本文關(guān)鍵詞：人支氣管上皮細(xì)胞的獲取與培養(yǎng)

  更多相關(guān)文章： 支氣管上皮細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 鑒定 人

【摘要】：目的:建立可靠的人支氣管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法及鑒定技術(shù)。方法:手術(shù)切除的新鮮肺組織,去除支氣管外的其他組織,保留主支氣管和小的支氣管,使用PBS液充分沖洗后,去除多次的連接組織和淋巴結(jié),只保留氣管軟組織,并剪成1×1cm大小的碎片,加入含蛋白酶XIV的消化液中,4℃過(guò)夜消化,收集細(xì)胞懸液,接種在包被好TypeI/III膠原的培養(yǎng)瓶中,無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行原代培養(yǎng)。通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果:1.蛋白酶XIV消化分離支氣管上皮細(xì)胞可獲得較多單個(gè)支氣管上皮細(xì)胞,HE染色可見(jiàn)纖毛細(xì)胞、基細(xì)胞。2.分離的支氣管上皮細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好,1天后細(xì)胞逐漸貼壁,細(xì)胞小,分布均勻,多成圓形;3-4天后細(xì)胞開(kāi)始逐漸變大、呈多邊形;7-10天生長(zhǎng)旺盛,可見(jiàn)成片的扁平狀、多邊形,呈鋪路鵝卵石樣分布生長(zhǎng)。10天后生長(zhǎng)緩慢、停止生長(zhǎng),細(xì)胞逐漸老化,出現(xiàn)空泡。3.兔抗人的角蛋白8單克隆抗體鑒定原代培養(yǎng)的細(xì)胞,胞漿呈棕黃色著色。結(jié)論:1.蛋白酶XIV低溫過(guò)夜消化可獲得的較多單個(gè)支氣管上皮細(xì)胞。2.無(wú)血清培養(yǎng)基可提供滿意的支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)條件,提高細(xì)胞純度。3.角蛋白8單克隆抗體免疫組化染色可簡(jiǎn)單有效的鑒定支氣管上皮細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：支氣管上皮細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 鑒定 人
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 引言9-11
• 1．材料與方法11-19
• 1.1 組織來(lái)源11
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器械及儀器11-12
• 1.3 主要試劑及來(lái)源12-14
• 1.4 主要溶液配制14-16
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法與步驟16-19
• 2．結(jié)果19-26
• 2.1 HE染色19-20
• 2.2 臺(tái)盼藍(lán)染色20-21
• 2.3 形態(tài)學(xué)觀察21-24
• 2.4 免疫組化鑒定24
• 2.5 支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線24-25
• 2.6 細(xì)胞復(fù)蘇25-26
• 3．討論26-31
• 4．結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-37
• 綜述37-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 在讀期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文及參與課題49-51
• 致謝51-52

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 黃維琳;;人支氣管上皮細(xì)胞體外不同培養(yǎng)基培養(yǎng)效果比較[J];黔南民族醫(yī)專學(xué)報(bào);2007年04期

2 唐雋;馬玲國(guó);何發(fā)堯;張劍利;王躍建;;氣管黏膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)的初步實(shí)驗(yàn)研究[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2005年06期

3 湯葳,Albert Chan,Stanley Chik,Adrain Wu,鄧偉吾;細(xì)胞因子誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)嗜酸粒細(xì)胞趨化因子[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2005年01期

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本文編號(hào)：625548