背景特發(fā)性腎病綜合征(idiopathic nephrotic syndrome,INS)是兒童時(shí)期最常見的腎小球疾病之一,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚,研究認(rèn)為與T細(xì)胞的功能紊亂有關(guān)。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)是治療兒童INS的首選藥物,大部分患兒對(duì)糖皮質(zhì)激素敏感,但仍有20%的患兒對(duì)激素抵抗,最終發(fā)展為終末期腎病。因此,探討糖皮質(zhì)激素的耐藥機(jī)制一直是研究的熱門課題。近年來,有研究表明,轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的表達(dá)升高可能與激素抵抗的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。在GC治療INS以及激素抵抗過程中,T細(xì)胞的基因表達(dá)會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化。前期研究表明GC治療后INS患兒外周血T細(xì)胞c-Jun、c-Fos表達(dá)明顯升高。因此,本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)INS患兒T細(xì)胞,依次加入不同濃度的氫化潑尼松,進(jìn)一步驗(yàn)證GC對(duì)T細(xì)胞c-Jun、c-Fos表達(dá)的影響,探討其臨床意義,以尋找糖皮質(zhì)激素抵抗的分子機(jī)制。目的檢測(cè)不同濃度氫化潑尼松干預(yù)前后體外培養(yǎng)INS患兒外周血T細(xì)胞c-Jun、c-Fos表達(dá)的水平,探討激素對(duì)其表達(dá)影響及臨床意義。方法體外培養(yǎng)48名INS患兒外周血T細(xì)胞,將其分為對(duì)照組、低濃度組、高濃度組,分別加入不同濃度的氫化潑尼松,使氫化潑尼松濃度為10mM、20mM,對(duì)照組不加氫化潑尼松,收集體外培養(yǎng)的T細(xì)胞,用qPCR及western Blotting檢測(cè)不同濃度氫化潑尼松干預(yù)前、后T細(xì)胞c-Jun、c-Fos mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。結(jié)果qPCR和Western Blotting結(jié)果均表明,體外培養(yǎng)INS患兒T細(xì)胞c-Jun、c-Fos的表達(dá)水平為:高濃度組低濃度組對(duì)照組,高濃度組及低濃度組與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P0.05,**P0.01),且氫化潑尼松的濃度越高c-Jun、c-Fos的表達(dá)越高。結(jié)論氫化潑尼松可明顯提高體外培養(yǎng)INS患兒外周血T細(xì)胞c-Jun、c-Fos mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá),并且氫化潑尼松的濃度和c-Jun、c-Fos mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)呈劑量依賴性,提示糖皮質(zhì)激素在治療INS患兒的同時(shí),可使INS患兒T細(xì)胞c-Jun、c-Fos的表達(dá)升高,從而可能影響INS兒童對(duì)激素治療的敏感性。
【學(xué)位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R726.9
【部分圖文】：

c-Jun、c-Fos 表達(dá)越多（如表 1、圖 1）。 GC 干預(yù)下體外培養(yǎng) T 細(xì)胞 c-Jun、c-Fos mRNA 表達(dá)變c-Jun/β-actin c-Fos/β-acti1.58×10-6±0.126×10-6394×10-6±41mM） 4.76×10-6±0.315×10-6* 891×10-6±81mM） 11.7×10-6±0.103×10-6** 2370×10-6±2較 P＜0.05；**與對(duì)照組比較 P＜0.01。

同濃度 GC 干預(yù)前、后體外培養(yǎng) INS 患兒 T 細(xì)胞 c-Jun、c-Fos 的表達(dá)變化培養(yǎng) T 細(xì)胞中 Western Blotting 檢測(cè) c-Jun、c-Fos 表達(dá)為：高濃度組＞低照組，高濃度組及低濃度組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P＜00.01），且 GC 的濃度越高，c-Jun、c-Fos 表達(dá)越多（如表 2、圖 2）。表 2 不同濃度 GC 干預(yù)下體外培養(yǎng) T 細(xì)胞 c-Jun、c-Fos 蛋白表達(dá)變化 (X±S)組別 c-Jun/GAPDH c-Fos/GAPDH對(duì)照組 67±5 214±33低濃度組（10mM） 395±26* 437±29*高濃度組（20mM） 1253±61** 958±57**注:*對(duì)照組比較 P＜0.05；**與對(duì)照組比較 P＜0.01。c-FosGC（mM）0 10 20BJun（mM）0 10 20
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1 史瓏;糖皮質(zhì)激素對(duì)體外培養(yǎng)特發(fā)性腎病綜合征患兒T細(xì)胞c-Jun、c-Fos表達(dá)的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2019年

2 王向華;糖皮質(zhì)激素對(duì)特發(fā)性腎病綜合征患兒T細(xì)胞c-Jun、c-Fos表達(dá)的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2019年

本文編號(hào)：2851996