目的：初步探討新生豚鼠經(jīng)小腦延髓池注射膽紅素溶液制作膽紅素腦病動(dòng)物模型方法的可行性，研究膽紅素腦病模型豚鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及壞死現(xiàn)象、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，分析神經(jīng)細(xì)胞TUNEL陽(yáng)性率與Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)陽(yáng)性率及Bcl-2／Bax比值的相關(guān)性，以進(jìn)一步闡明膽紅素腦病的神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)制。 材料與方法：出生5天內(nèi)的新生豚鼠42只，隨機(jī)分成7組，每組6只，其中1組為對(duì)照組，其余6組為模型組。向模型組豚鼠小腦延髓池內(nèi)注射膽紅素溶液(注射劑量為10μg膽紅素／g體重)，以建立膽紅素腦病動(dòng)物模型，各組分別于給藥后2、6、12、24、48、72小時(shí)斷頭取腦；對(duì)照組經(jīng)小腦延髓池注射生理鹽水0.1ml，于注射后24小時(shí)斷頭取腦。應(yīng)用Annexin V-FITC／PI雙標(biāo)記法、HE染色法、TUNEL法及免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)膽紅素腦病模型豚鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的凋亡及壞死現(xiàn)象、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2與Bax蛋白的表達(dá)及兩者比值的動(dòng)態(tài)變化，分析神經(jīng)細(xì)胞TUNEL陽(yáng)性率與Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)陽(yáng)性率及Bcl-2／Bax比值的相關(guān)性。 結(jié)果：(1)對(duì)照組豚鼠于麻醉蘇醒后呼吸平穩(wěn)，無(wú)異常神經(jīng)行為活動(dòng)；模型組豚鼠皆出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)行為改變。(2)HE染色后光鏡觀察，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組豚鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常；模型組豚鼠腦組織膽紅素黃染，海馬神經(jīng)細(xì)胞體積變小，核染色質(zhì)濃縮、邊集、碎裂，基本符合細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；同時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞腫脹，胞漿空化和核溶解，有的細(xì)胞呈均勻一致的紅色，形成“紅色神經(jīng)元”即壞死神經(jīng)元。(3)應(yīng)用Annexin V-FITC／PI雙標(biāo)記法檢測(cè)膽紅素腦病模型豚鼠海 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及壞死率，發(fā)現(xiàn)模型組豚鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率于給 藥后6小時(shí)明顯升高，24小時(shí)左右達(dá)到高峰，以后逐漸降低;模型組豚鼠 海馬神經(jīng)細(xì)胞壞死率于給藥后6小時(shí)明顯升高，12一24小時(shí)達(dá)到高峰，以 后較快降低。應(yīng)用TUNEL法所檢測(cè)凋亡率的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)與AnnexinV- FITC/PI雙標(biāo)記法基本一致。(4)運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)膽紅素 腦病模型豚鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞Bd一2與Bax蛋白表達(dá)陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞 TUNEL陽(yáng)性率與Bcl一2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，與Bax蛋白表 達(dá)陽(yáng)性率呈顯著正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論:新生豚鼠經(jīng)小腦延髓池注射膽紅素溶液制作膽紅素腦病動(dòng)物 模型的方法具有可行性。膽紅素腦病模型豚鼠海馬區(qū)存在神經(jīng)細(xì)胞壞死 和凋亡現(xiàn)象;膽紅素通過(guò)凋亡相關(guān)蛋白Bd一2和Bax蛋白的參與而導(dǎo)致神 經(jīng)細(xì)胞凋亡，從而介導(dǎo)膽紅素神經(jīng)毒性的發(fā)生。預(yù)防膽紅素腦病的發(fā)生 是至關(guān)重要的。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類(lèi)】：R722.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李雪琴;新生豚鼠膽紅素腦病時(shí)皮層及海馬BDNF及其mRNA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

本文編號(hào)：2815492