目的:評價異丙酚在肝缺血再灌注(HIR)誘導(dǎo)的海馬損傷的作用以及線粒體自噬在該過程該過程中所起的作用。方法:清潔級的健康的雄雌不分的C57/BL小鼠40只,周齡2周,體重6~8g,隨機(jī)數(shù)表法分為4組(n=10):假手術(shù)組(S組)、肝缺血/再灌注組(IR組)、異丙酚組(P組),和異丙酚+自噬抑制劑(3-甲基腺嘌呤,3-MA)組(3-MA組)。采用夾閉肝左葉、中葉脈管(門脈、動脈與膽道)的共干的方法制備70%肝缺再灌注損傷模型。S組僅開腹、游離第一肝門以及1小時后關(guān)腹等操作,無血管夾閉,IR組按上述方法制備70%肝缺再灌注損傷模型,P組于造模前30 min腹腔注射異丙酚30 mg/kg;3-MA組造模前1h時腹腔注射3-MA5 mg/kg,30 min后腹腔注射異丙酚50μg/kg,S、和IR組在開腹前30min腹腔內(nèi)注射等量乳化劑。各組小鼠于再灌注后6h通過眼球取血后處死小鼠,取海馬組織。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測定腦損傷標(biāo)志物:神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和酸性結(jié)合蛋白(S100β)。取海馬組織,制備10%組織勻漿,采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量,采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫組化的方法檢測各小組海馬組織的小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況。通過TUNEL法評估海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況,計算細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)。采用透射電子顯微鏡(TEM)觀察各組小鼠海馬組織線粒體自噬和線粒體的超微結(jié)構(gòu)。使用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)分析評估LC3II/I,BNIP3L/NIX和p62的表達(dá)。結(jié)果:與S組相比,IR組,P組,3-MA組腦損傷標(biāo)志物NSE和S-100β水平均升高,海馬組織中MDA含量上升,SOD活性下降,小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平增高,AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴隨p62蛋白含量的下降(P0.05)。與IR組相比,P組腦損傷標(biāo)志物NSE和S-100β水平明顯下降,海馬組織中MDA含量下降,SOD活性上升,小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平和AI下降,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量進(jìn)一步提高,伴隨p62蛋白含量的進(jìn)一步下降,3-MA組腦損傷標(biāo)志物NSE和S-100β水平進(jìn)一步升高,海馬組織中MDA含量上升,SOD活性下降,小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平和AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴隨p62蛋白含量的下降(P0.05)。TEM觀察,S組海馬組織線粒體結(jié)構(gòu)完整,線粒體自噬較少。與S組相比,IR組,P組,3-MA組線粒體數(shù)量均有所下降,且線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂,線粒體腫脹增加,自噬小體增多,與IR組相比,P組線粒體數(shù)量增多,線粒體結(jié)構(gòu)較完整,線粒體自噬小體數(shù)量增多,3-MA組的線粒體數(shù)量下降明顯,且線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂,線粒體腫脹進(jìn)一步增加,自噬小體減少。結(jié)論:1.異丙酚可減輕幼鼠肝缺血再灌注后海馬組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。2.異丙酚減輕幼鼠肝缺血再灌注后海馬損傷的機(jī)制與激活線粒體自噬相關(guān)。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R726.9
【部分圖文】：

具有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 腦損傷標(biāo)志物 NSE 和 S100β與 S 組相比，IR 組，P 組，3-MA 組血清中腦損傷標(biāo)志物 NSE 和 S100β均有所增加（P<0.05），與 IR 組相比，P 組的血清中腦損傷標(biāo)志物 NSE 和 S100β下降（P<0.05），3-MA 組腦損傷標(biāo)志物 NSE 和 S100β水平上升。見表 1 和圖 1 。表 1 血清 NSE、S100β濃度的比較（n=10， x ± s）組別 NSE（ng/mL） S100β（mg/mL）S 組 9.74±0.72 1.34±0.06IR 組 31.33±2.34a2.06±0.13aP 組 20 .09±1.26ab1.73±0.08ab3-MA 26.52±2.73ab2.23±0.22ab與 S 組比較 ，aP<0.05；與 IR 組比較，bP<0.05。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文與 S 組比較，IR 組，P 組，3-MA 組的 MDA 含量顯著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）；與 IR 組比較，P 組的 MDA 含量顯著降低，SOD 活性升高，3-MA組的 MDA 含量顯著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）。見表 2 和圖 2。表 2 海馬組織 MDA 含量及 SOD 活性的比較（n=5， ±s）組 別 MDA(mmol/mg) SOD(U/mg)S 組 58.99±5.04 230.1±18.03IR 組 130.90±8.92a177.4±6.68aP 組 89.26±3.64ab202.8±9.72ab3-MA 組 164.4±12.59ab167.8±6.25ab與 S 組比較 ，aP<0.05；與 IR 組比較，bP<0.05。

圖 3：海馬組織小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況（×200）2.4 海馬神經(jīng)元凋亡TUNEL 檢測海馬神經(jīng)元凋亡，凋亡細(xì)胞核顯示為紅色熒光，細(xì)胞核顯示為DAPI 藍(lán)色熒光染色。結(jié)果表明，與 S 組相比，IR 組，P 組，3-MA 組的細(xì)胞凋亡的程度明顯加重，各組海馬組織，每個切片各取 5 個高倍視野下算出的細(xì)胞凋亡指數(shù)均有所增加（P<0.05）；與 IR 組相比，P 組的細(xì)胞凋亡情況明顯，細(xì)胞凋亡指數(shù)下降，3-MA 組的細(xì)胞凋亡則反而加重，細(xì)胞凋亡指數(shù)上升（P<0.05）。見圖 4、圖 5
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本文編號：2837959