本文關(guān)鍵詞：rhEPO對腦室周圍白質(zhì)軟化新生大鼠神經(jīng)保護(hù)作用

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【摘要】：背景隨著圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)的進(jìn)步,早產(chǎn)兒、低出生體重兒、多胎兒的救治成功率明顯提高,然而,遠(yuǎn)期不同程度的神經(jīng)發(fā)育問題卻居高不降,尤其是早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化(Periventricular leukomalacia,PVL)造成的腦損傷,引起國內(nèi)外學(xué)者廣泛的關(guān)注。髓鞘磷脂蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)是成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的免疫組織標(biāo)記物,是構(gòu)成髓鞘的主要成分,檢測MBP可以評價PVL患兒的神經(jīng)信息傳遞的功能。促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)早期主要用于防治貧血,現(xiàn)大量研究表明,EPO對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷具有保護(hù)功能,然而對于其產(chǎn)生的機(jī)制以及使用的劑量尚無統(tǒng)一結(jié)論。重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)是一種通過基因重組DNA技術(shù)合成的具有與天然EPO完全相同氨基酸序列,生物學(xué)活性也相似的糖蛋白,在1989年通過美國食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)而廣泛應(yīng)用于臨床,在新生兒科的動物實驗和臨床研究中更顯示了良好的療效及應(yīng)用前景。 目的通過對PVL模型大鼠進(jìn)行不同劑量的rhEPO腹腔注射,檢測EPO、EPOR、MBP在蛋白和基因水平的變化,探討rhEPO對PVL的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制及應(yīng)用的最佳劑量,進(jìn)而為臨床早產(chǎn)兒PVL的早期干預(yù)、治療提供依據(jù)。 方法選擇3日齡新生SD大鼠180只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、對照組、rhEPO小劑量治療組(簡寫rhEPOS組)、rhEPO中劑量治療組(簡寫rhEPOM組)、rhEPO大劑量治療組(簡寫rhEPOH組),各組均36只。通過缺氧缺血制作類似早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化損害的動物模型。rhEPOS組、rhEPOM組、rhEPOH組在缺氧缺血后即刻分別給予rhEPO1000U/kg、rhEPO3000U/kg、rhEPO5000U/kg腹腔注射,24h/次,連續(xù)3次。對照組在缺氧缺血后于rhEPO組相同時間點給予注射等體積生理鹽水處理；假手術(shù)組不予缺氧缺血處理也于相同時間點給予注射等體積生理鹽水處理。在每次注射后12h(即造模后12h、36h、60h)以及生后10d,14d,28d處死動物,一部分腦組織進(jìn)行石蠟包埋,另一部分腦組織置于液氮中保存。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)及實時熒光定量PCR (Real-time Fluorescent Quantitative PCR, Real-Time PCR)技術(shù),檢測造模后12h、36h、60h及生后10dEPO、促紅細(xì)胞生成素受體(erythropoietin receptor,EPOR)在蛋白和基因的表達(dá)變化；檢測生后14d、28d時間點髓鞘磷脂蛋白MBP在蛋白水平和基因水平的表達(dá)變化,分析其在腦組織中的作用規(guī)律。SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析,P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1.行為學(xué)改變：對照組大鼠缺氧缺血中出現(xiàn)全身發(fā)紺,反應(yīng)差,頻繁點頭狀抽搐,大小便失禁,部分動物于缺氧缺血過程中死亡。對照組缺氧缺血后,新生大鼠表現(xiàn)為進(jìn)乳少,活動少,反應(yīng)差等表現(xiàn)。假手術(shù)組表現(xiàn)為進(jìn)乳好,活動有力,精神反應(yīng)好。rhEPOS組與對照組相比,行為學(xué)差別不大;rhEPOM組出現(xiàn)進(jìn)乳尚可,活動較少,反應(yīng)稍差。rhEPOH組出現(xiàn)進(jìn)乳可,活動可自如,反應(yīng)可。 2.體重改變：在缺氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)體重下降,體重增長緩慢情況,隨著rhEPO用量的增大,動物的體重增長速度越接近正常生長速度。各組間使用單因素方差分析比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.腦組織病理形態(tài)學(xué)改變：對照組在造模后出現(xiàn)腦白質(zhì)區(qū)細(xì)胞排列紊亂,疏松壞死區(qū)域形成,胼胝體變薄,腦室擴(kuò)大顯著。假手術(shù)組腦白質(zhì)細(xì)胞排列有序,層次分明,細(xì)胞核圓形、淡染,左右側(cè)腦室對稱。在rhEPOS組、rhEPOM組、rhEPOH組中隨著rhEPO用量的加大,腦組織的形態(tài)學(xué)觀察呈減輕趨勢。 4.免疫組化結(jié)果及Real-Time PCR結(jié)果：EPOmRNA、EPO蛋白、EPORmRNA不(?)EPOR蛋白在假手術(shù)組腦組織內(nèi)呈低量表達(dá)。對照組中EPOmRNA和EPO蛋白的表達(dá)均在造模后12h明顯上升,36h顯著下降,給予rhEPO后,EPOmRNA和EPO蛋白的下降速率放緩,rhEPO用量越大,下降速率越緩。EPORmRNA和EPOR蛋白在缺氧缺血后明顯上升,12h達(dá)到頂峰,隨著時間延長呈逐漸下降；rhEPO組與對照組相比,注射rhEPO對EPORmRNA、EPOR蛋白的表達(dá)變化無統(tǒng)計學(xué)意義。MBPmRNA和MBP蛋白在對照組腦組織14d,28d時間點呈低水平,低增長性表達(dá)狀態(tài),隨著rhEPO注射量的加大,各時間點MBPmRNA和MBP蛋白表達(dá)量逐漸增大。MBPmRNA和MBP蛋白在假手術(shù)組腦組織14d、28d時間點呈高水平,高增長性表達(dá)。各組時間點比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5.相關(guān)性分析：經(jīng)Spearman秩相關(guān)性分析后,EPOmRNA與EPO蛋白兩者的表達(dá)相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)(r=0.881,P0.05)；EPORmRNA與EPOR蛋白兩者的表達(dá)相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)(r=0.854,P0.05)；MBPmRNA與MBP蛋白兩者的表達(dá)相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)(r=0.891,P0.05)。 結(jié)論 1.rhEPO對PVL具有神經(jīng)保護(hù)作用,作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)EPO/EPOR系統(tǒng)起作用。 2.通過MBP的對比,研究證實rhEPO治療PVL大鼠,使用5000U/kg的神經(jīng)保護(hù)作用優(yōu)于使用3000U/kg及1000U/kg。
【關(guān)鍵詞】：腦室周圍白質(zhì)軟化 大鼠 促紅細(xì)胞生成素 促紅細(xì)胞生成素受體 髓鞘磷脂蛋白
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R722.6
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-13
• 1 材料與方法13-24
• 1.1 研究對象13-14
• 1.2 主要儀器與試劑14-17
• 1.3 研究方法17-24
• 2 結(jié)果24-31
• 2.1 行為學(xué)及體重改變24-25
• 2.2 腦組織病理學(xué)改變25-26
• 2.3 免疫組織化學(xué)技術(shù)中EPO蛋白、EPOR蛋白、MBP蛋白的表達(dá)變化26-28
• 2.4 Real-Time PCR中EPOmRNA、EPORmRNA、MBPmRNA的表達(dá)變化28-31
• 2.5 相關(guān)性分析31
• 3 討論31-38
• 3.1 模型的制備31-32
• 3.2 腦白質(zhì)區(qū)EPO蛋白、EPOR蛋白和腦組織中EPOmRNA、EPORmRNA的變化分析32-36
• 3.3 腦白質(zhì)區(qū)MBP蛋白和腦組織中MBPmRNA的變化分析36-38
• 4 結(jié)論38-39
• 附圖39-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述：促紅細(xì)胞生成素在腦室周圍白質(zhì)軟化中的神經(jīng)保護(hù)作用57-72
• 參考資料67-72
• 主要中英文縮寫詞一覽表72-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況73-74
• 致謝74-75
• 個人簡歷75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：558185