研究背景： 腸息肉是引起兒童便血的最常見原因之一,其中幼年性息肉是兒童期最常見的病理類型,發(fā)生機(jī)制尚不明確,大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其預(yù)后良好,但仍有一定的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和惡變潛能。近年來,遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)機(jī)制在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用逐漸受到重視。對成人的研究表明,由于基因突變等原因,腸干細(xì)胞中β-catenin過度積聚,使腸干細(xì)胞自我更新、克隆增殖和分化的速度超過正常腸上皮組織細(xì)胞凋亡的速度,導(dǎo)致腸上皮組織細(xì)胞不斷擴(kuò)增并超過鄰近的正常腸隱窩,形成腸息肉。而細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的Wnt信號通路、PTEN信號通路和BMP信號通路,共同調(diào)節(jié)腸干細(xì)胞中β-catenin水平,使腸上皮細(xì)胞的更新和凋亡處于動(dòng)態(tài)平衡,從而控制腸道上皮細(xì)胞再生和正常發(fā)育的過程。APC是腫瘤抑制基因,也是經(jīng)典的Wnt通路的阻滯劑；PTEN是磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)信號通路抑制劑,與Wnt通路共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的更新和凋亡速度。但對兒童最常見的大腸幼年性息肉,尚未見相應(yīng)抑癌基因APC、PTEN突變的報(bào)導(dǎo)。 表觀遺傳修飾如DNA甲基化、組蛋白乙�；彩悄壳澳[瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。在成人結(jié)直腸癌中,許多基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化已成為腫瘤檢測、治療和預(yù)后評價(jià)的分子標(biāo)記。而組蛋白乙酰化狀態(tài)由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HATs)和組蛋白去乙�；�(HDACs)調(diào)節(jié)。HATs和HDACs之間的動(dòng)態(tài)平衡控制著染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因的表達(dá),它們的功能紊亂是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要分子機(jī)制。但在兒童幼年性息肉的發(fā)生中是否也存在著APC基因啟動(dòng)子甲基化的改變,以及組蛋白HATs和HDACs功能紊亂目前尚不清楚。 目的： 通過檢測兒童大腸幼年性息肉、息肉蒂部黏膜及正常大腸黏膜組織中的抑癌基因APC、PTEN和癌基因β-catenin的mRNA和蛋白水平的表達(dá),及息肉組織APC基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)、乙酰轉(zhuǎn)移酶和去乙�；副磉_(dá)的差異,探討兒童腸息肉中相關(guān)腫瘤基因APC、PTEN及β-catenin的表達(dá)及表觀遺傳修飾變化,試圖闡明兒童腸息肉形成的發(fā)病機(jī)制,為尋找新的防治策略提供理論依據(jù)。 方法： 留取本院經(jīng)電子結(jié)腸鏡檢查確診并切除的新鮮息肉組織、息肉蒂部黏膜和同期結(jié)腸鏡檢查正常的大腸黏膜組織,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測兒童大腸息肉、息肉蒂部黏膜及正常大腸黏膜組織中的抑癌基因APC、PTEN和癌基因β-catenin及乙酰轉(zhuǎn)移酶(CBP、PCAF、P300)、去乙�；�(HDAC4、HDAC1)的mRNA表達(dá)；采用免疫組織化學(xué)檢測APC、PTEN、β-catenin的蛋白表達(dá)水平；同時(shí)應(yīng)用亞硫酸氫鹽基因組測序法(bisulfite genomic sequencing)檢測息肉組織及正常大腸黏膜APC基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)。 結(jié)果： 多發(fā)息肉與單發(fā)息肉β-catenin mRNA表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而PTEN和APC mRNA表達(dá)下降,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多發(fā)息肉與單發(fā)息肉蒂部黏膜β-catenin mRNA表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PTEN mRNA表達(dá)下降,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而APC的變化不明顯。多發(fā)息肉和單發(fā)息肉APC和PTEN的蛋白表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,β-catenin的蛋白表達(dá)增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。無論在息肉、息肉蒂部黏膜還是正常大腸黏膜組織,β-catenin全部為膜線性表達(dá)。測序發(fā)現(xiàn)APC基因擴(kuò)增病例中除個(gè)別息肉蒂部黏膜樣本APC CpG島甲基化率為10%,其余息肉、息肉蒂部黏膜及正常大腸黏膜APC基因擴(kuò)增產(chǎn)物所有CpG都變成了TpG,提示未發(fā)生甲基化。多發(fā)息肉和單發(fā)息肉乙酰轉(zhuǎn)移酶CBP下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,去乙�；窰DACl增加(P=0.051),其余乙�；傅牟町悷o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多發(fā)息肉和單發(fā)息肉蒂部黏膜乙酰轉(zhuǎn)移酶CBP下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其余乙酰化酶的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 兒童大腸息肉,無論是單、多發(fā)息肉還是其蒂部黏膜,在基因轉(zhuǎn)錄水平β-catenin的表達(dá)明顯增加,而在蛋白質(zhì)水平APC和PTEN的表達(dá)明顯下降,同時(shí)乙�；某潭葴p弱,而APC基因的甲基化事件發(fā)生頻率較低。表明抑癌基因的表達(dá)下降和癌基因的表達(dá)增加可能參與了兒童大腸息肉的形成,乙酰化程度下降可能是其表觀遺傳特點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R735.3
【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
主要儀器和設(shè)備
目次
引言
第一部分 兒童腸息肉相關(guān)腫瘤基因的表達(dá)及意義
    1 前言
    2 對象與方法
        2.1 研究對象
        2.2 主要試劑
        2.3 方法
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 免疫組化染色結(jié)果
        3.2 實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果
    4 討論
第二部分 兒童腸息肉組織中APC基因啟動(dòng)子甲基化和組蛋白修飾相關(guān)酶的檢測及意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 APC基因甲基化結(jié)果
        3.2 組蛋白修飾相關(guān)酶的檢測結(jié)果
    4 討論
        4.1 APC基因甲基化與兒童腸息肉
        4.2 組蛋白乙�；揎椬兓c兒童腸息肉
結(jié)論
附圖
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷及在學(xué)期間發(fā)表的文章

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本文編號：2878002