目的：通過腰大肌壓迫輸尿管法,建立生后48小時內(nèi)的新生Wistar鼠腎積水動物模型,檢測輸尿管梗阻期間及梗阻解除后病腎組織和腎盂尿中一系列細(xì)胞因子：如轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)、胰島素樣生長因子-1 (IGF-1)、內(nèi)皮素-1(ET-1)轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平表達(dá)的改變,以及尿中含量的變化,擬從分子水平探尋評定先天性腎積水術(shù)前病腎損害程度以及術(shù)后病腎恢復(fù)的客觀、可靠指標(biāo),為臨床小兒腎積水治療方法的選擇及術(shù)后療效預(yù)測提供實驗依據(jù)。 方法： 1、動物模型制作：建立先天性腎積水的動物模型(即腰大肌壓迫輸尿管法制作部分輸尿管梗阻及梗阻解除的動物模型)。取生后48h內(nèi)的新生Wistar鼠72只,隨機分6組,每組12只；隨機選擇1組行假手術(shù),作為對照組,余5組用腰大肌壓迫法制作左側(cè)部分輸尿管梗阻模型,然后再隨機分為組2-組6。組1(對照組)：假手術(shù)組；組2：梗阻后3周處死；組3：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后2周處死；組4：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后6周處死；組5：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后8周處死；組6：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后12周處死。 2、實驗指標(biāo)的檢測：(1)、HE染色行病腎組織結(jié)構(gòu)改變的檢查,并做病理分級；(2)、檢測病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平在梗阻期間及梗阻解除后的改變；(3)、檢測病腎尿TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1在梗阻期間及梗阻解除后的變化。 結(jié)果： 1、新生鼠梗阻性腎積水動物模型成功建立,病腎組織經(jīng)HE染色后,參照Elder等的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分級,對照組12例全部為Ⅰ級,實驗組(死亡9例,存活51例)Ⅰ級7例,Ⅱ級13例,Ⅲ級20例,Ⅳ級11例,Ⅴ級0例；病腎組織結(jié)構(gòu)改變隨梗阻解除時間延長而逐漸恢復(fù)。 2、病腎組織內(nèi)TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)變化： (1)、TGF-β1、MCP-1、ET-1 mRNA的表達(dá)在梗阻后隨病理分級的增加而遞增,其中TGF-β1在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05), MCP-1、ET-1在不同病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學(xué)意義；IGF-1雖隨病理分級的增加而遞減,但在各病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學(xué)意義。TGF-β1、MCP-1、ET-1蛋白水平的表達(dá)也隨病理分級的增加而遞增,而IGF-1則隨病理分級的增加而遞減。 (2)、梗阻解除后,隨梗阻解除時間的延長TGF-β1、MCP-1、ET-1轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)逐漸下降,其中梗阻解除后12周TGF-β1水平已降至正常,而IGF-1轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)則逐漸升高。 3、病腎腎盂尿內(nèi)TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1水平的改變： (1)、病腎尿TGF-β1、MCP-1、ET-1在梗阻后隨病理分級的增加而遞增,其中TGF-β1在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05), MCP-1、ET-1在不同病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學(xué)意義；IGF-1雖隨病理分級的增加而遞減,但在各病理分級組間比較,不全有統(tǒng)計學(xué)意義。 (2)、梗阻解除后,隨梗阻解除時間的延長病腎尿TGF-β、MCP-1、ET-1的含量逐漸升高,其中梗阻解除后12周尿TGF-β1水平已降至正常,而尿IGF-1的含量則隨梗阻解除時間的延長逐漸下降。 結(jié)論： 1、本研究通過腰大肌壓迫輸尿管法成功地制作了新生鼠腎積水的動物模型(新生鼠部分輸尿管梗阻建立及梗阻解除的動物模型),可作為臨床研究小兒腎積水的理想動物模型。 2、新生鼠腎積水病腎組織TGF-β1轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且在梗阻解除術(shù)后12周已降至正常,可用于判定病腎的損害程度以及恢復(fù)情況。 3、新生鼠腎積水病腎尿TGF-β1在梗阻后各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且在梗阻解除術(shù)后12周已恢復(fù)至正常,是評定腎積水動物摸型病腎損害及恢復(fù)的理想指標(biāo)。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R726.9
【部分圖文】：

Reai一timePCR反應(yīng)原理

(l)取透明膠帶將洗凈、晾干的制膠板的兩(2)在固定位置放好梳子;(3)稱取0.39瓊脂糖于 30nil0.5又TBE中，卻至60℃左右時倒入制膠板中:(4)待凝膠凝固后，垂直拔去梳子，取下膠(5)將DNA樣品與澳酚藍(lán)混合后用10林l微ddHZo3林l+嗅酚藍(lán)2林l共10林l于o.SInlEp管(6)將制膠板放入電泳槽中，加入電泳液，向正極泳動;(7)電泳完成后，取出凝膠，放入0.5林g/m 清水漂洗后置于紫外透射儀上觀察電泳結(jié)果，相記錄(見圖2)。

染色并參照Elder等[’4]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病W級11例，V級0例。在不同病理分級組中，TGF一pl、McP一1、ET-1及IGF一lmRNA表達(dá)水平見表4及圖3一6。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示:MCP一1、TGF一pl、 ET-1mRNA的表達(dá)在梗阻后隨病理分級的增加而遞增，其中TGF一plmRNA在各病理分級組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，MCP一1、 ET-1mRNA在不同病理分級組間比較，差異不全有統(tǒng)計學(xué)意義(MCP一 1mRNA的表達(dá)在l、11級間無統(tǒng)計學(xué)意義， ET-1mRNA在11、111級間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義);23

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 馬洪;方勇;田文超;劉斌;楊俊杰;李靜;張偉同;周永正;;腎積水患兒病腎腎組織胰島素樣生長因子、內(nèi)皮素、轉(zhuǎn)化生長因子及單核細(xì)胞趨化蛋白表達(dá)變化的意義[J];實用兒科臨床雜志;2009年23期

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本文編號：2829803