本文關(guān)鍵詞：社區(qū)人群中12歲以下兒童乙肝病毒感染狀況的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國(guó)是乙型肝炎的高流行區(qū),雖然乙肝疫苗接種計(jì)劃已經(jīng)實(shí)施十余年,人群的乙肝病毒感染也逐步得到控制,特別是兒童的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性率降低更為明顯,但仍然還會(huì)有新的感染者出現(xiàn)。兒童期乙肝病毒感染常�？蓪�(dǎo)致終生攜帶,母嬰傳播是其主要傳播途徑。在國(guó)家科技重大專項(xiàng)乙肝防治示范區(qū)的研究現(xiàn)場(chǎng) 甘肅省武威市,2010年社區(qū)人群的HBsAg陽(yáng)性率為7.19%,高于全國(guó)平均水平。為了實(shí)現(xiàn)降低該示范區(qū)的乙肝感染率和發(fā)病率的目標(biāo),本研究擬通過(guò)對(duì)全人群中兒童HBV感染狀況的調(diào)查,獲得社區(qū)兒童的HBV感染率及其分布特征;并通過(guò)對(duì)隱匿性HBV感染兒童和HBsAg陽(yáng)性兒童HBV S基因序列對(duì)比分析,探討社區(qū)兒童隱匿性HBV感染的特點(diǎn)和傳播規(guī)律,從而為預(yù)防和阻斷兒童HBV的感染提供可靠依據(jù)。方法:1.選擇2010年參加全人群乙肝現(xiàn)況調(diào)查的鄉(xiāng)鎮(zhèn)社區(qū)中12歲及以下兒童作為研究對(duì)象,進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,收集基本信息,并采集血液標(biāo)本。采用elisa方法檢測(cè)血清中的hbsag和抗-hbs,hbsag陽(yáng)性者進(jìn)行肝功、hbeag及hbvdna檢測(cè)。2.選擇部分12歲及以下hbsag陰性兒童作為研究對(duì)象。采用磁珠法提取血清中dna,并運(yùn)用巢式pcr技術(shù)擴(kuò)增hbvs區(qū),陽(yáng)性者定義為隱匿性hbv感染,分析隱匿性hbv感染的血清流行病學(xué)特征并進(jìn)行隨訪。3.隱匿性hbv感染兒童作為病例組,以性別、年齡±5歲作為匹配條件,從hbsag陽(yáng)性者中隨機(jī)選取對(duì)照。將擴(kuò)增得到的兩組hbvs基因序列與標(biāo)準(zhǔn)參考株序列一起輸入clustalw軟件,采用默認(rèn)參數(shù)進(jìn)行對(duì)位排列。將對(duì)齊的序列輸入mega5.20軟件,構(gòu)建neighbor-joining(n-j)樹(shù),根據(jù)n-j樹(shù)的主要分枝拓構(gòu)來(lái)判斷兩組兒童的hbv的基因型,并進(jìn)一步分析血清型、突變位點(diǎn)分布及突變頻率的差異。采用paml4.7軟件包中的codeml程序,運(yùn)用最大似然法分析兩組兒童hbvs基因的適應(yīng)性進(jìn)化現(xiàn)象,并檢測(cè)其陽(yáng)性選擇位點(diǎn)。4.采用epidata3.1軟件對(duì)流行病學(xué)調(diào)查表資料和隨訪調(diào)查表資料進(jìn)行雙錄入。采用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料并符合正態(tài)分布的采用(`χ±s)表示,組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)或fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。hbvdna水平、病毒s基因核苷酸替代率比較采用mann-whitneyu檢驗(yàn),基因型比較采用fisher精確檢驗(yàn),p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.參加全人群乙肝現(xiàn)況調(diào)查的12歲及以下兒童為4243人,獲得流行病學(xué)調(diào)查信息和血清標(biāo)本的12歲及以下兒童4159名,占兒童總數(shù)的98.02%。經(jīng)elisa方法檢測(cè),12歲及以下兒童hbsag陽(yáng)性者有52例,hbsag陽(yáng)性率為1.25%(52/4159);抗-hbs陽(yáng)性者有2456例,抗-hbs陽(yáng)性率為59.05%(2456/4159)。各年齡組間hbsag陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.90,p=0.407)。乙肝疫苗接種率為98.68%(4104/4159),各年齡組間抗-hbs陽(yáng)性率差異明顯(χ2=216.81,p0.001),以10~12歲組最高,為73.60%(1116/1517),而4~6歲組最低,為49.50%(521/1053)。52例hbsag陽(yáng)性兒童中hbeag陽(yáng)性者占28.90%(15/52),hbvdna1×103iu/ml者占51.92%(27/52),肝功異常者占5.80%(3/52)。2.選取hbsag陰性的12歲及以下兒童共計(jì)886人,通過(guò)初篩和分檢共篩檢出hbsag陰性且hbvdna陽(yáng)性即隱匿性hbv感染兒童9例,12歲以下兒童的隱匿性hbv感染率為1.02%(9/886),其中男童6例,女童3例,年齡最小的4歲,最大的12歲。乙肝疫苗接種者占77.78%(7/9);抗-hbs陽(yáng)性者占33.33%(3/9);未見(jiàn)抗-hbc陽(yáng)性者;hbvdna1×102iu/ml者占11.11%(1/9)。9例隱匿性hbv感染兒童中,5年后共隨訪到3人,經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)這3名兒童的hbsag、hbeag、抗-hbe、抗-hbc四項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)均為陰性,抗-hbs全部為陽(yáng)性。經(jīng)過(guò)hbvdna的定量檢測(cè),未檢測(cè)到hbvdna,生化檢測(cè)結(jié)果顯示alt均在正常值范圍內(nèi)。3.隱匿性hbv感染兒童和hbsag陽(yáng)性兒童攜帶的hbv均以c基因型為主,其所占的比例分別為55.56%(5/9)和50.50%(8/16),血清型以ayr為主。對(duì)于兩組感染兒童hbvs基因功能區(qū)域氨基酸突變率的分析顯示,隱匿性感染組的hbv在ctl細(xì)胞識(shí)別表位sc(aa41-49)、mhr(aa100-169)、“a”決定簇(aa124-147)、第一袢環(huán)(aa124-137)、第二袢環(huán)(aa139-148)、前‘a(chǎn)’區(qū)(aa100-123)、后‘a(chǎn)’區(qū)(aa149-169)內(nèi)氨基酸突變率與hbsag陽(yáng)性組兒童無(wú)明顯差異。hbvs基因單個(gè)位點(diǎn)突變分析顯示,隱匿性hbv感染組中存在3種可能影響hbsag“a”表位構(gòu)象的氨基酸變異位點(diǎn)p127s、i140t、s143l;hbsag陽(yáng)性組中存在5種,分別是p127t、t131p、s143l、d144r、g145r。似然比檢驗(yàn)(likelihoodratiotest,lrt)分析結(jié)果顯示,在隱匿性hbv感染兒童中,選擇模型m2、m3和m8的lrt結(jié)果顯著高于中性模型m0、m1和m7(p0.05),表明選擇模型均顯著優(yōu)于中性模型。而在hbsag陽(yáng)性兒童的三組序列中僅有m3的lrt結(jié)果顯著高于中性模型m0(p0.05),說(shuō)明位點(diǎn)間所承受的選擇壓力不同。隱匿性hbv感染組的s區(qū)基因序列上檢測(cè)到陽(yáng)性選擇位點(diǎn),為位于hbv基因功能區(qū)免疫表位的180氨基酸編碼位點(diǎn)。結(jié)論:1.社區(qū)12歲以下兒童hbsag陽(yáng)性率為1.25%(52/4159),明顯高于全國(guó)平均水平(0.94%),提示該地區(qū)兒童hbv感染形勢(shì)依然較為嚴(yán)峻。部分兒童hbvdna呈現(xiàn)高滴度,應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和隨訪工作。4~6歲兒童抗-hbs陽(yáng)性率有明顯下降,提示對(duì)4~6歲兒童可開(kāi)展乙肝疫苗的加強(qiáng)免疫接種工作。2.社區(qū)12歲以下兒童隱匿性hbv感染率為1.02%(9/886),雖略低于hbsag陽(yáng)性率,但對(duì)于這部分隱匿性的hbv感染兒童也不應(yīng)忽視,應(yīng)加強(qiáng)篩查和隨訪研究。3.隱匿性HBV感染兒童和HBsAg陽(yáng)性兒童所攜帶的HBV在基因型、血清型、突變位點(diǎn)、陽(yáng)性選擇位點(diǎn)等方面無(wú)明顯差異,提示兒童的隱匿性HBV感染可能是HBV感染過(guò)程中的一個(gè)階段,與病毒本身的特征無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】：社區(qū)兒童 乙型肝炎病毒 隱匿性HBV感染 HBV S基因 基因突變
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.1
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 1. 兒童 HBV 感染自然史16-18
• 2. 兒童 HBV 感染現(xiàn)狀18-23
• 3. 兒童隱匿性 HBV 感染23-27
• 第一部分 社區(qū)人群中12歲以下兒童乙肝病毒感染的血清流行病學(xué)調(diào)查27-39
• 1 材料27-28
• 1.1 主要試劑27
• 1.2 主要儀器27-28
• 2 方法28-30
• 2.1 研究對(duì)象28-29
• 2.2 質(zhì)量控制和督導(dǎo)29-30
• 2.3 數(shù)據(jù)整理與分析30
• 3 結(jié)果30-34
• 3.1 社區(qū)兒童的一般情況30-31
• 3.2 社區(qū)兒童中HBsAg和抗-HBs的分布情況31
• 3.3 社區(qū)兒童HBV感染率31-33
• 3.4 社區(qū)兒童乙肝疫苗接種情況33
• 3.5 HBsAg陽(yáng)性兒童的血清學(xué)特征33-34
• 4 討論34-39
• 第二部分 社區(qū)人群中12歲以下兒童隱匿性HBV感染的流行病學(xué)和病毒學(xué)特征39-59
• 1 材料40-41
• 1.1 主要試劑40
• 1.2 主要儀器40-41
• 1.3 常用試劑41
• 2 方法41-47
• 2.1 研究對(duì)象41
• 2.2 隱匿性HBV感染者的確定41-44
• 2.3 HBsAg陽(yáng)性者HBV S區(qū)序列的獲得44
• 2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR44
• 2.5 HBV DNA的提取和巢式PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制44-45
• 2.6 隨訪者血清學(xué)檢測(cè)45
• 2.7 HBV S基因的序列突變分析45
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45-46
• 2.9 重組分析46
• 2.10 HBV S基因蛋白質(zhì)陽(yáng)性選擇位點(diǎn)分析46-47
• 3 結(jié)果47-55
• 3.1 社區(qū)兒童隱匿性HBV感染率47-48
• 3.2 隱匿性HBV感染兒童的流行病學(xué)和血清學(xué)特征48-49
• 3.3 兒童HBV感染毒株的病毒學(xué)特征49-55
• 4 討論55-59
• 小結(jié)59-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 附錄66-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果70-71
• 致謝71

  本文關(guān)鍵詞：社區(qū)人群中12歲以下兒童乙肝病毒感染狀況的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：446154