目的:①通過對喘息性支氣管炎和兒童哮喘的β_2-腎上腺素能受體(β_2-AR)基因核苷酸第46、79位點(diǎn)突變導(dǎo)致第16、27位氨基酸多態(tài)性頻率的分析,及對各位點(diǎn)突變基因型的血漿總IgE和嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)的特點(diǎn)分析,從分子水平探討兩病的相關(guān)性,為哮喘的早期診斷提供分子生物學(xué)依據(jù)。②尋找喘息性支氣管炎患兒日后繼發(fā)兒童哮喘的高危因素,為嬰幼兒哮喘的早期干預(yù)提供依據(jù)。 方法:研究對象均來源于我院兒科住院及門診就診的患兒,哮喘組:2006年10月至2007年9月之間,217例哮喘患兒均為急性發(fā)作期,其中男性135例,女性82例,年齡最大17歲,最小1.1歲,平均5.5歲,其中有嬰幼兒哮喘35人。喘支組:共119例,均為2006年10月至2007年2月之間就診,其中男78人,女41人;年齡最大2.9歲,最小0.3歲,平均1.8歲。對照組為本院兒保門診健康兒童,50例,其中男32例,女18例,年齡最小2歲,最大13歲,平均4.9歲。所有研究對象均為重慶藉,漢族兒童。收集各組患兒及健康兒詳細(xì)的回顧性問卷調(diào)查,問卷涉及既往反復(fù)喘息的病史及就診情況、個人過敏史(濕疹、過敏性鼻炎、食物藥物過敏等)、家族史(父母哮喘及過敏史、二級親屬哮喘及過敏史等)及母乳喂養(yǎng)情況。采用PCR-限制性核酸內(nèi)切酶分析法檢測β_2-AR 16、27位點(diǎn)基因多態(tài)性,比較三組研究對象β_2-AR 16、27位的基因型頻率及等位基因頻率;用ELISA法檢測血漿總IgE,對三組的血漿總IgE均值進(jìn)行比較分析,對每組中各基因型的血漿總IgE均值的差異進(jìn)行比較;外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)采用伊紅染色法,由本院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室計(jì)數(shù)。對喘息性支氣管炎患兒追蹤隨訪12個月,根據(jù)隨訪結(jié)果,分析影響喘支日后繼發(fā)哮喘的危險因素。 結(jié)果:①兒童哮喘組β_2-AR第16位點(diǎn)基因型頻率:Arg/Arg0.37,Arg/Gly0.51,Gly/Gly0.12,與健康人群對照組比較差異無顯著性(P0.05);Gly等位基因頻率為0.37,與健康人群對照組比較,差異無顯著性(P0.05);喘息性支氣管炎組β_2-AR第16位點(diǎn)基因型頻率:Arg/Arg0.35,Arg/Gly0.48,Gly/Gly0.17,與健康對照組比較差異無顯著性(P0.05),與哮喘組比較差異也無顯著性;Gly等位基因頻率為0.41,與對照組及哮喘組比較均無顯著性差異(P0.05)。哮喘組第27位點(diǎn)基因頻率:Gln/Gln0.25,Gln/Glu0.55,Glu/Glu0.20,Glu/Glu基因型頻率明顯低于對照組(P0.05);Glu等位基因頻率為0.48,明顯低于對照組(P0.05);喘支組27位點(diǎn)基因頻率:Gln/Gln0.24,Gln/Glu0.50,Glu/Glu0.26,與對照組無顯著差異,與哮喘組也無顯著性差異(P0.05);喘支組Glu等位基因頻率為0.51,與對照組及哮喘比較均無顯著性差異(P0.05); ②哮喘組血漿總IgE和外周血EOS計(jì)數(shù)均高于喘支組和正常對照組(P0.05),喘支組的總IgE和外周血EOS計(jì)數(shù)都明顯高于對照組(P0.05); ③β_2-AR基因16位點(diǎn)各基因型間的血漿總IgE水平差異無顯著性(P0.05);哮喘和喘支組27位點(diǎn)中Gln/Gln基因型的總IgE水平都明顯高于Gln/Glu及Glu/Glu基因型(P0.05),Gln/Glu和Glu/Glu基因型之間的IgE水平無顯著差異(P0.05)。 ④對119例喘息性支氣管炎追蹤隨訪12個月,成功隨訪的有108例,其中有66例(61.11%)有明確喘息又發(fā)作兩次以上,可診斷為兒童哮喘,為哮喘組;有42例(38.89%)喘支的患兒這12個月未再有喘息發(fā)作,仍診斷為喘息性支氣管炎,為未再發(fā)作組。對7種危險因素進(jìn)行分析,單因素分析:個人濕疹史、個人過敏史、母親過敏史、父親過敏史、母乳不足4個月與喘支發(fā)展為嬰幼兒哮喘有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic分析示:個人濕疹史(OR=2.820,95%CI:1.107～7.184, P0.05)、個人過敏史(OR=2.756,95%CI:1.097～6.925,P0.05)、母親過敏史(OR=2.860,95%CI:1.070～7.642, P0.05)、母乳不足4個月(OR=2.901,95%CI:1.176～7.155, P0.05)是喘支發(fā)展為嬰幼兒哮喘的危險因素。哮喘患兒的血漿總IgE和外周血EOS計(jì)數(shù)均明顯高于未再發(fā)作喘息患兒(P0.05)。 結(jié)論:①β_2-AR基因第16位點(diǎn)基因多態(tài)性與兒童哮喘和喘息性支氣管炎的發(fā)病無關(guān)聯(lián);在β_2-AR基因27位點(diǎn)與喘息性支氣管炎與支氣管哮喘有相關(guān)性,尤其是具有Gln/Gln基因型和Gln等位基因的喘支與哮喘的關(guān)系更為密切;②血漿總IgE水平和外周血EOS計(jì)數(shù)升高不僅是哮喘免疫病理變化指標(biāo),也是喘支患兒的特征,喘息性支氣管炎具有和哮喘相似的病理過程;③喘支與哮喘一樣,27位點(diǎn)Gln/Gln基因型的血漿總IgE值都明顯高于其它基因型,故對于具有27位點(diǎn)的Gln/Gln基因型且血漿總IgE增高的喘支與哮喘的關(guān)系更為密切。④喘息性支氣管炎日后繼發(fā)為嬰幼兒哮喘的危險因素是患兒濕疹史和過敏史、母親過敏史、母乳喂養(yǎng)不足4個月,患兒性別、父親過敏史和二級親屬過敏史不是兒童哮喘的危險因素,因此嬰幼兒哮喘為多種因素相互作用的復(fù)雜結(jié)果,且具有上述危險因素及血漿總IgE和外周血EOS計(jì)數(shù)增高的喘息性支氣管炎發(fā)展為兒童哮喘的危險性較大,應(yīng)高度警惕,盡早給與干預(yù),以降低兒童哮喘的發(fā)生率。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R725.6
【部分圖文】：

人細(xì)胞基因組DNA電泳分析圖

人細(xì)胞基因組DNA電泳分析圖

37M：標(biāo)記物；1、2、3、4：不同標(biāo)本的擴(kuò)增帶圖3 β2-AR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析圖M：標(biāo)記物；1、2、3、4、5、6、7、8：不同標(biāo)本的擴(kuò)增帶圖4 β2-AR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析圖

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本文編號：2835022