSA的培養(yǎng)液；②PA組加入400μM PA;③PA+GLP-1組加入400μM PA+1ng/ml GLP-1;④PA+GLP-1+LY294002組加入400μM PA+lng/ml GLP-l+20μM PI3K抑制劑LY294002。各組取培養(yǎng)液測NO濃度,Western Blot檢測Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平。 結果：(1)HUVECs經濃度100μM、200μM、400μM、600μM的PA孵育后,隨PA濃度升高,培養(yǎng)液NO濃度降低,eNOS(Ser1177)的磷酸化水平下降,PA濃度在200μM或以上時,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。(2) HUVECs經濃度1ng/ml、5ng/m;、10ng/ml的GLP-1孵育后,培養(yǎng)液NO濃度增高,eNOS(Ser1177)的磷酸化水平升高,在1ng/ml處最明顯,與對照度相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3) HUVECs經對照組、PA組、PA+GLP-1組、PA+GLP-1+LY294002組干預后,PA+GLP-1組的培養(yǎng)液NO濃度、Akt (Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平較PA組均上升(P0.05),但培養(yǎng)液NO濃度、Akt (Ser473)磷酸化水平仍低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05); PA+GLP-1+LY294002組的培養(yǎng)液NO濃度、Akt (Ser473)磷酸化水平低于PA+GLP-1組,但培養(yǎng)液NO濃度、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平仍高于PA組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論：1、高游離脂肪酸可抑制eNOS的活性,減少血管內皮細胞NO的產生。2、正常情況下,GLP-1可上調eNOS活性,促進NO產生。3、GLP-1可部分逆轉高FFAs造成的內皮損傷,PI3K-Akt-eNOS通路的上調可能參與這一過程。
【關鍵詞】：GLP-1 游離脂肪酸 HUVECs NO 機制
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R723.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 目錄9-10
• 英漢縮略詞對照表10-11
• 第一章 前言11-14
• 第二章 材料和方法14-24
• 2.1 材料14-17
• 2.2 實驗方法17-24
• 第三章 實驗結果24-33
• 3.1 不同濃度PA對HUVECs的eNOS/NO的影響24-26
• 3.2 不同濃度GLP-1對HUVECs的eNOS/NO的影響26-29
• 3.3 高FFAs(PA 400μM)條件下GLP-1(1ng/ml)對HUVECs的eNOS/N #0的影響及其可能的信號通路29-33
• 第四章 討論33-38
• 第五章 結論38-39
• 第六章 下一步研究方向39-40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-57
• 參考文獻52-57
• 致謝57

【參考文獻】

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本文編號：691271