本文關(guān)鍵詞：HCMV宮內(nèi)感染新生小鼠肺損害TLR2表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 巨細(xì)胞病毒 TLR2 宮內(nèi)感染 新生小鼠 肺損害

【摘要】：目的:建立HCMV宮內(nèi)感染新生小鼠肺損害模型,觀察TLR2表達(dá)及My D88、IL-8以及IFN-β水平變化,探討HCMV宮內(nèi)感染致新生小鼠肺損害與TLR2信號(hào)通路的關(guān)系。方法:1.動(dòng)物模型的構(gòu)建與評(píng)估:隨機(jī)選取8-10周齡清潔級(jí)(SPF)BALB/c小鼠,隨機(jī)分為A、B和C三組(雌雄比均為2:1)。A組小鼠予腹腔注射HCMV AD169株懸液0.5ml(5.0log TCID50)一次,B組腹腔注射一次未接種病毒的HELF細(xì)胞懸液0.5ml,C組不予任何注射。注射7天后分別對(duì)三組小鼠進(jìn)行血清HCMVIgM檢測(ELISA法)。在A組HCMV-IgM陽性小鼠中隨機(jī)選擇54只(雌:雄=2:1),在B、C組HCMV-IgM陰性小鼠中各隨機(jī)選擇15只(雌:雄=2:1),分別配對(duì)飼養(yǎng)并自然分娩獲得仔鼠。觀察三組雌性小鼠受孕時(shí)間、新生小鼠死胎率,一半新生小鼠于生后第一天(生后24小時(shí)內(nèi),P1)低溫麻醉,取肺組織和血液。半側(cè)肺組織用于HCMV-IgM(金標(biāo)免疫法)及病理學(xué)檢測(HE染色),另外半側(cè)肺組織-80℃凍存。ELISA法檢測血清HCMVIgM。統(tǒng)計(jì)仔鼠宮內(nèi)感染率及肺損害發(fā)生率。2.TLR2表達(dá)與相關(guān)分子關(guān)系:以上述三組凍存肺組織為研究對(duì)象。血清和肺組織中HCMV IgM均陽性的A組小鼠所產(chǎn)的新生小鼠肺組織,根據(jù)病理結(jié)果分為A1組(有肺損害)和A2組(無肺損害),隨機(jī)選擇血清HCMV-IgM與肺組織HCMV-IgM檢測結(jié)果為陰性且病理學(xué)證實(shí)無肺損害的B組及C組備用的新生小鼠肺組織標(biāo)本為B1(空白對(duì)照)和C1組(正常對(duì)照)。A、B、C三組各一半新生小鼠于生后第7天(P2)按第1天的方法處理及分組。分別檢測各組(第1天、第7天)新生小鼠肺組織TLR2m RNA表達(dá)(RT-q PCR)及My D88、IL-8、IFN-β水平(ELISA)。結(jié)果:1.注射7天后A組小鼠血清HCMVIgM檢測陽性率(85%)明顯高于B組(7.6%)及C組(0%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。配對(duì)飼養(yǎng)后三組雌小鼠受孕時(shí)間(天)分別為(8.7±1.5、6.5±1.1、6.4±0.8),平均每次產(chǎn)新生鼠數(shù)(只)分別為(6.5±1.3、8.0±1.2、7.7±1.1),新生小鼠血清HCMV-IgM陽性率(%)分別為(53.3、4.2、3.1),新生小鼠肺組織HCMV-IgM陽性率(%)分別為(27.7、0、0),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組新生小鼠肺組織勻漿HCMV-IgM陽性的肺組織病理切片可見明顯的炎性病理改變,余兩組新生小鼠肺組織切片均未見病理改變。2.A1組、A2組、B1組和C1組P1肺組織TLR2-m RNA的?Ct值分別為9.8±1.2、12.0±2.2、12.7±1.6、12.7±2.3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),P2的?Ct值差異無意義(P0.05)。第1天A1組My D88、IL-8、IFN-β水平分別為5.8±0.9 ng/ml、39.8±2.8pg/ml、20.3±1.8ng/L,明顯高于其他三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A1組My D88、IL-8水平P2較P1下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A2組My D88、IL-8、IFN-β的水平與B1、C1組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:通過腹腔注射接種HCMVAD169毒株能成功感染小鼠,并造成胎鼠HCMV宮內(nèi)感染,部分新生小鼠出現(xiàn)肺部炎癥反應(yīng),顯示HCMV宮內(nèi)感染致肺損害小鼠模型構(gòu)建成功。HCMV宮內(nèi)感染致新生小鼠肺損害可能與肺組織TLR2高表達(dá)有關(guān)。高表達(dá)TLR2主要通過My D88依賴途徑誘導(dǎo)炎癥因子釋放的機(jī)制參與肺損害的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：巨細(xì)胞病毒 TLR2 宮內(nèi)感染 新生小鼠 肺損害
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R722.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-18
• 第一部分 人巨細(xì)胞病毒宮內(nèi)感染新生小鼠肺損害動(dòng)物模型的構(gòu)建18-32
• 材料與方法18-25
• 1.材料和試劑18-19
• 1.1 主要試劑18
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 1.4 病毒株和細(xì)胞株19
• 2.方法19-25
• 2.1 病毒培養(yǎng)方法19-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理與分組21
• 2.3 新生小鼠肺組織病理切片制備及染色21-23
• 2.4 ELISA操作步驟23
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23
• 2.6 技術(shù)路線圖23-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 第二部分 新生小鼠TLR2表達(dá)對(duì)相關(guān)分子的影響32-46
• 材料與方法32-38
• 1.材料32-33
• 1.1 研究對(duì)象32
• 1.2 主要試劑及相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器32-33
• 1.3 引物設(shè)計(jì)33
• 2 方法33-38
• 2.1 肺組織TLR2-m RNA的Real-time Quantitative PCR檢測33-36
• 2.2 相關(guān)分子（IL-8、IFN-β、My D88）檢測36-37
• 2.3 統(tǒng)計(jì)方法37-38
• 結(jié)果38-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46
• 全文總結(jié)及展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 綜述 炎癥與新生兒肺部疾病53-74
• 參考文獻(xiàn)61-74
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果74-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：553175