本文關(guān)鍵詞：NgR特性siRNA對宮內(nèi)感染所致早產(chǎn)鼠腦損傷修復(fù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討Ng R特異性si RNA沉默Nogo-66受體(Ng R)表達(dá)對宮內(nèi)感染所致腦損傷早產(chǎn)鼠行為學(xué)和病理學(xué)影響,初步闡明Ng R-Rho A信號通路在宮內(nèi)感染所致早產(chǎn)鼠腦損傷后修復(fù)中的可能作用機(jī)制。方法:隨機(jī)選取40只孕18天的SD大鼠,其中35只孕鼠是腹腔注入LPS0.25mg/(kg·次),每天1次,連用2天,獲得腦損傷早產(chǎn)鼠,隨機(jī)選取212只,雌雄不限,然后再隨機(jī)分為腦損傷組(62只)、陰性對照組(50只)和干擾組(50只),另外50只用于側(cè)腦室定位;對剩余5只孕鼠腹腔皮下注射等量的RU4860.15mg/(kg·次),每天1次,連用2天,誘導(dǎo)早產(chǎn),隨機(jī)選取62只,雌雄不限,為早產(chǎn)鼠組。早產(chǎn)組和腦損傷組早產(chǎn)鼠不做任何干預(yù);干擾組和陰性對照組,分別于出生后第1天(P1)側(cè)腦室1次性注入Ng R特異性si RNA和慢病毒空載體,劑量均為250ul/kg。根據(jù)實驗設(shè)計分別在P1(不包括干擾組和陰性對照組)、P3、P10、P14隨機(jī)選取新生鼠6只進(jìn)行心臟灌注取腦,分別制備腦組織冰凍切片和勻漿。HE染色觀察腦組織病理學(xué)變化、CD11b免疫熒光觀察小膠質(zhì)細(xì)胞活化,O4+免疫熒光觀察觀察OPCs分化,QRT-PCR檢查Ng R m RNA的表達(dá),Western-blot測定活性Rho A蛋白。各組剩余20只的早產(chǎn)鼠在P30應(yīng)用動物行為學(xué)軟件行行為學(xué)檢測。結(jié)果:1.Ng R m RNA:腦損傷組Ng R m RNA相對表達(dá)量在P1、P3均分別高于早產(chǎn)鼠組,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),至P10兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);干擾組的Ng R m RNA的相對表達(dá)量在P3均低于腦損傷組、陰性對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),P10、P14與早產(chǎn)鼠組、腦損傷組、陰性對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.Rho A蛋白:腦損傷組Rho A蛋白灰度值在P3明顯高于早產(chǎn)鼠組(P=0.00),并且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),至P10兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),干擾組Rho A蛋白灰度值在P3、P10明顯低于腦損傷組、陰性對照組,早產(chǎn)鼠組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),至P14與腦損傷組、陰性對照組、早產(chǎn)鼠組,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Ng Rm RNA相對表達(dá)量與Rho A蛋白的變化在P3、P10、P14呈正相關(guān)性(r=0.92,0.86,0.90)。3.HE染色:P10、P14天早產(chǎn)鼠組腦白質(zhì)區(qū)域組織無明顯稀疏,OPCs細(xì)胞數(shù)量較多;P10、P14腦損傷組在腦白質(zhì)區(qū)域組織稀疏,OPCs細(xì)胞數(shù)量明顯較少。4.CD11b免疫熒光:腦損傷組CD11b平均熒光強(qiáng)度在P1、P3、P10均分別高于早產(chǎn)鼠組,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),至P14兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);干擾組的CD11b平均熒光強(qiáng)度在P3、P10均低于腦損傷組、陰性對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),P14與早產(chǎn)鼠組、腦損傷組、陰性對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.O4+免疫熒光:O4抗體標(biāo)記的細(xì)胞中,在3天腦損傷組和陰性對照組中細(xì)胞形態(tài)為三極形態(tài);P10、P14腦損傷組與陰性對照組除了有三極細(xì)胞的形態(tài)外,還出現(xiàn)了部分細(xì)胞形態(tài)不一,并且呈散在分布。而在P3的早產(chǎn)鼠組和干擾組細(xì)胞除了有三極形態(tài)外,還有部分細(xì)胞呈現(xiàn)網(wǎng)狀分布;P10、P14的細(xì)胞出現(xiàn)三極形態(tài)、網(wǎng)狀分布外,還有部分細(xì)胞呈片狀分布。6.行為學(xué)檢測:懸吊實驗、拒俘實驗、曠場實驗、斜坡實驗中,腦損傷組評分在P30均高于早產(chǎn)鼠組,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),干擾組評分在腦損傷組、陰性對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.在經(jīng)LPS誘導(dǎo)的宮內(nèi)感染所致的早產(chǎn)鼠腦損傷中,Ng R-Rho A信號通路可能是腦損傷發(fā)生的重要機(jī)制之一。2.Ng R-Rho A信號通路在宮內(nèi)感染所致早產(chǎn)鼠腦損傷中的作用,可能通過該信號通路的持續(xù)激活,導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞過度活化損傷OPCs,同時抑制OPCs的分化。3.側(cè)腦室注射Ng R特異性si RNA能顯著改善宮內(nèi)感染所致的腦損傷早產(chǎn)鼠的行為學(xué)評分。表明干擾Ng R基因的表達(dá),抑制Ng R-Rho A信號通路激活在早產(chǎn)鼠腦損傷后的修復(fù)中具有腦保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：NgR特異性siRNA 宮內(nèi)感染 脂多糖
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R722.6
【目錄】：

• 摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-17
• 研究材料與方法17-27
• 實驗材料17-19
• 實驗方法19-27
• 1 實驗?zāi)Ｐ偷慕?/span>19-20
• 1.1 實驗動物19
• 1.2 早產(chǎn)鼠組和腦損傷組模型19
• 1.3 側(cè)腦室注射定位19-20
• 2 側(cè)腦室注射NgR si RNA的滴度和量20
• 3 QRT-PCR 實驗20-22
• 4 Western-blot22-24
• 5 心臟灌注取腦24-25
• 6 冰凍切片25
• 7 HE染色25
• 8 免疫熒光25-26
• 9 行為學(xué)檢測26-27
• 統(tǒng)計學(xué)分析27-28
• 實驗結(jié)果28-36
• 實驗討論36-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-52
• 綜述52-69
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果69-70
• 致謝70

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本文編號：430850