生長激素缺乏癥(growth hormone deficiency, GHD)嚴重影響患兒的身心健康,正越來越得到社會及家長的重視。重組人生長激素(recombinant human growth hormone, rhGH)替代治療是臨床上治療GHD的重要手段之一,其優(yōu)點是安全有效,不足之處是藥價高、療程長,且存在明顯的個體差異。一些研究者依據(jù)治療起始時患兒的臨床資料建立數(shù)學模型以預測療效,但預測能力不足,尚需探討其他影響因素；從2004年開始,影響rhGH療效的遺傳因素得到關注,但是多數(shù)研究局限于生長激素受體(growth hormone receptor, GHR) fl/d3多態(tài)性與rhGH療效的相關性,各研究結論不盡相同,僅個別涉及胰島素樣生長因子結合蛋白-3(Insulin-like growth factor binding protein-3, IGFBP-3)-202A/C基因多態(tài)性；尚未見到針對中國漢族GHD患兒進行的rhGH遺傳藥理學研究及數(shù)學預測模型的探討。因此,本研究希望探討影響這一人群中rhGH促線性生長效應的遺傳及非遺傳因素,并通過判斷各因素對療效的影響程度建立數(shù)學預測模型,以促進rhGH的個體化用藥及療效評估。 本研究首先篩選了影響rhGH療效的候選基因GHR和IGFBP-3,并建立了GHRf1/d3和IGFBP-3 rs2854744(-202A/C) rs3110697(G/A X rs2132570(C/A)及rs2854746(G/C)等5個位點基因型的測定方法,采用聚合酶鏈式反應(PCR)、聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)分析(PCR-RFLP)及連接酶特異檢測技術(LDR)等,對入選的100例健康受試者及85例GHD患者各位點基因型進行了分析,結果表明,健康受試者與GHD患者中GHR fl/fl、fl/d3和d3/d3的基因型頻率分別為0.450、0.520和0.030與0.647、0.329和0.024；IGFBP-3 rs2854744上AA、AC和CC的基因型頻率分別為0.560、0.370和0.070與0.553、0.400和0.047；rs3110697上GG、GA和AA的基因型頻率分別為0.510、0.400和0.090與0.529、0.412和0.059；rs2132570上CC、CA和AA的基因型頻率分別為0.630、0.310和0.060與0.612、0.365和0.024；rs2854746上GG、GC和CC的基因型頻率分別為0.550、0.380和0.070與0.565、0.400和0.035。以上各位點基因型分布頻率在中國漢族健康受試者及GHD患者中沒有統(tǒng)計學差異,選擇這些基因多態(tài)性作為可能影響GHD患者經(jīng)rhGH治療后生長速度的因素不受干擾。 同時,本研究選擇了經(jīng)rhGH治療的60例GHD患者,采集每例患者的血標本并測定其上述5個位點的基因型,同時收集其臨床資料,包括一般資料、病史、診斷、治療及隨訪等相關信息,考察漢族GHD患者5個位點基因多態(tài)性與rhGH促線性生長效應的相關性,結果表明開始治療時不同基因型的患者之間年齡、骨齡、激素水平等指標無統(tǒng)計學差異；影響60例GHD患者rhGH治療3個月生長速度的遺傳因素為rs2132570及rs2854746；影響44例治療6個月療效的遺傳因素為GHR fl/d3;影響治療12個月療效的遺傳因素為rs2854744、rs2132570及rs2854746。 此外,本研究選擇經(jīng)rhGH治療且在治療6個月時有隨訪資料的GHD患者,并將他們分為兩組：A組中35例患者臨床資料完善且有基因型記錄,用于建立未納入及納入遺傳因素的兩種rhGH治療6個月生長速度(GV6)的預測模型(分別為模型A1和A2)；B組中90例患者僅有完善的臨床資料但無基因型記錄,用于擴大樣本量考察影響GV6的非遺傳因素(模型B),三種模型均由未參與建立模型的GHD患者組驗證。采用多元線性回歸分析后,模型A1為：GV6 (cm/y)=15.386-0.556xGHpeak(μg/l)-0.284×初始治療體重(kg)+1.703xrhGH劑量(IU),能解釋58.9%的藥效差異(r2=0.589),標準誤(cm)為1.81；模型A2為：GV6 (cm/y)=13.312+1.324×fl/d3多態(tài)性(fl/fl=l, fl/d2=2, d3/d3=3)-0.550xGH peak (μg/l)-0.243×初始治療體重(kg)+1.419xrhGH劑量(IU),能解釋GV6個體差異的63.4%(r2=0.634),標準誤(cm)為1.79。由r2可知模型A2比模型A1解釋個體差異的能力提高,由標準誤可知兩種模型均有較高的準確度。模型B為：GV6 (cm/y)=25.313-0.461xGH peak (μg/L)-0.084x初始治療身高(cm)-0.221x初始治療骨齡(y),能解釋GV6個體差異的61.5%(r2=0.615),標準誤(cm)為2.64。將驗證組數(shù)據(jù)帶入以上3種模型后,觀察值和預測值之間無顯著差異(P＞0.05),預測結果準確,模型中所有預測指標均容易獲得,因此具有實際應用價值。 最后,本課題為了解矮小癥患兒監(jiān)護人對rhGH治療相關知識的認知狀況,設計問卷調查表并在我院內分泌科矮小�？崎T診開展問卷調查,調查內容涉及藥品的保存與使用、藥品療效與副作用的認識、隨訪目的的了解、藥品說明書及其他診療信息的獲取與關注、患兒身心壓力的觀察及疏導等多個方面。67份調查問卷的結果表明多數(shù)監(jiān)護人能夠正確保存與使用藥品、用藥依從性好,且注重與加強非藥物治療,但在藥物不良反應與隨訪目的的理解及關注與疏導患兒身心壓力等方面存在不足；另外,監(jiān)護人希望對疾病相關知識、性發(fā)育能力的判斷等信息有更多的了解。以上結果能夠為醫(yī)務人員對矮小癥患兒及監(jiān)護人開展針對性的用藥教育提供依據(jù)。 本課題的初步結論是： 1.中國漢族人GHR上fl/d3基因型與IGFBP-3上rs2854744、rs3110697、rs2132570及rs2854746等5個位點存在基因多態(tài)性；以上各位點的基因型與GHD發(fā)病無顯著的相關性。 2. GHR fl/d3與IGFBP-3 rs2854744、rs2132570、rs2854746等基因多態(tài)性可能是rhGH療效的影響因素。 3.建立GHD患者經(jīng)rhGH治療6個月生長速度的3種預測模型： 模型A1:GV6 (cm/y)=15.386-0.556xGH peak (μg/L)-0.284x初始體重(kg)+1.703×rhGH劑量(IU)；r2=0.589,標準誤為1.81 cm； 模型A2:GV6 (cm/y)=13.312+1.324xfl/d3多態(tài)性(fl/fl=l, fl/d2=2, d3/d3=3)-0.550xGH peak (μg/L)-0.243x初始體重(kg)+1.419xrhGH劑量(IU)；r2=0.634,標準誤為1.79 cm。 與模型A1相比,納入遺傳因素的模型A2解釋生長速度差異的能力及準確度提高。 僅納入非遺傳因素的模型B:GV6 (cm/y)=25.313-0.461×GH peak (μg/L)-0.084×初始身高(cm)-0.221×初始骨齡(y)；r2=0.615,標準誤為2.64 cm。 4.患兒及其母親應當是醫(yī)務人員用藥教育的主要對象。用藥教育的內容需結合患兒/監(jiān)護人主要的關注信息及他們知識不足之處等兩方面考慮,如疾病相關知識、藥品的療效及不良反應觀察、性發(fā)育能力的判斷、患兒心理壓力的緩解等內容。
【學位單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R725.8
【部分圖文】：

thGH的藥理作用機制

3.2.1GHRfl/d3多態(tài)性 3.2.1.1fl/d3基因型判讀用于檢測 GHRfl/d3基因型的PCR產(chǎn)物的電泳圖譜，如圖2一1所示。一夕35bP一532bp圖2一 1GHR即d3基因型PCR產(chǎn)物的電泳檢測結果(注:圖中l(wèi)為fl/d3，2為fl/fl，3為d3/d3)測序結果與電泳結果完全吻合，表明在本研究的PCR擴增條件特異、準確，檢27

協(xié)和醫(yī)學院北京協(xié)和醫(yī)院碩士學位論文侯文蜻2010年5月切產(chǎn)物的電泳圖譜進行判讀，部分結果如圖2一3所示一463bP一241bp+222bp圖2一 3rs28547科(一A202C)多態(tài)性酶切產(chǎn)物的電泳檢測結果(注:圖中l(wèi)、2、4、5、6為野生型純合子AA，3為突變型雜合子AC，7為突變型純合子CC)測序結果與電泳結果完全吻合，表明在本研究建立的PCR一RFLP分析方法特異、準確，檢測結果真實可靠，部分PCR擴增產(chǎn)物的測序結果如圖2一4所示。210 CGTG盛 GCAC210 CGTGCGC盛圖2一4:52854744(一202C)多態(tài)性PCR一RFLP結果的測序確證圖譜(注:a、b、。分別為野生純合子AA、突變型雜合子AC、突變型純合子CC的測序圖譜，3種基因型如圖中箭頭所示)3.2.1.2健康受試者的:52854744(一A202C)多態(tài)性基因型群體頻率通過PCR一燈LP分析技術，本研究檢測到漢族健康受試者IGFBP一3基因啟動子一202刀A、一202A/C與一202C/C基因型頻率與一202A與一202C等位基因頻率如表2一8所示。表2一 8100例漢族健康受試者rs2854744(一202C)多態(tài)性的分布
【引證文獻】

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1 王穎;rhGH治療兒童矮小癥促身高增長影響因素的研究[D];天津醫(yī)科大學;2012年

本文編號：2877884