發(fā)布時間：2020-08-25 01:24

【摘要】： 目的分析腸道病毒(EV)在兒童手足口病及下呼吸道感染疾病中的感染狀況及血清型特征,并探討實時PCR方法在臨床標(biāo)本中的診斷價值,為臨床診斷和治療提供參考。 方法1.研究對象2009年4月至9月,首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院感染科門診診斷的手足口病患兒。采集患兒咽拭子和皰疹液及血清,用實時RT-PCR方法同時檢測腸道病毒通用型(EV)、柯薩奇A16型(CA16)、腸道病毒71型(EV71)；用ELISA方法對留取的雙份血清標(biāo)本同時檢測柯薩奇A16型、腸道病毒71型IgM抗體,結(jié)果與實時RT-PCR法結(jié)果進行比較分析。選取CA16、EV71陽性標(biāo)本進行VP1區(qū)基因片段擴增,電泳鑒定后測序,與Genbank進行blast比對,并利用生物分析軟件進行進化分析。 2.研究對象2008年6月至2009年9月,首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院呼吸病房收治的下呼吸道感染患兒。采集患兒靜脈血分離血清,呼吸道標(biāo)本,ELISA方法檢測血清EV IgM,實時RT-PCR方法檢測呼吸道標(biāo)本。與其他下呼吸道感染相關(guān)的病原進行比較分析。對RT-PCR陽性標(biāo)本進行VP4區(qū)擴增測序,部分標(biāo)本進行5‘非編碼區(qū)的擴增測序,結(jié)果與Genbank進行blast比對,確定EV血清型。 結(jié)果1.174例手足口病患兒中EV陽性167例, CA16陽性率67.1%(112/167),EV71陽性率27.5%(46/167)。CA16：EV71為2.43：1。131例患兒采集到雙份靜脈血,第一次血清CA16型IgM抗體陽性38.9%(51/131),二次血清陽性74.8%(98/131)：第一次血清EV71型IgM抗體陽性19.1%(25/131),二次血清陽性24.4%(32/131)。第一次血清結(jié)果與實時RT-PCR結(jié)果進行比對, CA16、EV71一致性檢驗Kappa值0.353、0.735；二次血清結(jié)果與實時RT-PCR結(jié)果比對, CA16、EV71一致性檢驗Kappa值0.830、0.898。實時RT-PCR法結(jié)果與二次血清檢測IgM結(jié)果一致性很好。測序結(jié)果：CA16陽性標(biāo)本病毒株同源性88.7%-98.5%,與13株B基因組參比序列核苷酸同源性88.1%-96.4%。EV71標(biāo)本病毒株核苷酸同源性95.8%-98%,屬C4亞型；與C4亞型參比序列核苷酸同源性96.5%-98.2%；與C4亞型以外的其他基因型及亞型的同源性81.9%-90%。 2.402例下呼吸道感染患兒,血清EV-IgM抗體陽性21.1%(85/402),柯薩奇病毒74例,�？刹《�56例,其中45例患兒血清同時檢測到上述兩種病毒IgM抗體。2008年6月-2009年9月的15個月均檢測到EV-IgM抗體,2008年12月陽性率最低,2008年7月陽性率最高。學(xué)齡兒童陽性率相對較高。85例EV陽性患兒中62例伴MP感染,10例伴常見呼吸道病毒感染。呼吸道標(biāo)本實時RT-PCR法檢出EV陽性15例,陽性率3.7%(15/402)。陽性標(biāo)本測序結(jié)果通過blast比對,確定EV血清型包括EV68 3例,ECH030 3例,CVB2 2例,EV71、CVA3、CVA9、CVB1和CVB3各1例。與肺炎相關(guān)血清型有EV71、CVA3、CVA9、ECH030、EV68、CVB1；與支氣管炎相關(guān)血清型ECH030、CVB2、CVB3。 結(jié)論1.2009年夏季兒童手足口病病原以CA16和EV71為主。EV71陽性率較之前報道有所上升,以C4亞型為主。對于手足口病,實時RT-PCR法較血清學(xué)檢測特異性IgM抗體更適于疾病早期診斷。2.下呼吸道感染患兒血清EV-IgM抗體全年均可檢測到,近年與下呼吸道感染相關(guān)的EV有柯薩奇病毒、EV68、EV71和ECH030等血清型。對于下呼吸道感染的EV診斷應(yīng)綜合考慮。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R725.1;R725.6
【圖文】：

」匕京協(xié)和醫(yī)學(xué)院同等學(xué)力申清碩_1學(xué)位論文結(jié)果分析16陽性樣本VPI區(qū)擴增用兩對CA16VPI區(qū)特異性引物(CA16一IF/CA16一ZR)及(CA16本進行PCR擴增。PCR產(chǎn)物大小分別約為297bp和881bp(凝膠電泳鑒定后送測序。10葉P2345678

圖3PCR擴增CA16VPI部分基因片段(81一5:881bp片段擴增產(chǎn)物16vPI區(qū)核營酸序列同源性分析引物均擴增出10例標(biāo)本。其中將SSlbp擴增片段8.70/0~98.5%。將標(biāo)本與從Genbank中選取的不同年份VPI區(qū)基因序列進行同源性對比，與A基因組的國徽阜陽株(EU812514)的同源性均較低，分別為其他13株參比序列(屬B基因組)的核普酸同源

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院同等學(xué)力申清碩1學(xué)位論文陽性樣本VPI區(qū)擴增兩對EV71VPI區(qū)特異性引物(EV71一3F/EV71一4R)及進行PCR擴增。PCR產(chǎn)物大小分別約為993bp(全脂糖凝膠電泳檢測后送測序。

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王旭艷;馮媛;;急性肺炎患兒腸道病毒感染狀況研究[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2014年09期

2 胡躍華;肖革新;郭瑩;于石成;馬家奇;;2008-2011年中國大陸手足口病流行特征分析[J];中華疾病控制雜志;2014年08期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王凌燕;長春市2011-2015年手足口病疫情特征分析及趨勢預(yù)測[D];吉林大學(xué);2017年

本文編號：2803087