腺病毒載體介導(dǎo)共刺激分子B7.1基因?qū)和文讣?xì)胞瘤體外生物學(xué)特性的影響 實驗背景和目的 人體的抗腫瘤免疫以T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主，T細(xì)胞的活化需雙信號刺激：第一信號由T細(xì)胞抗原受體(TCR)與抗原提呈細(xì)胞(A PC)上的抗原肽-MHC分子復(fù)合物結(jié)合提供，第二信號由A PC上的共刺激分子與T細(xì)胞上的相應(yīng)配體結(jié)合提供。只有雙信號共同刺激才能有效激活特異性的T細(xì)胞，缺乏第二信號造成T細(xì)胞克隆凋亡，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生免疫逃避。A PC上的共刺激分子主要是一些粘附分子，其中B7-1分子是重要的粘附分子。肝母細(xì)胞瘤被認(rèn)為是一種弱免疫原性的惡性腫瘤，腫瘤細(xì)胞表面缺乏足夠的可以與淋巴細(xì)胞表面結(jié)合的配體，主要是指B7-1(CD80)和B7-2(CD86)，其中缺乏B7-1分子的表達(dá)是其無法提供第二信號的重要原因。我們希望通過基因轉(zhuǎn)染的技術(shù)手段達(dá)到提高肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞表面的B7-1分子抗體表達(dá)水平，恢復(fù)其傳導(dǎo)第二信號刺激的能力，從而誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)的目的。為此，我們進(jìn)行了以下的實驗研究。 1．檢測肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞中B7-1分子的表達(dá)水平。 2．通過含hB7-1基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞株，建立B7-1分子高表達(dá)的陽性克隆。 3．觀察轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞B7-1分子的表達(dá)水平及細(xì)胞生物學(xué)特性的變化 4．觀察轉(zhuǎn)染含hB7-1基因的瘤苗對T淋巴細(xì)胞增殖的影響。 實驗方法 通過含hB7-1基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測HepG2和HepG2／hB7-1細(xì)胞表面B7-1分子的表達(dá)水平。觀察HepG2和HepG2／hB7-1細(xì)胞的生長曲線。用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法檢測瘤苗對T淋巴細(xì)胞增殖的影響。 實驗結(jié)果 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測HepG2細(xì)胞表面B7-1分子表達(dá)水平，其陽性率為1.1％，而通過含hB7-1基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)入HepG2腫瘤細(xì)胞后，HepG2／hB7-1的B7-1分于陽性率達(dá)到18.5％。轉(zhuǎn)染B7-1基因后較轉(zhuǎn)染前提高了16.8倍。HepG2和HepG2／hB7-1的生長曲線相比，后者生長曲線上升減緩，生長速度減慢。轉(zhuǎn)染B7-1基因和未轉(zhuǎn)染B7-1基因的瘤苗同健康兒童的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)顯示，B7-1分子的表達(dá)促進(jìn)了淋巴細(xì)胞的增殖，較對照組有顯著性差異(p＜0.05)。 結(jié)論 1．HepG2表面B7-1分子的低水平表達(dá)是其弱免疫原性的主要原因。 2．含hB7-1基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染HepG2可以獲得B7-1分子高表達(dá)的陽性克隆。 3．含hB7-1基因的重組腺病毒載體的轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后可以降低肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞的惡性表征。 4．含hB7-1基因的重組腺病毒載體的瘤苗可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R735.7
【文章目錄】：
一、摘要
    中文論著摘要
    英文論著摘要
二、英文縮略語
三、論文
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    本研究創(chuàng)新性的自我評價
    參考文獻(xiàn)
四、附錄
    綜述
    致謝
    個人簡介

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本文編號：2881137