目的新生兒缺氧缺血性腦病是大多源于圍產(chǎn)期胎兒宮內(nèi)缺氧,是引起腦性癱瘓、智力落后、癲癇的主要原因之一,嚴(yán)重威脅新生兒生命健康,目前尚無特別有效的治療手段。目前認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)軸突再生的主要障礙之一是存在抑制再生的蛋白,迄今,人們發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)軸突再生抑制因子包括可溶性髓磷脂相關(guān)糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte myelin glycoprotein,OMgp)和Nogo蛋白三種。Chen和Prinjha以及Grandpre的課題組在2000年成功地克隆了Nogo基因,Nogo有三種同源異構(gòu)體:Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C。其中Nogo-A主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),并因在體外培養(yǎng)時具有很強的軸突生長抑制作用而倍受關(guān)注。最近的研究又證實,這三個不同的抑制成分可能主要通過與一個共同的受體Nogo-66受體(NgR)結(jié)合而發(fā)揮作用。NEP1-40是針對Nogo—66氨基酸序列的結(jié)構(gòu)區(qū)設(shè)計的NgR競爭性拮抗劑,能阻斷中樞神經(jīng)抑制因子與NgR的結(jié)合發(fā)揮作用。 本研究采用免疫組化方法檢測受試大鼠大腦Nogo-A蛋白的表達(dá);電鏡下觀察各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞生長情況;HE染色觀察腦組織病理變化;給予Nogo受體拮抗劑及神經(jīng)節(jié)甘脂(GM-1),觀察不同時段各組受試大鼠腦組織Nogo—A陽性細(xì)胞的表達(dá)情況及神經(jīng)細(xì)胞生長情況,探討Nogo-A在新生大鼠HIBD中的作用,觀察NEP1-40與GM-1對大鼠Nogo-A表達(dá)的影響及對神經(jīng)損傷后的保護作用,為進(jìn)一步研究新生兒缺氧缺血性腦病有效治療方式提供動物實驗依據(jù)。 方法將128只7日齡新生大鼠隨機分為對照組、缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型組、NEP1-40治療組及GM-1治療組。以上各組均在6h、24h、72h、7d四時間點采集標(biāo)本,每組8只。HIBD組及治療組參照Rice法制備標(biāo)準(zhǔn)HIBD模型,治療組分別于造模后即刻腹腔注射NEP1-40 12.5μg/d,GM-1 10 mg/(kg.d),視分組情況連用3天或7天�？瞻讓φ战M與模型組腹腔注射生理鹽水0.25 ml/kg。各組動物分別處理后于6h、24h、72h、7d四時間點斷頸處死。將腦組織標(biāo)本固定于30%蔗糖、4%多聚甲醛溶液中靜置72h,石蠟固定,切片,HE染色觀察各組大鼠腦組織病理變化;用免疫組化的方法觀察Nogo-A陽性細(xì)胞數(shù)目;透射電鏡觀測其腦神經(jīng)元與軸突的變化。 結(jié)果①對照組4個時段的新生大鼠腦組織Nogo-A陽性細(xì)胞數(shù)均隨著日齡的增長而略有增加,但各時間段比較無統(tǒng)計學(xué)意義。②HIBD組:Nogo-A陽性細(xì)胞在造模早期即明顯上升呈逐漸升高趨勢。③NEP1-40組:NEP1-40治療組能抑制HIBD后Nogo-A的表達(dá),與同時段模型組對比有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。④GM-1組:Nogo-A的陽性細(xì)胞數(shù)早期升高,至24h時達(dá)高峰,然后開始下降,其抑制HIBD后Nogo-A表達(dá)的作用發(fā)生較遲后。 透射電鏡①HIBD組:神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則,線粒體腫脹、空泡變性,可見多量凋亡小體。軸突溶解或嚴(yán)重破裂。②NEP1-40組:6h神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則,核邊聚,軸突溶解。24h胞體腫脹明顯,核形規(guī)則,核仁可見,核質(zhì)有溶解,可見較多凋亡小體,無再生現(xiàn)象;72h及7天時腦組織結(jié)構(gòu)已明顯恢復(fù)。③GM-1組:6h、24h HIBD損傷改變不明顯;7天時神經(jīng)元腫脹漸消失,膠質(zhì)細(xì)胞呈反應(yīng)性增生,軸突再生不明顯。 結(jié)論Nogo-A在缺氧缺血性腦損傷后早期即表達(dá)增高,并呈遞增趨勢;Nogo-A可抑制中樞神經(jīng)損傷后的再生,NEP1-40能拮抗這一作用,能減輕細(xì)胞水腫、改善局部血流供應(yīng),從而可能在促進(jìn)缺氧缺血性腦損傷后神經(jīng)再生中起到重要作用。神經(jīng)節(jié)苷脂GM-1在缺氧缺血性腦損傷后也可部分抑制Nogo-A的表達(dá),有穩(wěn)定細(xì)胞膜、減輕細(xì)胞水腫的作用。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R722.12
【部分圖文】：

對神經(jīng)生長具有促進(jìn)及抑制兩種截然相反的作用。隨著生長發(fā)，MAG由促進(jìn)神經(jīng)生長轉(zhuǎn)變?yōu)橐种乒δ�，而且，新生神�?jīng)在髓鞘上生長的力與其在體內(nèi)自發(fā)再生的能力相關(guān)，提示MAG可能在神經(jīng)生長發(fā)育中的不階段發(fā)揮調(diào)控作用。其神經(jīng)生長抑制作用是通過與Nogo受體特異性結(jié)合誘軸突生長錐潰變來實現(xiàn)的，但MAG不會造成樹突生長錐潰變。2)少突膠質(zhì)細(xì)胞一髓磷脂糖蛋白少突膠質(zhì)細(xì)胞一髓磷脂糖蛋白(oligodendroeyte一myelinglyeoprotein，OM即)是一種具有誘導(dǎo)生長錐崩解和抑制神經(jīng)生長的髓磷脂蛋白，是糖基磷脂酞肌(GPI)錨定蛋白120]。OMgP在少突膠質(zhì)細(xì)胞和多種神經(jīng)元中表達(dá)，同時在NS中亦發(fā)現(xiàn)有表達(dá)。OMgP位于細(xì)胞表面和髓磷脂中，其在大鼠腦神經(jīng)元中Nogo受體特異性結(jié)合后對神經(jīng)生長的抑制和誘導(dǎo)生長錐的潰變作用與ogo一“的抑制作用極為相似。MAG及OMgP的結(jié)構(gòu)見附圖2。

山東大母碩士母位論灰的結(jié)構(gòu)形成，而且也作為調(diào)節(jié)軸突引導(dǎo)受體的理想選擇。NgR與p75NTR形成復(fù)合受體與配體結(jié)合后活化Rho，通過孫。激酶(ROCK)使得孫oA水平上調(diào)，導(dǎo)致生長錐胞體的回縮，同時Rac、Cdc42水降低使生長錐上絲足(lamellipodia)和偽足(filopedia)的收回。孫oA主要通過

大鼠大腦皮層細(xì)胞排列整齊，輪廓正常，核居中，核仁清楚。神經(jīng)元無水腫，無膠質(zhì)細(xì)胞浸潤，脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞形態(tài)正常，連接緊密，無經(jīng)細(xì)胞缺失。正常對照組腦組織各部位的結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層次清楚、形態(tài)正常。見圖4一11。，一打。淤一擠一、圖4對照組6h(HE染色 x100)圖5對照組6h(HE染色X400)
【參考文獻(xiàn)】

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3 張濤,袁文,劉百峰,曹莉,肖林,陳公星;siRNA干擾大鼠神經(jīng)元Nogo受體mRNA表達(dá)的時程研究[J];中國脊柱脊髓雜志;2005年10期

本文編號：2871409