發(fā)布時(shí)間：2017-07-20 05:05

  本文關(guān)鍵詞：圓錐動(dòng)脈干畸形患兒TGFβ2基因序列分析及表達(dá)水平的研究

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【摘要】：先天性心臟病(簡(jiǎn)稱先心病)是我國(guó)兒童最常見(jiàn)的出生缺陷病之一,全球發(fā)病率約為9/1000,在我國(guó)已成為先天畸形的首位病種。圓錐動(dòng)脈干畸形是一類由于流出道發(fā)育異常導(dǎo)致的先天性心血管畸形,占全部先心病的30%,包括法洛四聯(lián)癥、右室雙出口、大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位、永存動(dòng)脈干、肺動(dòng)脈閉鎖等,可以導(dǎo)致新生兒時(shí)期出現(xiàn)低氧血癥和難以糾正的酸中毒,自然預(yù)后不佳。部分患兒經(jīng)過(guò)外科手術(shù)糾治后仍將存在一系列殘余問(wèn)題,從而影響患兒的生活質(zhì)量,并且給社會(huì)和家庭帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。 目前,普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為先心病是內(nèi)在遺傳易感因素和外界環(huán)境致畸因素共同作用的結(jié)果。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展,包括TGFβ2在內(nèi)的遺傳易感基因成為研究熱點(diǎn)。TGFβ2是高度保守TGFp超家族成員之一,具有多種生物學(xué)作用�；蚯贸男∈髸�(huì)導(dǎo)致心臟出現(xiàn)包括右室雙流出道、房室管畸形等多種圓錐動(dòng)脈干畸形,在維甲酸處理的小鼠胚胎中,內(nèi)源性TGFβ2表達(dá)降低,小鼠心臟出現(xiàn)流出道隔發(fā)育異常。Kubalak等研究發(fā)現(xiàn),RXRA敲除小鼠中TGFβ2表達(dá)升高,使得細(xì)胞凋亡增加,從而導(dǎo)致胚胎出現(xiàn)流出道發(fā)育的異常。推測(cè)TGFβ2基因很可能是圓錐動(dòng)脈干畸形的致病易感基因。然而,盡管動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TGFβ2基因與心臟的畸形發(fā)育有密切的相關(guān)性,但是人類圓錐動(dòng)脈干畸形與TGFβ2基因的相關(guān)研究還非常有限。 本課題擬研究TGFβ2基因在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒中的基因型,探尋可能導(dǎo)致圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生的突變或者單核苷酸多態(tài)性,以及分別從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平探究TGFβ2基因在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒流出道組織中的表達(dá)水平,并且與正常流出道組織中TGFβ2基因表達(dá)水平相比較,探討TGFβ2基因與人類圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生的關(guān)系,為進(jìn)一步深入研究圓錐動(dòng)脈干畸形的發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和立論基礎(chǔ)。第一部分圓錐動(dòng)脈干畸形患兒TGFβ2基因編碼區(qū)DNA序列分析 目的： 通過(guò)對(duì)圓錐動(dòng)脈干畸形患兒TGFβ2基因外顯子編碼區(qū)序列的檢測(cè),探尋可能存在的導(dǎo)致疾病發(fā)生的基因變異,明確TGFβ2基因是否為圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生的遺傳易感基因及其變異位點(diǎn)。 方法： 應(yīng)用PCR技術(shù)以及測(cè)序方法,選取400例確診為圓錐動(dòng)脈干畸形的患兒的外周血,檢測(cè)TGFβ2基因外顯子編碼區(qū)序列,分析編碼區(qū)序列的改變并探尋這些改變與圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生的關(guān)系。 結(jié)果： 入選的400例圓錐動(dòng)脈干畸形病人診斷分類包括法洛四聯(lián)癥、左室雙流出道、右室雙出口、大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位和肺動(dòng)脈閉鎖。對(duì)TGFβ2基因外顯子編碼區(qū)序列檢測(cè),400例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒血樣中有一例存在一個(gè)雜合變異c.597TC,此種變異位于第四外顯子,但是沒(méi)有引起所編碼氨基酸的改變,仍然為異亮氨酸,我們?cè)赨CSC數(shù)據(jù)庫(kù)中并未查到此種變異,認(rèn)為其為新發(fā)現(xiàn)的同義突變。 小結(jié)： 在400例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒TGFβ2基因外顯子編碼區(qū)序列檢測(cè)中,發(fā)現(xiàn)1例患兒存在一個(gè)同義突變,即c.597TC,編碼的氨基酸仍然為異亮氨酸。因此認(rèn)為,TGFβ2基因編碼區(qū)突變不是出生后兒童圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生的常見(jiàn)原因。 第二部分圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織TGFβ2基因mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 目的： 觀察TGFβ2基因mRNA在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織的表達(dá)水平,并比較與正常兒童表達(dá)量的差異,探討TGFβ2基因表達(dá)水平對(duì)人類心臟發(fā)育的影響。同時(shí)檢測(cè)正常胎兒心臟組織TGFβ2基因的表達(dá)水平,探尋TGFβ2基因在人類心臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)特點(diǎn)。 方法： 選取圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心肌流出道組織57例作為病例組,由5例正常兒童流出道心肌組織和13例成人流出道心肌組織作為對(duì)照組；20例胎兒正常心臟組織應(yīng)用于研究TGFβ2基因在人類心臟發(fā)育過(guò)程中的時(shí)序表達(dá)特點(diǎn)。所有組織經(jīng)過(guò)RNA提取,應(yīng)用real-time PCR檢測(cè)TGFβ2基因在人類心臟中的表達(dá)水平,運(yùn)用Mann-Whitney檢驗(yàn),認(rèn)為P0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.TGFβ2基因mRNA表達(dá)在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心肌組織中與正常對(duì)照中比較,其表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.TGFβ2基因mRNA在胎兒正常心臟組織中表達(dá)量明顯高于出生之后的圓錐動(dòng)脈干畸形患兒和正常對(duì)照。 3.TGFβ2基因mRNA在胎兒正常心臟中的表達(dá)水平,呈現(xiàn)出隨著胎齡的逐漸增大,表達(dá)水平逐漸降低的負(fù)相關(guān)趨勢(shì)。 小結(jié)： 1.TGFβ2基因mRNA表達(dá)水平在病例組和對(duì)照組中并無(wú)明顯差異。由于TGFβ超家族成員具有相似的分子結(jié)構(gòu)、表達(dá)方式和生物學(xué)作用模式,各亞型之間可發(fā)揮一定補(bǔ)償作用,提示TGFβ2基因?qū)A錐動(dòng)脈干畸形的產(chǎn)生機(jī)制并不是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)。本部分結(jié)果不能證明TGFβ2與人類CTD的發(fā)生具有明顯的關(guān)系。 2.明確TGFβ2在人類心臟發(fā)育過(guò)程中呈現(xiàn)一種時(shí)序性表達(dá)方式：TGFβ2基因表達(dá)在胚胎發(fā)育中明顯高于出生之后,且表達(dá)量與胎齡呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì),出生后的表達(dá)量維持在一定水平。 第三部分圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織TGFβ2基因蛋白表達(dá)水平檢測(cè) 目的： 觀察TGFβ2基因蛋白在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織的表達(dá)水平,并比較與正常兒童表達(dá)量的差異,探討TGFβ2蛋白表達(dá)水平在圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)生過(guò)程的作用機(jī)制。 方法： 選取12例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒和3例正常兒童心肌流出道組織作為研究對(duì)象,運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)TGFβ2基因蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。 結(jié)果： 本研究顯示,在人類心肌組織中,TGFβ2基因蛋白質(zhì)的表達(dá)水平在病例組與正常對(duì)照組中無(wú)明顯差異。 小結(jié)： TGFβ2蛋白在圓錐動(dòng)脈干畸形患兒中的表達(dá)水平與對(duì)照組并沒(méi)有明顯差異,不能證明TGFβ2與人類CTD的發(fā)生具有明顯的關(guān)系。目前的結(jié)果尚不能排除TGFβ2基因?qū)TD發(fā)生的影響,需要進(jìn)一步全面的研究。
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 圓錐動(dòng)脈干畸形 TGFβ2 基因突變 單核苷酸多態(tài)性 表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R725.4
【目錄】：

• 目錄3-4
• 縮略詞4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-13
• 引言13-15
• 第一部分 圓錐動(dòng)脈干畸形患兒TGFP2基因編碼區(qū)DNA序列分析15-26
• 前言15
• 資料和方法15-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 第一部分討論24-25
• 第一部分小結(jié)25-26
• 第二部分 圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織TGFP2基因mRNA表徶水平檢測(cè)26-39
• 前言26
• 資料和方法26-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 第二部分討論35-37
• 第二部分小結(jié)37-39
• 第三部分 圓錐動(dòng)脈干畸形患兒心臟流出道組織TG邪2基因蛋白表達(dá)水平檢測(cè)39-47
• 前言39
• 資料與方法39-42
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-44
• 第三部分討論44-46
• 第三部分小結(jié)46-47
• 全文總結(jié)47
• 創(chuàng)新性47
• 局限性47
• 展望47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 綜述54-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63-64
• 發(fā)表的文章64
• 參加學(xué)術(shù)會(huì)議64
• 獲獎(jiǎng)情況64-65

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 石靜;孫錕;;先天性圓錐動(dòng)脈干畸形的診斷進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2008年03期

2 黃曉e，

本文編號(hào)：566337