【摘要】： 目的圍產期窒息所致的新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathy,HIE)是嚴重威脅新生兒生命和健康的常見病之一,死亡率和致殘疾率高,關鍵原因在于中樞神經損傷后缺乏再生的能力,一般對癥治療不能有效改善其癥狀及預后。傳統(tǒng)的觀點認為中樞神經損傷后不能再生,而近年的研究發(fā)現(xiàn)阻止中樞神經損傷后再生的重要原因是中樞神經的內環(huán)境中存在抑制神經再生的因子,目前已確認的中樞神經髓鞘來源的抑制因子至少有以下三種:Nogo-A、髓磷脂相關糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)和少突膠質細胞-髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte-myelin glycoprotein,OMgp),其中Nogo-A是其中抑制作用最強的一種,其羧基端兩個跨膜區(qū)之間存在一個66個氨基酸的結構域(Nogo-66),這三種抑制因子通過相同的受體(Nogo receptor,NgR)發(fā)揮抑制神經再生的作用。NEP1-40是針對Nogo-66氨基序列設計的NgR競爭性拮抗劑,能阻斷中樞神經抑制因子與NgR的結合。神經節(jié)苷脂為近年常用于治療HIE的藥物,有維持細胞內外離子平衡、防止細胞內Ca~(2+)積聚及對抗興奮性氨基酸的神經毒性等作用。本研究通過制備新生大鼠HIBD標準模型,對HIBD后大鼠分別腹腔注射NEP1-40及單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉(GM-1),觀察各組大鼠腦重的增長、左右腦重差值、腦組織病理變化及Nogo-A mRNA的表達,探討Nogo-A在新生大鼠HIBD中的作用,并觀察NEP1-40與GM-1對大鼠Nogo-A表達的影響及對神經損傷后的保護作用,為進一步研究新生兒缺氧缺血性腦病有效治療方式提供動物實驗依據(jù)。 方法將100只7日齡新生大鼠隨機分為空白對照組、假手術組、缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型組、NEP1-40治療組及GM-1治療組,以上各組均在6h、24h兩時間點采集標本,每組10只。HIBD組及治療組參照Rice法制備標準HIBD模型,治療組于造模后即刻腹腔注射NEP1-4010mg/kg、GM-120mg/kg,空白對照組、假手術組與模型組腹腔注射生理鹽水0.25ml/kg。各組動物分別處理后于6h、24h兩時間點斷頸處死。將腦組織標本固定于30%蔗糖、4%多聚甲醛溶液中靜置72h,待下沉后進行冰凍切片,HE染色觀察各組大鼠腦組織病理變化,用原位雜交的方法觀察Nogo-A mRNA的表達,40倍鏡下計數(shù)大鼠腦組織Nogo-A mRNA陽性細胞數(shù)目。 結果①HIBD組兩時段,Nogo-mRNA表達均高于同時段空白組及假手術組:HE染色示腦組織神經元水腫、尼氏小體溶解壞死,腦實質內有散在的凝固性壞死,脈絡叢上皮局部缺失。②NEP1-40治療組能抑制HIBD后mRNA的表達,與同時段模型組對比有顯著統(tǒng)計學意義;神經元輕度水腫,未見溶解壞死的尼氏小體,脈絡叢上皮部分缺失,毛細血管基本正常。③神經節(jié)苷脂治療組mRNA的表達在6h時與HIBD組無明顯差異,在24h時較HIBD組低但高于空白組。24h神經元細胞水腫較模型組減輕,可見少量壞死尼氏小體,脈絡叢上皮連接基本正常。 結論Nogo-A mRNA在缺氧缺血性腦損傷后表達顯著增高,其編碼的Nogo-A可抑制中樞神經損傷后的再生,NEP1-40能拮抗這一作用,能減輕細胞水腫、改善局部血流供應,從而可能在促進缺氧缺血性腦損傷后神經再生中起到重要作用。神經節(jié)苷脂GM-1在缺氧缺血性腦損傷后也可部分抑制Nogo-A mRNA的表達,有穩(wěn)定細胞膜、減輕細胞水腫的作用。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R722.12
【圖文】：

對神經生長具有促進及抑制兩種截然相反的作用。隨著生長發(fā)育，MAG由促進神經生長轉變?yōu)橐种乒δ�，而且，新生神經在髓鞘上生長的能力與其在體內自發(fā)再生的能力相關，提示MAG可能在神經生長發(fā)育中的不同階段發(fā)揮調控作用。其神經生長抑制作用是通過與Nog。受體特異性結合誘導軸突生長錐潰變來實現(xiàn)的，但瞅G不會造成樹突生長錐潰變。4.2少突膠質細胞一髓磷脂糖蛋白(oligodendr。cyte一myelinglye。protein，omgP)也是一種具有誘導生長錐崩解和抑制神經生長的髓磷脂蛋白，是糖基磷脂酞肌醇(GPI)錨定蛋白〔3‘’。oMgP在少突膠質細胞和多種神經元中表達，同時在PNS中亦發(fā)現(xiàn)有表達。OMgP位于細胞表面和髓磷脂中，其在大鼠腦神經元中與Nog。受體特異性結合后對神經生長的抑制和誘導生長錐的潰變作用與Nogo一66的抑制作用極為相似。MAG及omgP的結構見附圖2。

附圖4.NgR與P75NTR受體復合物產生抑制信號的模式示意圖:NgR與p75NTR結后Rho及Gi蛋白被激活，繼而依次激活Rho激酶(R戊K)，輕鏈肌漿球蛋白激酶(ML和輕鏈肌漿球蛋白(MLC)，最終導致細胞骨架重構和軸突生長抑制;激活Gi蛋白不

【引證文獻】

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1 秦曉慶;NgR特異性小干擾RNA對新生大鼠HIBD神經再生功能的影響[D];廣州醫(yī)學院;2011年

本文編號：2803420