目的 神經(jīng)管畸形(Neural tube defects, NTDs)是一種最常見的嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)先天性畸形,世界平均發(fā)病率為1‰,我國發(fā)病率約為1.29‰。因此,對(duì)NTDs的發(fā)病機(jī)制的深入研究對(duì)于其積極預(yù)防起著十分必要的作用。近年來,人們已經(jīng)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上對(duì)NTDs的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行了廣泛的研究,目前較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為,NTDs的發(fā)生大多是內(nèi)在因素(遺傳因素)和環(huán)境因素(致畸因素)共同作用的結(jié)果。但是,引起NTDs的確切原因尚不清楚,病理改變復(fù)雜,而且沒有良好的預(yù)防和治療措施。因此,研究這些畸形的胚胎發(fā)生機(jī)制,可以為畸形的預(yù)防和早期治療提供必要的前期基礎(chǔ),對(duì)減少出生缺陷、提高人口素質(zhì)具有極其重要的意義。細(xì)胞凋亡在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育以及形成過程中是一個(gè)普遍存在的生理現(xiàn)象,細(xì)胞間的調(diào)控系統(tǒng)以及神經(jīng)細(xì)胞分泌的神經(jīng)營養(yǎng)因子等多種機(jī)制阻止細(xì)胞發(fā)生過度凋亡。這些機(jī)制的任一環(huán)節(jié)缺陷或受損都會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生過度凋亡,進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)管畸形的發(fā)生。 因此,本研究將采用TUNEL凋亡染色的方法,研究神經(jīng)管畸形在不同胚胎發(fā)育階段的凋亡變化規(guī)律,探討神經(jīng)管畸形的發(fā)生機(jī)制。 方法 1.建立NTDs大鼠胚胎模型 1.1將孕10d大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和NTDs組,采用維甲酸(150mg/Kg體重)灌胃法制作NTDs動(dòng)物模型,對(duì)照組給予相同劑量橄欖油。 1.2孕11d、12d、13d剖腹取出胚胎。 2. NTDs胎鼠與對(duì)照組胎鼠神經(jīng)管凋亡情況差異分析 2.1將兩組胎鼠分別做石蠟切片。 2.2用TUNEL試劑盒做石蠟切片染色,染色后兩組切片對(duì)比分析。 結(jié)果 1.成功制作了神經(jīng)管畸形大鼠胚胎模型。 2.維甲酸組胎鼠和對(duì)照組胎鼠神經(jīng)管細(xì)胞凋亡情況差異分析結(jié)果：正常對(duì)照組E13天出現(xiàn)凋亡高峰,神經(jīng)管畸形組在E11天即出現(xiàn)凋亡高峰,以后逐漸降低,E11天凋亡細(xì)胞陽性率明顯高于對(duì)照組,出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 維甲酸可成功制作神經(jīng)管畸形的動(dòng)物模型,胚胎11天神經(jīng)管上皮細(xì)胞過度凋亡是導(dǎo)致神經(jīng)管畸形的重要原因。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R748
【部分圖文】：

結(jié)果形模型胎鼠制作結(jié)果d、12d、13d剖檢共獲取胎鼠12只，維甲酸致畸組存活胎鼠6只(表1)。胎數(shù)配比明細(xì)lld(只)12d(只)一3d(只)、12、13天剖宮取出胎鼠，并于Nikon2000體式顯微4)

并用TUNEL試劑盒染色(圖5、6、7)，初步證實(shí):維甲酸致畸組各時(shí)期大鼠胚胎骸尾部神經(jīng)管的神經(jīng)上皮細(xì)胞凋亡明顯多于對(duì)照組。圖5，大鼠胚胎Ell，右側(cè)為神經(jīng)管背側(cè)局部放大圖。A為正常對(duì)照組，可見神經(jīng)管神經(jīng)上皮凋亡細(xì)胞(棕色，如箭頭所示)分布較分散，數(shù)量不多，大多集中于背側(cè)神經(jīng)管處;B為RA致畸組，可見神經(jīng)管部位出現(xiàn)較多凋亡細(xì)胞，分布較均勻。二者比較:兩圖中神經(jīng)管均未呈開放狀態(tài)

大鼠胚胎E12，右側(cè)為神經(jīng)管背側(cè)局部放大圖。A為正常對(duì)照組，可見神經(jīng)管閉合完好，且整體神經(jīng)管部位出現(xiàn)凋亡細(xì)胞(棕色，如箭頭所示)，分布均勻;B為RA致畸組，可見神經(jīng)管背側(cè)出現(xiàn)裂開，且整體神經(jīng)管出現(xiàn)較多凋亡細(xì)胞，分布較均勻。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2852038