目的： 研究前B細(xì)胞集落促進(jìn)因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor，PBEF)誘導(dǎo)正常人以及重型先天性中性粒細(xì)胞減少癥患者(severe congenital neutropenia，SCN)的CD34~+細(xì)胞向髓系細(xì)胞分化功能。 方法： 1、利用激光輔助骨髓涂片單個(gè)細(xì)胞采集技術(shù)及逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測正常人骨髓中不同分化階段髓系細(xì)胞PBEF表達(dá)水平。 2、用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR及ELISA方法檢測正常人的髓系細(xì)胞經(jīng)粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)體內(nèi)、外刺激后PBEF mRNA表達(dá)水平、細(xì)胞培養(yǎng)液或血漿中PBEF蛋白質(zhì)水平，同時(shí)檢測細(xì)胞煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+)合成水平的變化，研究G-CSF刺激與PBEF表達(dá)、NAD~+合成的關(guān)系。 3、用人類重組PBEF體外刺激正常人的CD34~+細(xì)胞后，通過光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、流式細(xì)胞術(shù)檢測表面抗原CD11b、CD15的表達(dá)以及逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR檢測細(xì)胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表達(dá)，研究PBEF胞外刺激與CD34~+細(xì)胞向髓系分化的關(guān)系。 4、正常人的CD34~+細(xì)胞經(jīng)由Lentivirus轉(zhuǎn)導(dǎo)PBEF基因后，光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、流式細(xì)胞術(shù)檢測表面抗原CD11b、CD15的表達(dá)變化以及逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR檢測細(xì)胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表達(dá)變化，研究PBEF胞內(nèi)過度表達(dá)與CD34~+細(xì)胞向髓系分化的關(guān)系。 5、用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR、ELISA方法以及共聚焦熒光顯微鏡斷層掃描技術(shù)檢測經(jīng)長期G-CSF治療的SCN病人髓系細(xì)胞的PBEF mRNA、胞內(nèi)蛋白質(zhì)水平以及血漿蛋白質(zhì)水平的變化，研究G-CSF治療后SCN病人髓系細(xì)胞“成熟障礙”的糾正與PBEF表達(dá)變化的關(guān)系
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類】：R725.5
【部分圖文】：

3.SCN的臨床特征SCN病人自生后就頻繁出現(xiàn)嚴(yán)重的細(xì)菌感染，首發(fā)癥狀多為口腔炎，但中耳炎、上呼吸道感染、肺炎、皮膚膿腫、肝膿腫也不少見。血培養(yǎng)常見格蘭氏陽性葡萄球菌或鏈球菌生長，假單胞菌和消化鏈球菌屬的細(xì)菌偶見，有時(shí)也可檢出真菌。SCN的ANC小于或等于.02xlo沉，有時(shí)伴有輕度的貧血和血小板增多以及單核細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞的增高。大多數(shù)病人的gIG水平稍增高，接種疫苗后產(chǎn)生的特殊免疫能力正常，血液生化檢查如電解質(zhì)、肝腎功能正�！�8’。所有SCN的骨髓形態(tài)學(xué)檢查都共有一個(gè)別于其他粒細(xì)胞減少癥的特征性表現(xiàn)，即粒細(xì)胞的前體細(xì)胞在早幼粒一中幼粒階段“成熟障礙”。骨髓中的早幼粒細(xì)胞輕度升高，嗜酸性細(xì)胞常增多，巨核細(xì)胞形態(tài)及數(shù)目正常如圖1、2所示。
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李潔;前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子（PBEF）在急性胰腺炎肺損傷大鼠肺組織中的表達(dá)與功能及清胰湯干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號：2881430