第一部分缺氧缺血誘導(dǎo)PTEN核轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制及抑制PTEN核轉(zhuǎn)移在HIBD大鼠中的神經(jīng)保護(hù)作用目的:新生兒缺氧缺血性腦病（Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）是導(dǎo)致新生兒或者圍產(chǎn)兒死亡和神經(jīng)元損傷的主要原因。然而目前針對HIE尚沒有令人滿意的治療方法。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在興奮性/缺血性神經(jīng)元損傷的體外和體內(nèi)模型中人類第10號染色體同源缺失性磷酸酶張力蛋白（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）核轉(zhuǎn)移增加,而抑制PTEN核轉(zhuǎn)移降低了興奮性/缺血引起的神經(jīng)元死亡。因此本研究旨在探究在發(fā)育期的大腦中缺氧缺血誘導(dǎo)PTEN核轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制以及抑制PTEN核轉(zhuǎn)移對缺氧缺血引起的神經(jīng)元損傷的影響,并闡明抑制PTEN核轉(zhuǎn)移對HIE的動物模型缺氧缺血性腦損傷（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）大鼠行為缺陷的保護(hù)作用。方法:（1）孕18-20天的SD（Sprague Dawley,SD）胎鼠用于體外培養(yǎng)原代海馬和皮層神經(jīng)元,培養(yǎng)的第3天用慢病毒處理,... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代神經(jīng)元中OGD后總蛋白和核蛋白中PTEN蛋白水平

圖 2 原代培養(yǎng)的神經(jīng)元中 OGD 后不同時間點 PTEN 核轉(zhuǎn)移情況。Fig. 2 Immunofluorescence figure of PTEN nuclear translocation induced by OGD atdifferent time in primary neurons.2.3 OGD 后 PTEN 的單泛素化情況圖 1 和 2 實驗結(jié)果表明 OGD 后 PTEN 核轉(zhuǎn)移增加，且最近在癌細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn)核內(nèi) PTEN 累積的增加與 PTEN 單泛素化有關(guān)[38]，特別是 PTEN 的 13 位和289 位賴氨酸位點的單泛素化[33, 39]，首先我們在 HEK293T cell 和原代神經(jīng)元中檢測 OGD 后 PTEN 的單泛素化情況。研究結(jié)果顯示：不管是在 HEK293T cell 還是在原代神經(jīng)元中，與對照組相比，OGD 后 PTEN 出現(xiàn)單泛素化（圖 3A，B）。該結(jié)果表明 OGD 誘導(dǎo)的 PTEN 核轉(zhuǎn)移與 OGD 誘導(dǎo)的 PTEN 單泛素化有關(guān)。

接下來我們想要確定已經(jīng)報道過的與 PTEN 單泛素化入核有關(guān)的 PTEN 的 1位和 289 位位點的突變對 OGD 誘導(dǎo)的 PTEN 入核的影響。Westernblot 結(jié)果顯示：PTEN 的 13 位位點突變能明顯的抑制 OGD 誘導(dǎo)的 PTEN 核轉(zhuǎn)移（HEK293T celn=5，EGFP-PTENK13R+OGD 組，p＜0.01vs.EGFP-PTENWT+OGD 組。原代神經(jīng)元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 組，p＜0.01 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 組）（圖 4AB），但是PTEN的289位位點突變對OGD誘導(dǎo)的PTEN核轉(zhuǎn)移沒有影響（HEK293cell：n= 5，EGFP-PTENK289R+OGD 組，p＞0.05 vs. EGFP-PTENWT+ OGD 組。原代神經(jīng)元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 組，p＞0.05 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 組）（圖 4A，B）。說明 PTEN 的 13 位位點在 OGD 誘導(dǎo)的 PTEN 核轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。


本文編號：3140343