發(fā)布時(shí)間：2020-09-01 14:19

　　 目的探討GATA-6基因在內(nèi)源性一氧化碳(CO)抑制肺動脈平滑肌細(xì)胞(PVSMCs)增殖中的作用。 方法體外培養(yǎng)雄性SD大鼠的肺動脈平滑肌細(xì)胞(PVSMCs)，分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組：1組為正常對照組；2組為血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB 20ng/ml)誘導(dǎo)組；3組是血小板衍生生長因子-BB加低濃度氯血紅素(Hemin 10μmol/1)組；4組是血小板衍生生長因子-BB加中濃度氯血紅素(Hemin 20μmol/1)組：5組是血小板衍生生長因子BB加高濃度氯血紅素(Hemin 30μmol/1)組。在加不同條件后的8小時(shí)、16小時(shí)、24小時(shí)分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：1、四唑鹽(MTT)法測定PVSMCs增殖程度；2、氚摻入法測定PVSMCs DNA合成情況；3、測定培養(yǎng)上清液中碳氧血紅蛋白(HbCO)的相對含量；4、RT-PCR法測定GATA-6基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)果1)PDGF-BB能明顯刺激血管平滑肌細(xì)胞的增殖，在8小時(shí)、24小時(shí)其MTT值相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0．0278±0．0076 vs 0．0588±0．0054，p＜0．05)，在24小時(shí)PVSMCs的增殖最明顯。內(nèi)源性CO可抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的PVSMCs增殖，高濃度Hemin(30μmol/1)組在不同時(shí)間上的PVSMCs增殖有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0．0180±0．0015，0．0157±0．0055，0．0092±0．0047，p＜0．05)，24小時(shí)不同條件組別之間相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0．0350±0．0054，0．0588±0．0054，0．0252±0．0064，0．0173±0．0047，0．0092±0．0047，p＜0．05)，說明內(nèi)源性CO對PVSMCs增殖的抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴關(guān)系。2)PDGF-BB可增加PVSMCs的DNA合成，不同時(shí)間條件下其氚摻入比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(222．00±29．32vs 752．00±142．33 vs 1112．00±120．51，p＜0．05)，DNA的合成在24小時(shí)最明顯，而內(nèi)源性CO對PVSMCs DNA合成的抑制作用也呈劑量依賴關(guān)系，8小時(shí)不同組別的DNA合成情況有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(222．00±29．32，114．67±11．55，p＜0．05)，16小時(shí)不同組別的DNA合成情況有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(752．00±142．33，220．83±33．22，93．17±13．00，p＜0．05)，24小時(shí)不同組別的DNA合成情況有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(1112．00±120．51 vs 210．17±35．16，1112．00±120．51 vs 86．50±8．22，1112．00±120．51 vs 53．17±7．88，210．17±35．16 vs 53．17±7．88，p＜0．05)。3)氯血紅素能誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性一氧化碳，在相同濃度Hemin誘導(dǎo)下，不同時(shí)間培養(yǎng)上清液仲HbCO的相對含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，24小時(shí)HbCO的相對含量最高；在相同時(shí)間，不同濃度Hemin誘導(dǎo)的PVSMCs產(chǎn)生CO量相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，高濃度Hemin組培養(yǎng)上清液中HbCO的含量最高，說明Hemin通過時(shí)間和濃度依賴的方式誘導(dǎo)內(nèi)源性CO的產(chǎn)生。4)PDGF-BB在2小時(shí)誘導(dǎo)PVSMCs的GATA-6基因表達(dá)明顯下調(diào)，于6小時(shí)恢復(fù)以前的水平。這種下調(diào)可以被內(nèi)源性CO所抑制，其GATA-6基因表達(dá)情況也呈濃度依賴的方式，即高濃度Hemin(30μmol/1)組GATA-6基因表達(dá)下調(diào)的抑制作用最明顯，但是CO的這種抑制GATA-6基因表達(dá)下調(diào)的作用在6小時(shí)也恢復(fù)到以前的水平。 結(jié)論氯血紅素(Hemin)能以時(shí)間和濃度依賴的方式誘導(dǎo)PVSMCs產(chǎn)生內(nèi)源性一氧化碳。PDGF-BB以時(shí)間依賴的方式能刺激PVSMCs的增殖和DNA合成，同時(shí)抑制GATA-6基因的表達(dá)，內(nèi)源性CO能以劑量和時(shí)間依賴的方式抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的PVSMCs增殖和DNA合成，同時(shí)抑制PDGF-BB所致的GATA-6基因表達(dá)下調(diào)，此作用亦呈濃度依賴方式。本實(shí)驗(yàn)提示，內(nèi)源性CO能有效的阻止PDGF-BB誘導(dǎo)的PVSMCs的增殖和DNA合成，此抑制作用可能通過對GATA-6基因的調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)。
【學(xué)位單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

取總RNA的鑒定RNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，澳化乙錠顯條帶較清楚，無DNA污染條帶，表明提取的圖16)悶嘛一備圖16，不同條件下GATA一6RT-PCR電泳圖(圖

不同組別GArA一6/GAPDHPCR條帶象素比值比較1:對照組2:POGF誘導(dǎo)組3:POGF誘導(dǎo)加低濃度:PDGF誘導(dǎo)加中濃度Hemin組5:PDGF誘導(dǎo)加高濃度H圖可以看出，在正常靜止?fàn)顟B(tài)的平滑肌細(xì)胞中，GAI’A的表達(dá)，血小板衍生生長因子(PDGF)刺激后，其表達(dá)氯血紅素(Hemin)可以濃度依賴的方式阻止PDGF對調(diào)。后不同組別的GATA一6表達(dá)是PDGF誘導(dǎo)組還是加Hemin干預(yù)組，PVSMCs的表達(dá)均開始恢復(fù)至干預(yù)前的正常水平，不同組別之間沒

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本文編號：2809845