目的:通過(guò)分析SP-C基因exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ結(jié)構(gòu),篩查SP-C基因突變類(lèi)型,計(jì)算突變的基因型頻率和基因頻率,評(píng)估突變與NRDS發(fā)病及其嚴(yán)重性的關(guān)系,最終探明SP-C基因突變是否為漢族NRDS的發(fā)病因素,為國(guó)內(nèi)臨床診治該病拓寬視野。方法:選取2013年01月至2014年12月在北京軍區(qū)總醫(yī)院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房住院治療、并確診為NRDS的90例漢族患兒作為NRDS組,又根據(jù)胎齡分為3個(gè)亞組:極早產(chǎn)組(胎齡32周)、早產(chǎn)組(32周≤胎齡37周)、足月組(胎齡≥37周),每組30例。采用觀察表收集臨床資料,主要包括性別、胎齡、出生體重、分娩方式、窒息、胎膜早破、胎盤(pán)異常、孕母情況、血常規(guī)、血?dú)夥治�、血培養(yǎng)、痰培養(yǎng)、胸片分度、機(jī)械通氣、肺表面活性物質(zhì)使用、預(yù)后等指標(biāo)。另選取90例其它漢族患兒作為對(duì)照組,對(duì)照組的患兒可患有壞死性小腸結(jié)腸炎、先天性腸道閉鎖等腹部先天性疾病,對(duì)照組患兒以胎齡、性別、出生體重等方面與NRDS組相匹配。所有研究對(duì)象在臨床確診或住院后抽取抗凝全血樣本。采用DNA抽提試劑盒提取基因組DNA,通過(guò)PCR分別對(duì)SP-C基因的exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ進(jìn)行擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序,用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算基因頻率,運(yùn)用Hardy-Weinberg平衡法則進(jìn)行遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)。采用2x檢驗(yàn)比較組間基因型、基因頻率及差異的顯著性,并分析不同基因型以及等位基因頻率與所研究的NRDS發(fā)病及嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果:(1)SP-C基因exonⅡ存在c.115GT和c.139GC兩種雜合錯(cuò)義突變,均引起sp-c蛋白序列改變,僅在nrds組發(fā)現(xiàn);sp-c基因exonⅢ存在c.228gc雜合同義突變,并未引起氨基酸的改變,在nrds組和對(duì)照組發(fā)現(xiàn)。以上3種基因突變迄今尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外報(bào)道;在exonⅠ未發(fā)現(xiàn)任何基因突變。(2)nrds組在sp-c基因exonⅡ存在c.115gt雜合錯(cuò)義突變,此突變存在gg(野生型)、g/t(突變型)2種基因型。突變(g/t)基因型頻率為0.078,突變(t)等位基因頻率為0.039。nrds組g/t基因型頻率(0.078)高于對(duì)照組(0)(2x=7.283,p0.05),nrds組t等位基因頻率(0.039)高于對(duì)照組(0)(2x=7.139,p0.05)。nrds組90例研究對(duì)象中,55例患兒胸片示nrdsiii-iv級(jí)改變,g/t基因型頻率(1.000)高于gg基因型頻率(0.578)(2x=4.830,p0.05),t等位基因頻率(1.000)高于g等位基因頻率(0.595)(2x=4.635,p0.05)。7例患兒死亡,g/t基因型頻率(0.571)高于gg基因型頻率(0.036)(2x=25.788,p0.01),t等位基因頻率(0.571)高于g等位基因頻率(0.058)(2x=24.744,p0.01)。(3)nrds組在sp-c基因exonⅡ存在c.139gc雜合錯(cuò)義突變,此突變存在gg(野生型)、g/c(突變型)2種基因型。突變(g/c)基因型頻率為0.067,突變(c)等位基因頻率為0.033。nrds組g/c基因型頻率(0.067)高于對(duì)照組(0)(2x=6.207,p0.05),nrds組t等位基因頻率(0.033)均高于對(duì)照組(0)(2x=6.102,p0.05)。nrds組90例研究對(duì)象中,64例剖宮產(chǎn)中,g/c基因型頻率(0.167)低于gg基因型頻率(0.750)(2x=9.276,p0.01),c等位基因頻率(0.167)低于g等位基因頻率(0.730)(2x=8.956,p0.01)。55例患兒需要3-4劑肺表面活性物質(zhì)治療,g/c基因型頻率(0.167)低于gg基因型頻率(0.643)(2x=5.343,p0.05),c等位基因頻率(0.167)低于g等位基因頻率(0.626)(2x=5.159,p0.05)。(4)nrds組和對(duì)照組在sp-c基因exonⅢc.228gc雜合同義突變,此突變存在gg(野生型)、g/c(突變型)2種基因型。nrds組突變(g/c)基因型頻率為0.089,突變(c)等位基因頻率為0.044。nrds組g/c基因型頻率(0.089)高于對(duì)照組(0.011)(2x=5.731,p0.05),nrds組c等位基因頻率(0.044)高于對(duì)照組(0.006)(2x=5.584,p0.05)。該位點(diǎn)突變與所研究的臨床指標(biāo)無(wú)關(guān)聯(lián)性(p0.05)。結(jié)論:(1)本研究在中國(guó)漢族人群SP-C基因的exonⅡ、Ⅲ發(fā)現(xiàn)了c.115GT、c.139GC、c.228GC這3個(gè)前人未發(fā)現(xiàn)的基因突變。(2)SP-C基因c.115GT基因突變與所研究的NRDS發(fā)病和嚴(yán)重性相關(guān)聯(lián),且增加了該病死亡風(fēng)險(xiǎn)。(3)SP-C基因c.139GC基因突變與所研究的NRDS發(fā)病相關(guān)聯(lián),但沒(méi)有增加該病的嚴(yán)重程度及死亡風(fēng)險(xiǎn)。(4)SP-C基因c.228GC基因突變與所研究的NRDS發(fā)病相關(guān)聯(lián),但與所研究的NRDS的臨床嚴(yán)重程度無(wú)明顯相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：R722.1
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1. 材料
        1.1 選擇研究對(duì)象
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2. 方法
        2.1 臨床資料
        2.2 血樣本采集
        2.3 DNA抽提和PCR擴(kuò)增
        2.4 基因測(cè)序
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1. 臨床資料
    2. DNA抽提及SP-C基因3個(gè)外顯子擴(kuò)增
    3. SP-C基因exon Ⅰ基因突變篩查
    4. SP-C基因exon Ⅱ基因突變篩查
    5. SP-C基因exon Ⅲ基因突變篩查
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
縮略詞表
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝

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本文編號(hào)：2835335