本文關(guān)鍵詞：先天性心臟病伴染色體異�；純合嚓P(guān)致病區(qū)段分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的先天性心臟病是嬰幼兒最常見的出生缺陷疾病,通常伴發(fā)其他臟器器官的畸形。在先天性心臟病伴有染色體異常的患兒中,存在拷貝數(shù)變異的患兒比例約占25%,因此明確染色體異常的病因?qū)μ岣呦忍煨孕呐K病患兒生存率和生存質(zhì)量有著重要意義。確定患者攜帶的染色體缺失或重復(fù)區(qū)域,并從中篩選出與其臨床特征相符合的候選致病基因,從而對相應(yīng)的臨床表型進行解釋。方法臨床上收集2例先天性心臟病伴有染色體異常患者,通過染色體核型分析、Agilent CGH Array 4×180K芯片分析、Affymetrix Cyto Scan HD芯片分析和Real-time PCR技術(shù)確定患者是否存在染色體結(jié)構(gòu)或數(shù)目異常和拷貝數(shù)變異。利用全外顯子測序技術(shù)檢測患者基因組編碼區(qū)可能存在的基因突變。根據(jù)OMIM和Pubmed數(shù)據(jù)庫,篩選出和臨床表型可能相關(guān)的候選致病基因進行分析。結(jié)果1、兩個患者染色體核型分析結(jié)果顯示均存在染色體異常,染色體核型分別46,XX,del(9)(q31.1q32)和45,XY,der(13)t(13;18)(p12;q11.2)。2、Agilent CGH Array 4×180K芯片結(jié)果顯示患兒1存在9q31.1-q32(105190105-117195154)區(qū)域缺失,其長度為12.01Mb,Affymetrix Cyto Scan HD Assay芯片結(jié)果顯示患兒2存在18p11.32-q11.1(136226-18529578)區(qū)域缺失,長度為18.393Mb,并且13號染色體和18號染色體發(fā)生易位。3、Real-time PCR驗證結(jié)果顯示患者1攜帶SMC2,CTNNAL1和DFNB31基因缺失,患者2攜帶TYMS和TGIF1基因缺失。4、全外顯子檢測結(jié)果顯示患者1不存在已知候選基因NIPBL、SMC1A、SMC3、MRPS22、RAD21和HDAC8基因突變。結(jié)論1、本研究通過染色體核型分析、a CGH芯片技術(shù)、Cyto Scan HD芯片技術(shù)確定了兩個患者的染色體缺失區(qū)域,并且篩選出和臨床特征相關(guān)的候選基因。2、通過對9q21-q34區(qū)段缺失患者的臨床表征進行比對,發(fā)現(xiàn)他們的臨床表現(xiàn)和Cd L綜合征相似。3、首次把SMC2基因和Cd L綜合征缺失聯(lián)系起來。4、推測18p染色體缺失患者其心臟表型可能和TYMS基因相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 染色體異常 9q缺失 SMC2基因 18p缺失 TYMS基因
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R725.4;R725.9
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 中英文縮略語11-14
• 緒論14-17
• 第一章 一例 9q中間區(qū)域缺失患兒致病區(qū)段分析17-40
• 引言17-18
• 1.材料與方法18-24
• 1.1 主要試劑與材料18
• 1.1.1 基因組DNA抽提試劑18
• 1.1.2 染色體核型分析試劑18
• 1.1.3 Agilent CGH Array 4×180K芯片18
• 1.1.4 Real-time PCR試劑18
• 1.2 實驗儀器、器械及耗材18-19
• 1.3 研究對象19
• 1.4 實驗方法19-24
• 1.4.1 外周血基因組DNA抽提19-20
• 1.4.2 外周血細(xì)胞培養(yǎng)及染色體核型分析20-21
• 1.4.3 Agilent CGH Array 4×180K芯片21-22
• 1.4.4 引物設(shè)計22
• 1.4.5 PCR反應(yīng)檢測引物特異性以及確定引物退火溫度22-23
• 1.4.6 SMC2、CTNNAL1、DFBN31基因和GAPDH基因引物效率測定23
• 1.4.7 Real-time PCR驗證23
• 1.4.8 全外顯子測序分析23-24
• 2 實驗結(jié)果24-34
• 2.1 患者信息24-26
• 2.2 染色體異常分析結(jié)果26
• 2.3 與該患兒缺失區(qū)域重疊的11例患者進行臨床表型及缺失區(qū)域分析26-29
• 2.4 CNVs分析結(jié)果29-31
• 2.4.1 DNA質(zhì)檢結(jié)果29
• 2.4.2 Agilent CGH Array 4×180K芯片結(jié)果分析29-31
• 2.5 qPCR驗證結(jié)果31
• 2.6 全外顯子測序結(jié)果31-34
• 2.6.1 測序文庫質(zhì)檢31-32
• 2.6.2 測序結(jié)果質(zhì)控32
• 2.6.3 序列比對信息32-33
• 2.6.4 捕獲富集分析33
• 2.6.5 全外顯子測序分析結(jié)果33-34
• 3 討論34-40
• 3.1 9q21-q34區(qū)段缺失患者臨床特征相似35-36
• 3.2 與CdLS相似的幾種綜合征表現(xiàn)36-37
• 3.3 9q31.1-q32區(qū)段缺失患者候選基因SMC237-38
• 3.4 9q31.1-q32區(qū)段缺失患者候選基因DFNB3138-39
• 3.5 9q31.1-q32區(qū)段缺失患者候選基因CTNNAL139-40
• 第二章 一例 18P缺失綜合征患兒致病區(qū)段分析40-53
• 引言40-41
• 1. 資料與方法41-46
• 1.1 主要試劑與材料41
• 1.1.1 基因組DNA抽提試劑41
• 1.1.2 染色體核型分析試劑41
• 1.1.3 Affymetrix CytoScan HD Assay芯片41
• 1.1.4 Real-time PCR試劑盒41
• 1.2 主要儀器、器械及耗材41-42
• 1.3 研究對象42
• 1.4 實驗方法42-46
• 1.4.1 外周血基因組DNA抽提42
• 1.4.2 外周血細(xì)胞培養(yǎng)及染色體核型分析42
• 1.4.3 Affymetrix CytoScan HD Assay芯片42-45
• 1.4.4 引物設(shè)計45
• 1.4.5 常規(guī)PCR檢測引物的特異性和確定引物的退火溫度45
• 1.4.6 TYMS基因和TGIF1基因引物效率測定45
• 1.4.7 Real-time PCR驗證45-46
• 2 實驗結(jié)果46-50
• 2.1 患者信息46-47
• 2.2 染色體變異分析結(jié)果47-48
• 2.3 CNVs分析結(jié)果48-49
• 2.4 qPCR驗證結(jié)果49-50
• 3 討論50-53
• 結(jié)論53-54
• 課題局限性54-55
• 參考文獻55-68
• 致謝68-71
• 學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄71

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1 Celep F.;Karag

本文編號：435517