本文關(guān)鍵詞：肺炎支原體耐藥機(jī)制和控制策略的探究

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【摘要】：背景與目的肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,M.pneumoniae)是引起社區(qū)獲得性呼吸道感染的常見病原體之一,可導(dǎo)致支氣管炎和非典型肺炎,并可引起多種肺外并發(fā)癥。近年來,多個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道肺炎支原體的感染率和耐藥率都有所升高,嚴(yán)重危害兒童和青少年的健康。以往研究顯示肺炎支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥嚴(yán)重,目前還未有報(bào)道對(duì)四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素耐藥的臨床分離株,但隨著喹諾酮類及四環(huán)素類抗生素的應(yīng)用,肺炎支原體耐藥株可能也會(huì)出現(xiàn)。本研究1、擬通過檢測(cè)2014年1月至2014年12月間北京地區(qū)收集的兒童咽拭子標(biāo)本,了解2014年度北京地區(qū)兒童肺炎支原體流行及耐藥情況及特點(diǎn);2、擬通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(SYBR Green染料法)建立一種快速、特異、敏感、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確檢測(cè)肺炎支原體的方法,并評(píng)價(jià)其在臨床上的應(yīng)用價(jià)值。方法1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(cè)2014年1月至2014年12月間,從北京地區(qū)十一家醫(yī)院收集呼吸道感染患兒咽拭子標(biāo)本,進(jìn)行接種培養(yǎng)和測(cè)定最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC),并提取DNA,檢測(cè)耐藥相關(guān)基因,監(jiān)測(cè)M.pneumoniae感染及耐藥情況。2、實(shí)時(shí)定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用選擇肺炎支原體的23S rRNA耐藥相關(guān)基因作為擴(kuò)增區(qū),設(shè)計(jì)特異性引物,然后提取相應(yīng)質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品,建立絕對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。比較熒光定量PCR方法與傳統(tǒng)巢式PCR方法和市售試劑盒的特異性和靈敏度;分別利用上述三種方法和培養(yǎng)法檢測(cè)臨床咽拭子樣本,進(jìn)行相關(guān)系數(shù)、符合率及kappa系數(shù)的分析。結(jié)果1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(cè)(1)2014年共收集北京地區(qū)呼吸道感染患兒咽拭子標(biāo)本827份,有效標(biāo)本822份。23srrnav區(qū)巢式pcr擴(kuò)增陽(yáng)性標(biāo)本341例,陽(yáng)性率為41.48%。其中,敏感株105株(30.79%),耐藥株236株(69.21%),包括a2063g位點(diǎn)突變199株(58.36%),a2064g位點(diǎn)突變25株(7.33%),同時(shí)發(fā)生a2063g、a2064g位點(diǎn)突變12株(3.52%)。分離培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本共99株,培養(yǎng)陽(yáng)性率29.03%。(2)2014年肺炎支原體感染率呈下降趨勢(shì),耐藥率仍以春冬季最高;感染率隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),以學(xué)齡期最高;不同性別肺炎支原體陽(yáng)性率及耐藥率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)不同診斷中,肺炎患兒肺炎支原體檢出率和耐藥率均明顯高于上感、支氣管炎患兒;支氣管炎和肺炎患兒中肺炎支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率均明顯高于上感,但支氣管炎和肺炎患兒間未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)測(cè)定臨床分離株mic顯示,8株測(cè)序敏感株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素均敏感,57株測(cè)序耐藥株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感,對(duì)四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素均敏感。2、實(shí)時(shí)定量pcr方法的建立及臨床應(yīng)用(1)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品得標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性方程表達(dá)式為:y=-3.5692x+40.786,r2=0.998。(2)在靈敏度檢驗(yàn)中,實(shí)時(shí)定量pcr和巢式pcr均為10拷貝,市售試劑盒為100拷貝;在特異性檢驗(yàn)中,m.pneumoniae檢測(cè)為陽(yáng)性,人型支原體和其他4種細(xì)菌均檢測(cè)為陰性。(3)臨床樣本檢測(cè)中,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)時(shí)定量pcr和巢式pcr、市售試劑盒、分離培養(yǎng)法的總符合率均80%,kappa系數(shù)均0.65;實(shí)時(shí)定量pcr方法與市售試劑盒檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r=0.923,p0.001。結(jié)論1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(cè)(1)2014年北京地區(qū)兒童肺炎支原體感染率和23srrnav區(qū)突變率有所降低,感染率隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),以學(xué)齡期最高,但無明顯性別差異,與國(guó)內(nèi)外報(bào)道相符。(2)肺炎支原體臨床分離株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥嚴(yán)重,耐藥機(jī)制仍以23S rRNA V區(qū)位點(diǎn)突變?yōu)橹?包括A2063G、A2064G、兩個(gè)位點(diǎn)同時(shí)突變?nèi)N情況,而對(duì)四環(huán)素類、喹諾酮類抗生素敏感。2、實(shí)時(shí)定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)肺炎支原體,靈敏度高,特異性強(qiáng),與巢式PCR、市售試劑盒、分離培養(yǎng)法比較,快速經(jīng)濟(jì),污染少,不受患兒年齡、疾病病程和機(jī)體免疫功能等的限制,具有很大的科研和臨床實(shí)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：肺炎支原體 大環(huán)內(nèi)酯類 四環(huán)素類 喹諾酮類 實(shí)時(shí)定量PCR
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 第一部分 兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(cè)13-30
• 研究?jī)?nèi)容13-18
• 研究結(jié)果18-27
• 討論27-29
• 結(jié)論29-30
• 第二部分 實(shí)時(shí)定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用30-41
• 研究?jī)?nèi)容30-34
• 研究結(jié)果34-38
• 討論38-40
• 結(jié)論40-41
• 文獻(xiàn)綜述41-60
• 參考文獻(xiàn)60-72
• 附錄72-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況74-75
• 致謝75-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷76

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 胡文娟;肺炎支原體耐藥機(jī)制和控制策略的探究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2016年

2 李菁竹;支原體污染的巢式PCR檢測(cè)法的摸索及其初步驗(yàn)證[D];武漢生物制品研究所;2010年

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本文編號(hào)：560916