本文關(guān)鍵詞：黑龍江省兒童和伴侶動物三種重要腸道原蟲的分子流行病學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：由寄生蟲引起的疾病是全球感染性疾病的一個重要組成部分。一般在發(fā)達國家會引起人和動物相應(yīng)的疾病,然而在發(fā)展中國家則主要引起感染甚至死亡。2004年,世界衛(wèi)生組織報道由腹瀉引起的疾病比其他一些疾病更困擾人們。許多種腸道寄生性原蟲能引起人和動物的腹瀉,甚至引發(fā)更嚴(yán)重的疾病,尤其是在免疫功能缺陷的群體中。隱孢子蟲、畢氏腸微孢子蟲、藍氏賈第蟲是三種重要的引起人和動物腹瀉的病原,一般在免疫功能正常的群體中主要引起自限性腹瀉,而在免疫功能不全(HIV陽性患者)或者是免疫力低下的群體(如幼齡和老齡的人和動物)中會引起致死性腹瀉。因此得到較為廣泛的關(guān)注。本實驗采用巢式PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法對來自黑龍江省哈爾濱市、大慶市的255份兒童糞便樣本及哈爾濱市、大慶市和齊齊哈爾市的319份伴侶動物糞便樣本(其中犬的糞便樣本267份、貓的糞便樣本52份)分別進行隱孢子蟲、畢氏腸微孢子蟲和藍氏賈第蟲基因擴增。通過SSU RNA(小亞基核糖體RNA)擴增來對隱孢子蟲蟲種進行鑒定,結(jié)果顯示,本研究中貓和犬體內(nèi)隱孢子蟲的平均感染率分別為3.8%(2/52)和2.2%(6/267)。在貓的糞便樣本中鑒定出兩種隱孢子蟲:貓隱孢子蟲(C.felis(n=1))和微小隱孢子蟲(C.parvum(n=1)),其中貓隱孢子蟲和微小隱孢子蟲感染率均為1.9%(1/52),在犬的糞便樣本中鑒定出兩種隱孢子蟲,分別為犬隱孢子蟲(C.canis(n=5))和泛在隱孢子蟲(C.ubiquitum(n=1)),其中犬隱孢子蟲和泛在隱孢子蟲的感染率分別為1.9%(5/267)和0.4%(1/267)。然而在被研究的兒童糞便樣本中未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲陽性樣本。對畢氏腸微孢子蟲的檢測和分型則采用巢式PCR擴增ITS(轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)),結(jié)果發(fā)現(xiàn)兒童總體感染率為7.5%(19/255),其中哈爾濱市兒童感染率為11.9%(16/134),大慶市兒童感染率為2.5%(3/121)。男性感染率為6.5%(8/124),而女性感染率為8.4%(11/131)。4個腹瀉樣本感染率為25%(1/4),而非腹瀉樣本感染率為7.2%(18/251)。由此可見,畢氏腸微孢子蟲是引起腹瀉的重要原因。隨后對陽性樣本進行測序分型共獲得8種基因型包括3種已知的基因型CS-4(n=2)、Ebp C(n=11)和Henan-IV(n=3)及5種新發(fā)現(xiàn)的基因型NEC1(n=1)、NEC2(n=1)、NEC3(n=1)、NEC4(n=1)和NEC5(n=1),其中Henan-IV和NEC1、Ebp C和NEC4分別在哈爾濱醫(yī)院和小學(xué)樣本中呈現(xiàn)混合感染。同時本研究結(jié)果顯示在伴侶動物樣本中,共發(fā)現(xiàn)畢氏腸微孢子蟲陽性樣本21個其中包括18個犬和3個貓,而在這些動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)8種基因型,4種已知基因型D、Ebp C、IV和Pt Eb IX,4種新發(fā)現(xiàn)的基因型分別命名為NED1至NED4。系統(tǒng)進化分析顯示,在18個犬的樣本中發(fā)現(xiàn)有人畜共患潛力的基因型D(n=1)、Ebp C(n=2)、NED1(n=1)和NED2(n=1)及宿主特異性的基因型NED3(n=1)、NED4(n=1)和Pt Eb IX(n=14),其中基因型Ebp C和NED1、Pt Eb IX和NED3混合感染見于哈爾濱動物醫(yī)院的樣本中,而Pt Eb IX和NED4的混合感染出現(xiàn)在哈爾濱寵物市場樣本中。在3個貓的樣本中發(fā)現(xiàn)能造成人畢氏腸微孢子蟲病的基因型D(n=2)和IV(n=1)。在伴侶動物和人的糞便樣本中均發(fā)現(xiàn)的基因型為Ebp C。本實驗利用巢式PCR方法對兒童和伴侶動物的樣本進行賈第蟲TPI(磷酸丙糖異構(gòu)酶)基因的檢測。在所有的兒童樣本中均沒有發(fā)現(xiàn)賈第蟲陽性,在貓和犬的糞便樣本樣本中發(fā)現(xiàn)賈第蟲感染率分別為1.9%(1/52)和4.5%(12/267),共鑒定出3種集聚體類型(F、C和E)。其中集聚體F見于一個貓中而集聚體C(n=7)和E(n=5)被發(fā)現(xiàn)在12個犬中。本實驗在伴侶動物中鑒定出的隱孢子蟲蟲種C.canis、C.felis和C.parvum,畢氏腸微孢子蟲基因型D、Ebp C和IV以及賈第蟲集聚體C在我國人體內(nèi)都有感染的報道。在伴侶動物犬貓中發(fā)現(xiàn)的隱孢子蟲蟲種C.canis、C.parvum和C.ubiquitum,畢氏腸微孢子蟲基因型D、Ebp C和IV同時存在于我國的廢水中。綜上所述,伴侶動物可能是人隱孢子蟲病、畢氏腸微孢子蟲病和賈第蟲病的貯存宿主和潛在的水污染的重要來源,伴侶動物可能是人感染的主要媒介,是人患疾病的重要的風(fēng)險因素之一,它們可能會在人之間傳播人畜共患病。因此,研究這三種原蟲的流行情況和基因型分布對制定良好的預(yù)防措施、控制感染以及防止人畜共患病的暴發(fā)均有重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：隱孢子蟲 畢氏腸微孢子蟲 賈第蟲 系統(tǒng)進化分析
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R725.3;S855.9
【目錄】：

• 摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 引言12-21
• 1.1 隱孢子蟲12-15
• 1.1.1 隱孢子蟲和隱孢子蟲病12
• 1.1.2 隱孢子蟲的生活史12
• 1.1.3 隱孢子蟲的分類12-15
• 1.2 畢氏腸微孢子蟲15-18
• 1.2.1 畢氏腸微孢子蟲的簡介15-16
• 1.2.2 畢氏腸微孢子蟲的生活史16-17
• 1.2.3 畢氏腸微孢子蟲的檢測17
• 1.2.4 畢氏腸微孢子蟲的基因分型和基因型17-18
• 1.3 藍氏賈第蟲18-20
• 1.3.1 賈第蟲和賈第蟲病18-19
• 1.3.2 藍氏賈第蟲的生活史19
• 1.3.3 藍氏賈第蟲的集聚體19-20
• 1.4 研究的目的與意義20-21
• 2 材料和方法21-26
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 樣本制備21
• 2.1.2 主要試劑21-22
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備22
• 2.2 方法22-26
• 2.2.1 DNA提取22-23
• 2.2.2 隱孢子蟲蟲種、賈第蟲集聚體和畢氏腸微孢子蟲的基因型的檢測23-24
• 2.2.3 PCR產(chǎn)物結(jié)果檢測24
• 2.2.4 PCR產(chǎn)物測序24
• 2.2.5 測序結(jié)果的分析24-25
• 2.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析25
• 2.2.7 系統(tǒng)進化分析25-26
• 3 結(jié)果26-37
• 3.1 糞便樣本中隱孢子蟲蟲種的檢測26-27
• 3.2 糞便樣本中畢氏腸微孢子蟲的檢測27-31
• 3.2.1 糞便樣本中畢氏腸微孢子蟲的感染率27-29
• 3.2.2 糞便樣本中畢氏腸微孢子蟲的基因型29-31
• 3.3 糞便樣本中賈第蟲的集聚體檢測31-32
• 3.4 糞便樣本中三種腸道原蟲的感染情況32-33
• 3.5 畢氏腸微孢子蟲的系統(tǒng)進化分析33-37
• 4 討論37-40
• 5 結(jié)論40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻42-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文50

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：黑龍江省兒童和伴侶動物三種重要腸道原蟲的分子流行病學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：367670