發(fā)布時間：2017-06-26 15:21

  本文關(guān)鍵詞：地塞米松干預(yù)宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷TNF-a及Nogo-A的表達變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過研究推測宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷與腫瘤壞死因子-а(TumorNecrosis Factor-а,TNF-а)及神經(jīng)軸突生長抑制因子-A(Neurite outgrowth inhibitor A,Nogo-A)有關(guān)；地塞米松（Dexamethasone,Dex）可能通過減少腦組織TNF-а、Nogo-A表達，對宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷有保護作用。 方法：1.建立動物模型及實驗分組：將36只Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠，12只SD雄性大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，以3:1比例合籠，每日清晨觀察母鼠陰道，以發(fā)現(xiàn)陰道陰栓之日記為受孕第1日，未發(fā)現(xiàn)陰栓的雌性大鼠做陰道拭子的圖片，鏡下的發(fā)現(xiàn)精子即記為受孕。選取30只確定受孕的SD雌鼠隨機分為，生理鹽水（Normal saline,NS）組， LPS組，Dex組，每組10只。NS組在SD母鼠孕第15、16天腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.35mg/kg.d，連續(xù)2天，LPS組在SD母鼠孕第15、16天腹腔內(nèi)注射LPS，0.35mg/kg.d，連續(xù)2天。Dex組在SD母鼠孕第15、16天腹腔注射LPS，0.35mg/kg.d，注射LPS后1小時，相同方法注射Dex，0.5mg/kg.d，連續(xù)2天。 2.采集標本：除去孕22天前，娩出的早產(chǎn)鼠，足月新生鼠娩出后，分別于生后4個時間點(6h，12h，24h，48h)斷頭處死，每個時間點8只，斷頭處死后迅速取腦組織于10％福爾馬林溶液中固定12h，然后進行常規(guī)脫水、石蠟包埋，應(yīng)用蘇木素-伊紅(hematoxylin eosin,HE)染色觀察各組各時間點新生鼠腦組織病理形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)的變化。在新生鼠娩出后，夾起脫落的胎盤，蒸餾水沖洗后固定于10％福爾馬林溶液，，12h后進行常規(guī)脫水、石蠟包埋。隨機選取NS組，LPS組及Dex組的母鼠，每組2只，斷頭處死后取其子宮，10％福爾馬林溶液中固定12小時后，然后進行常規(guī)脫水、石蠟包埋，HE染色觀察各組母鼠子宮、胎盤病理形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)的變化，及鏡下中性粒細胞的數(shù)量。 3.觀察指標：采用S-P（Streptavidin-Perosidase，S-P)法免疫組化染色檢測各組新生鼠生后6h、12h、24h、48h，腦組織TNF-а及Nogo-A的表達。 結(jié)果：1.子宮、胎盤HE染色病理學(xué)變化：各組子宮壁HE染色鏡下均可見代表已孕的滋養(yǎng)細胞。NS組：子宮壁、胎盤輪廓清晰，細胞排列整齊，鏡下偶見中性粒細胞；LPS組：子宮壁、胎盤充血水腫，輪廓不清晰，血管壁增厚，管腔不規(guī)則，可見大量反應(yīng)性的中性粒細胞浸潤；Dex組：子宮壁、胎盤輪廓尚清晰，可見少量反應(yīng)性中性粒細胞。 2.腦組織HE染色病理學(xué)變化：NS組：腦組織結(jié)構(gòu)未見明顯改變，輪廓清晰；神經(jīng)細胞排列整齊，細胞膜完整，細胞核染色均勻，神經(jīng)細胞間質(zhì)無異常，各時間點變化無明顯差異。LPS組：腦組織水腫、疏松、稀化；神經(jīng)細胞膜不完整可見凹陷改變，細胞核染色不均勻，細胞核基質(zhì)破壞可見核碎裂及固縮，神經(jīng)細胞間質(zhì)水腫。Dex組：腦組織可見輕度水腫，未見組織明顯稀疏，染色尚清晰；神經(jīng)細胞胞膜較完整，偶可見缺損，細胞核可見少許碎裂，但無核固縮變化，神經(jīng)細胞間質(zhì)部分可見輕度水腫，各時間變化現(xiàn)相近，變化無明顯差異。 3. TNF-а表達：NS組組內(nèi)各個時間點TNF-а表達的比較，無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。LPS組新生鼠腦組織TNF-а表達生后6h迅速上升，12h表達達到高峰，高峰后維持在較高水平，組內(nèi)各時間點比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。Dex組新生鼠腦組織TNF-а表達相同時間點高于NS組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。三組相同時間點，LPS組TNF-а表達明顯高于NS組（P 0.01）、Dex組（P 0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，NS組和Dex組TNF-а比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 4. Nogo-A表達：NS組Nogo-A表達呈弱陽性，組內(nèi)各個時點Nogo-A表達比較，無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。LPS組新生鼠腦組織Nogo-A表達于生后6h開始升高，12h升高迅速且達到高峰，24h仍處于高值但稍有下降，48小時明顯下降，組內(nèi)6h（P 0.01），24h（P 0.01），48h（P 0.01）的Nogo-A表達與12h比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Dex組Nogo-A表達較弱，組內(nèi)各時間點比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。LPS組和NS組在6h，12h，24h時間點上，LPS組Nogo-A表達高于NS組（P 0.01），48h兩者比較（P 0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Dex組和LPS組Nogo-A的表達，48h兩組的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），其余時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。Dex組各個時間點Nogo-A表達高于NS組（P0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：1.LPS腹腔注射后，母鼠子宮壁、胎盤HE染色可見充血、水腫及大量中性粒細胞，且LPS組新生鼠腦組織稀疏，結(jié)構(gòu)模糊，神經(jīng)細胞胞膜破裂，細胞核染色不均變淡，神經(jīng)細胞間質(zhì)水腫。LPS可致宮內(nèi)感染，宮內(nèi)感染可致新生鼠腦白質(zhì)損傷。 2. LPS組新生鼠腦組織的TNF-а表達，生后6h開始上升，12h表達達到高峰，高峰后持續(xù)在較高水平。而且LPS組TNF-а表達明顯高于NS組（P 0.01），推測宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷可能與細胞因子TNF-а有關(guān)聯(lián)。 3.LPS組新生鼠腦組織Nogo-A表達于生后6h開始升高，12h升高迅速且達到高峰，24h仍處于高值但稍有下降，48小時明顯下降。新生鼠腦組織Nogo-A表達LPS組與NS組比較各個時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。推測Nogo-A與宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷有關(guān)，在腦白質(zhì)損傷過程中可能發(fā)揮一定作用。 4.宮內(nèi)感染母鼠給予Dex干預(yù)后，母鼠子宮壁、胎盤可見少量中性粒細胞，未見明顯充血、水腫，新生鼠腦組織鏡下水腫，未見明顯疏松變化，神經(jīng)細胞未見明顯壞死變化，與LPS組比較鏡下病理改變減輕。Dex組TNF-а表達和Nogo-A表達較LPS組均明顯下降（P 0.05），與NS組比較有差異，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。推測Dex對減輕宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：地塞米松 腦白質(zhì)損傷 宮內(nèi)感染 TNF-а Nogo-A
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-13
• 第1章 引言13-16
• 第2章 材料與方法16-22
• 2.1 實驗動物16
• 2.2 主要實驗儀器設(shè)備16-17
• 2.3 主要實驗試劑17
• 2.3.1 動物模型實驗試劑17
• 2.3.2 免疫組化檢測試劑17
• 2.4 主要試劑配制17-18
• 2.5 實驗動物分組18-19
• 2.6 指標測定和方法19-21
• 2.6.1 HE 染色觀察腦組織及子宮、胎盤病理形態(tài)學(xué)改變19-20
• 2.6.2 S-P 免疫組化染色檢測 TNF-а和 Nogo-A 蛋白表達20-21
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)方法21-22
• 第3章 結(jié)果22-25
• 3.1 一般情況22
• 3.2 各組子宮、胎盤病理形態(tài)學(xué)改變22
• 3.3 各組新生鼠腦組織的病理形態(tài)學(xué)改變22-23
• 3.4 各組新生鼠腦組織的 TNF-а蛋白表達23-24
• 3.5 各組新生鼠腦組織 Nogo-A 蛋白表達24-25
• 第4章 討論25-31
• 4.1 LPS 制備宮內(nèi)感染的動物模型25-26
• 4.2 宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷26-27
• 4.3 宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷后 TNF-а的表達27-28
• 4.4 宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷后 Nogo-A 的表達28-29
• 4.5 Dex 對宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷后 TNF-а和 Nogo-A 表達的影響29-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-35
• 附圖35-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 綜述39-43
• 參考文獻42-43

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙紅洋;朱薇薇;王金麗;;Nogo-A及Nogo受體抑制劑/拮抗劑的神經(jīng)防護作用[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2011年35期

2 趙紅洋;朱薇薇;王金麗;;Nogo-A蛋白及Nogo受體抑制劑防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究進展[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2011年36期

3 蘇桂云;朱薇薇;王麗;;Nogo-A及其受體拮抗劑在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷修復(fù)中的作用機制[J];中國兒童保健雜志;2010年02期

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本文編號：486659