本文關(guān)鍵詞：膠體金免疫層析法聯(lián)合檢測EV71和CA16 IgM的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 手足口病(Hand foot and mouth disease, HFMD)的主要致病原為腸道病毒71型(Enterovirus71, EV71)和柯薩奇病毒A組16型(Coxsackie A16, CA16)。近年來,HFMD發(fā)病率在全球呈逐年上升趨勢,引起全球特別是我國政府和醫(yī)療體系的高度關(guān)注。但臨床缺乏早期快速簡便高靈敏度的診斷方法,不能及時有效診斷疾病,常造成重大疫情,嚴(yán)重影響了人民健康和社會穩(wěn)定。所以,尋找簡便快速的床旁快速檢測是目前手足口病防控研究的熱點與難點。 目的 建立膠體金免疫層析捕獲法聯(lián)合檢測EV71和CA16IgM試紙條。 方法 1. EV71-VP1重組蛋白的表達(dá)優(yōu)化：將pET-41b(+)-VP1轉(zhuǎn)入BL21(DE3)中,制備重組菌。初步誘導(dǎo)表達(dá)后,經(jīng)SDS-PAGE和Western blot檢測,當(dāng)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致時,采用單因素變量法分別進(jìn)行誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)劑濃度的優(yōu)化,選擇最適條件進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。 2. EV71-VP1重組蛋白的純化：表達(dá)產(chǎn)物通過Streamline DEAE和Streamline Chelating進(jìn)行純化獲得高純度蛋白。 3.試紙條的初步制備與檢測：以實驗室同類試紙條制備方法制備試紙條并檢測。試紙條以EV71-VP1和CA16-VP1抗原分別作檢測線1、檢測線2,以羊抗鼠IgG多克隆抗體作質(zhì)控線,膠體金標(biāo)記鼠抗人IgMμ鏈抗體。 4.工藝優(yōu)化：通過對膠體金粒徑、標(biāo)記pH、蛋白標(biāo)記量、蛋白包被量、膠體金保護(hù)液配方、加入量和硝酸纖維素膜的優(yōu)化選擇,從而對試紙條的性能進(jìn)行優(yōu)化。 5.對試紙條性能進(jìn)行評價：從試紙條的特異性、靈敏度、精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性對試紙條性能進(jìn)行評價。 結(jié)果 1.高效表達(dá)并純化獲得EV71-VP1抗原：通過優(yōu)化實驗確定BL21(DE3)/EV71-VP1的最適誘導(dǎo)劑濃度和誘導(dǎo)時間；SDS-PAGE檢測重組蛋白表觀分子量為30KDa-40KDa; Western blot檢測證實重組抗原具有較好的特異性和良好的抗原性；純化復(fù)性后獲得蛋白量21.6mg,純度達(dá)96.5%。 2.初步制備了膠體金免疫層析捕獲法聯(lián)合檢測EV71和CA16IgM試紙條。確定EV71-VP1抗原和CA16-VP1抗原的最適包被濃度,標(biāo)記抗體濃度。靈敏度、特異性、精密性、重復(fù)性好。37℃放置5周試紙條性能穩(wěn)定。 結(jié)論 1.經(jīng)原核表達(dá)和純化成功獲得了重組蛋白EV71-VP1,并制備用于檢測早期EV71和CA16感染的膠體金免疫層析試紙條； 2.建立了采用雙波長掃描檢測膠體金穩(wěn)定性選擇標(biāo)記pH的方法。
【關(guān)鍵詞】：膠體金免疫層析 腸道病毒71型病毒 柯薩奇病毒A組16型病毒 手足口病
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R446.6;R725.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一部分 前言11-14
• 第二部分 材料和方法14-37
• 第三部分 實驗結(jié)果37-50
• 第四部分 討論50-53
• 第五部分 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 文獻(xiàn)綜述61-68
• 參考文獻(xiàn)66-68
• 附錄68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況69-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：膠體金免疫層析法聯(lián)合檢測EV71和CA16 IgM的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：469492