【摘要】： 目的圍產(chǎn)期窒息所致的新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathy,HIE)是嚴(yán)重威脅新生兒生命和健康的常見(jiàn)病之一,死亡率和致殘疾率高,關(guān)鍵原因在于中樞神經(jīng)損傷后缺乏再生的能力,一般對(duì)癥治療不能有效改善其癥狀及預(yù)后。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為中樞神經(jīng)損傷后不能再生,而近年的研究發(fā)現(xiàn)阻止中樞神經(jīng)損傷后再生的重要原因是中樞神經(jīng)的內(nèi)環(huán)境中存在抑制神經(jīng)再生的因子,目前已確認(rèn)的中樞神經(jīng)髓鞘來(lái)源的抑制因子至少有以下三種:Nogo-A、髓磷脂相關(guān)糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)和少突膠質(zhì)細(xì)胞-髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte-myelin glycoprotein,OMgp),其中Nogo-A是其中抑制作用最強(qiáng)的一種,其羧基端兩個(gè)跨膜區(qū)之間存在一個(gè)66個(gè)氨基酸的結(jié)構(gòu)域(Nogo-66),這三種抑制因子通過(guò)相同的受體(Nogo receptor,NgR)發(fā)揮抑制神經(jīng)再生的作用。NEP1-40是針對(duì)Nogo-66氨基序列設(shè)計(jì)的NgR競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑,能阻斷中樞神經(jīng)抑制因子與NgR的結(jié)合。神經(jīng)節(jié)苷脂為近年常用于治療HIE的藥物,有維持細(xì)胞內(nèi)外離子平衡、防止細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)積聚及對(duì)抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性等作用。本研究通過(guò)制備新生大鼠HIBD標(biāo)準(zhǔn)模型,對(duì)HIBD后大鼠分別腹腔注射N(xiāo)EP1-40及單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉(GM-1),觀察各組大鼠腦重的增長(zhǎng)、左右腦重差值、腦組織病理變化及Nogo-A mRNA的表達(dá),探討Nogo-A在新生大鼠HIBD中的作用,并觀察NEP1-40與GM-1對(duì)大鼠Nogo-A表達(dá)的影響及對(duì)神經(jīng)損傷后的保護(hù)作用,為進(jìn)一步研究新生兒缺氧缺血性腦病有效治療方式提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法將100只7日齡新生大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型組、NEP1-40治療組及GM-1治療組,以上各組均在6h、24h兩時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本,每組10只。HIBD組及治療組參照Rice法制備標(biāo)準(zhǔn)HIBD模型,治療組于造模后即刻腹腔注射N(xiāo)EP1-4010mg/kg、GM-120mg/kg,空白對(duì)照組、假手術(shù)組與模型組腹腔注射生理鹽水0.25ml/kg。各組動(dòng)物分別處理后于6h、24h兩時(shí)間點(diǎn)斷頸處死。將腦組織標(biāo)本固定于30%蔗糖、4%多聚甲醛溶液中靜置72h,待下沉后進(jìn)行冰凍切片,HE染色觀察各組大鼠腦組織病理變化,用原位雜交的方法觀察Nogo-A mRNA的表達(dá),40倍鏡下計(jì)數(shù)大鼠腦組織Nogo-A mRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目。 結(jié)果①HIBD組兩時(shí)段,Nogo-mRNA表達(dá)均高于同時(shí)段空白組及假手術(shù)組:HE染色示腦組織神經(jīng)元水腫、尼氏小體溶解壞死,腦實(shí)質(zhì)內(nèi)有散在的凝固性壞死,脈絡(luò)叢上皮局部缺失。②NEP1-40治療組能抑制HIBD后mRNA的表達(dá),與同時(shí)段模型組對(duì)比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;神經(jīng)元輕度水腫,未見(jiàn)溶解壞死的尼氏小體,脈絡(luò)叢上皮部分缺失,毛細(xì)血管基本正常。③神經(jīng)節(jié)苷脂治療組mRNA的表達(dá)在6h時(shí)與HIBD組無(wú)明顯差異,在24h時(shí)較HIBD組低但高于空白組。24h神經(jīng)元細(xì)胞水腫較模型組減輕,可見(jiàn)少量壞死尼氏小體,脈絡(luò)叢上皮連接基本正常。 結(jié)論Nogo-A mRNA在缺氧缺血性腦損傷后表達(dá)顯著增高,其編碼的Nogo-A可抑制中樞神經(jīng)損傷后的再生,NEP1-40能拮抗這一作用,能減輕細(xì)胞水腫、改善局部血流供應(yīng),從而可能在促進(jìn)缺氧缺血性腦損傷后神經(jīng)再生中起到重要作用。神經(jīng)節(jié)苷脂GM-1在缺氧缺血性腦損傷后也可部分抑制Nogo-A mRNA的表達(dá),有穩(wěn)定細(xì)胞膜、減輕細(xì)胞水腫的作用。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R722.12
【圖文】：

對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)具有促進(jìn)及抑制兩種截然相反的作用。隨著生長(zhǎng)發(fā)育，MAG由促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)橐种乒δ�，而且，新生神�?jīng)在髓鞘上生長(zhǎng)的能力與其在體內(nèi)自發(fā)再生的能力相關(guān)，提示MAG可能在神經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育中的不同階段發(fā)揮調(diào)控作用。其神經(jīng)生長(zhǎng)抑制作用是通過(guò)與Nog。受體特異性結(jié)合誘導(dǎo)軸突生長(zhǎng)錐潰變來(lái)實(shí)現(xiàn)的，但瞅G不會(huì)造成樹(shù)突生長(zhǎng)錐潰變。4.2少突膠質(zhì)細(xì)胞一髓磷脂糖蛋白(oligodendr。cyte一myelinglye。protein，omgP)也是一種具有誘導(dǎo)生長(zhǎng)錐崩解和抑制神經(jīng)生長(zhǎng)的髓磷脂蛋白，是糖基磷脂酞肌醇(GPI)錨定蛋白〔3‘’。oMgP在少突膠質(zhì)細(xì)胞和多種神經(jīng)元中表達(dá)，同時(shí)在PNS中亦發(fā)現(xiàn)有表達(dá)。OMgP位于細(xì)胞表面和髓磷脂中，其在大鼠腦神經(jīng)元中與Nog。受體特異性結(jié)合后對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)的抑制和誘導(dǎo)生長(zhǎng)錐的潰變作用與Nogo一66的抑制作用極為相似。MAG及omgP的結(jié)構(gòu)見(jiàn)附圖2。

附圖4.NgR與P75NTR受體復(fù)合物產(chǎn)生抑制信號(hào)的模式示意圖:NgR與p75NTR結(jié)后Rho及Gi蛋白被激活，繼而依次激活Rho激酶(R戊K)，輕鏈肌漿球蛋白激酶(ML和輕鏈肌漿球蛋白(MLC)，最終導(dǎo)致細(xì)胞骨架重構(gòu)和軸突生長(zhǎng)抑制;激活Gi蛋白不

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 秦曉慶;NgR特異性小干擾RNA對(duì)新生大鼠HIBD神經(jīng)再生功能的影響[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

本文編號(hào)：2803420