發(fā)布時(shí)間：2017-07-31 00:06

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用iTRAQ技術(shù)篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達(dá)蛋白質(zhì)

  更多相關(guān)文章： 蛋白組學(xué) iTRAQ 癲癇 皮質(zhì)發(fā)育障礙

【摘要】：目的：本文旨在篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中差異性表達(dá)的蛋白,從而以尋找其生物學(xué)標(biāo)志物以及治療的潛在靶點(diǎn)。方法：以兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織(皮質(zhì)發(fā)育障礙組)以及創(chuàng)傷后因顱內(nèi)高壓術(shù)后的兒童正常腦組織(對(duì)照組)為對(duì)象。采用同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù)(isobaric tag for relative and absolute quantification, iTRAQ)結(jié)合雙向液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜(2D liquid chromatograph electrospray tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)來(lái)鑒定兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達(dá)蛋白,對(duì)所獲得差異性蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,從而篩選出具有潛在研究?jī)r(jià)值的候選蛋白。最后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡,免疫組化方法驗(yàn)證這些候選蛋白在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中的表達(dá)情況。結(jié)果：通過(guò)iTRAQ及2D-LC-MS/MS方法,一共鑒定出153種蛋白質(zhì)在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織及兒童正常腦組織中有表達(dá)差異(其中在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織中64種蛋白質(zhì)上調(diào),89種蛋白質(zhì)下調(diào)；P0.05)。通過(guò)GO (Gene ontology)功能分析提示153種差異性蛋白主要參與酶催化活性的調(diào)節(jié),蛋白質(zhì)功能相互作用網(wǎng)狀圖發(fā)現(xiàn)transferri(TF)-. apolipoprotein A1(APOA1)alpha-2-macroglobulin(A2M).ATPase(ATP6V 1 A).vimentin(VIM)處于網(wǎng)狀圖的交叉點(diǎn)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn),免疫印跡實(shí)驗(yàn)以及免疫組化實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證TF, APOA1,A2M,ATP6V1A以及VIM的表達(dá)水平,結(jié)果提示這5種候選蛋白在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織中的表達(dá)趨勢(shì)與質(zhì)譜結(jié)果趨勢(shì)一致。結(jié)論：采用iTRA Q結(jié)合2D-LC-MS/MS技術(shù),能夠有效地篩選出兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中差異表達(dá)的蛋白,從而在診斷及治療方面為該病提供了潛在的生物學(xué)靶點(diǎn)及方向。
【關(guān)鍵詞】：蛋白組學(xué) iTRAQ 癲癇 皮質(zhì)發(fā)育障礙
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-17
• 1.1 腦組織樣本收集12-13
• 1.2 iTRAO定量蛋白質(zhì)組學(xué)13-15
• 1.3 質(zhì)譜及生物信息學(xué)的分析15
• 1.4 驗(yàn)證候選蛋白的表達(dá)水平15-17
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)部分17
• 2 結(jié)果17-28
• 2.1 iTRAQ核素標(biāo)記分組及質(zhì)譜結(jié)果17-24
• 2.2 生物信息學(xué)分析結(jié)果24-26
• 2.3 mRNA水平的表達(dá)驗(yàn)證26
• 2.4 Western blot驗(yàn)證差異蛋白表達(dá)水平26-27
• 2.5 免疫組化驗(yàn)證候選蛋白的表達(dá)水平27-28
• 3 討論28-32
• 全文小結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 文獻(xiàn)綜述：iTRAQ技術(shù)及其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的運(yùn)用36-44
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 致謝44-45
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄45

【相似文獻(xiàn)】

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1 文明;晏勇;;皮質(zhì)發(fā)育障礙的分子生物學(xué)研究現(xiàn)狀[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2005年06期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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5 張進(jìn);;皮質(zhì)發(fā)育障礙大鼠海馬神經(jīng)元鈉通道和HVA鈣通道功能的研究[A];2006年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉照;皮質(zhì)發(fā)育障礙大鼠海馬神經(jīng)元鈉通道和鈣通道功能的變化[D];中南大學(xué);2006年

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3 李松;基質(zhì)金屬蛋白酶9在腦皮質(zhì)發(fā)育障礙中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 黃華;皮質(zhì)發(fā)育障礙的致癇機(jī)制及所致難治性癲癇的臨床治療研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 馬勛泰;皮質(zhì)發(fā)育障礙模型鼠大腦的病理特征和體視學(xué)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

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8 樹(shù)海峰;SVZ來(lái)源的神經(jīng)前體細(xì)胞參與皮質(zhì)發(fā)育障礙致癇機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 覃璐;應(yīng)用iTRAQ技術(shù)篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達(dá)蛋白質(zhì)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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10 郭為;骨形成蛋白-4在大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：596605