【摘要】：目的 黏多糖病(mucopolysacchridoses,MPS)是一組由于酶缺陷造成的酸性黏多糖分子不能降解的溶酶體貯積病。臨床上至少包括I、II、III、IV、VI、VII和IX共7型,涉及11種水解酶。隨著造血干細(xì)胞移植及酶替代治療的逐步開展,MPS成為可治療的遺傳代謝病,早期診斷和早期治療是改善預(yù)后的關(guān)鍵。酶學(xué)分析是疾病診斷的重要依據(jù)。本課題研究目的如下: 1.建立適合臨床應(yīng)用的酶學(xué)分析方法及其正常參考值; 2.對臨床上高度疑似的黏多糖病患兒進(jìn)行酶學(xué)分型診斷; 3.評估尿黏多糖(glucosamnoglycan,GAG)及血清殼三糖苷酶測定在MPS篩查中的地位; 4.總結(jié)各型MPS的臨床特點(diǎn)。 對象和方法 1.對象:(1)病例組: 2008年6月-2010年12月廣州市婦女兒童醫(yī)療中心內(nèi)分泌代謝科根據(jù)臨床表現(xiàn)及X線檢查結(jié)果,高度疑似MPS患兒共36例,其中男25例,女11例,年齡0.2～10.8歲,平均(4.2±2.3)歲,所有患兒均進(jìn)行了尿GAG定量及電泳分析。其中32例在我院采集了外周血并進(jìn)行了外周血白細(xì)胞酶學(xué)分析和血清殼三糖苷酶活性測定。(2)正常對照組:63例,均為廣州市婦女兒童醫(yī)療中心保健科門診體檢的健康兒童,年齡1.3～13歲。 2.酶測定:包括下列六種常見MPS酶:а-L-艾杜糖酶(MPS I),艾杜糖醛酸硫酸酯酶(MPSII),半乳糖胺-6-硫酸酯酶(MPS IVA),β-半乳糖苷酶(MPS IVB),芳基硫酸酯酶B酶(MPS VI),β-葡萄糖醛酸酶(MPS VII)。右旋糖酐法分離白細(xì)胞,超聲波破碎儀制備細(xì)胞勻漿,二喹啉甲酸蛋白檢測試劑盒(BCA)測定蛋白含量。采用底物熒光法測定上述六種MPS酶活性。采用1,9二甲基亞甲藍(lán)(DMB)-Tris比色法定量測定尿GAG含量,瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行尿GAG定性分析,底物熒光法測定血清殼三糖苷酶活性。對高度懷疑MPS VI型者同時采用比色法測定芳基硫酸酯酶B酶活性。 結(jié)果 1.建立了底物熒光法測定外周血白細(xì)胞六種常見MPS酶活性測定方法,同時建立了芳基硫酸酯酶B比色法。各種方法的批內(nèi)變異系數(shù)均在6%以內(nèi),批間變異系數(shù)均在10%以內(nèi)。 2.建立了白細(xì)胞六種常見MPS酶活性正常參考值:а-L-艾杜糖酶(MPS I):69.7±23.8 nmol/(mg.h);艾杜糖醛酸硫酸酯酶(MPSII):77.1±33.9 nmol/(mg.4h);半乳糖胺-6-硫酸酯酶(MPS IVA):153.7±37.9 nmol/(mg.17h);β-半乳糖苷酶(MPS IVB):94.2±32.1 nmol/(mg.h);芳基硫酸酯酶B(MPS VI,熒光法):116.6±37.7 nmol/(mg.h);β-葡萄糖醛酸酶(MPS VII):151.6±45.8 nmol/(mg.h)。芳基硫酸酯酶B(比色法):1.7±0.5 U/g蛋白。 3.高度疑似MPS患兒酶學(xué)分型:32例在我院采集外周血的高度疑似MPS患兒全部確診為MPS,其中I型4例(占12.5%),II型11例(占34.3%),IVA型12例(占37.5%),VI型4例(占12.5%),VII型1例(占3.2%),未發(fā)現(xiàn)IVB型的患兒。MPS VI型患兒白細(xì)胞芳基硫酸酯酶B活性顯著降低,比色法與底物熒光法檢測結(jié)果一致。 4.在確診的32例患兒中,31例尿GAG濃度及尿GAG/Cr比值顯著增高,僅1例IVA型患兒尿GAG定量基本正常,陽性率96.9%。電泳分析顯示31例異常,其中I、II、VI、VII型患兒尿硫酸皮膚素(DS)陽性,11例IVA型患兒尿硫酸軟骨素(CS)陽性,另1例未見異常。尿GAG定量與電泳分析陽性符合率100%。6例MPS患兒(18.8%,1例Ⅰ型、4例ⅣA型、1例VII型)血清殼三糖苷酶活性輕度增高(60.5～315.8μmol/l.h)。 5.各型MPS臨床特點(diǎn):MPS具有明顯的遺傳異質(zhì)性,表現(xiàn)為不同程度的多系統(tǒng)損傷。其中I型、II型、VI型患者面容丑陋、關(guān)節(jié)僵硬、生長遲緩等,尿GAG定量和電泳均明顯異常。IVA型患兒臨床表現(xiàn)主要為生長遲緩,骨骼畸形,關(guān)節(jié)松弛,智力正常,尿GAG定量和電泳結(jié)果可正常。MPS VII型罕見,表現(xiàn)為水腫胎、血小板減少、外周血白細(xì)胞胞漿Alder-Reilly顆粒。 結(jié)論 1.建立了以底物熒光法為主的外周血白細(xì)胞六種常見MPS酶活性測定方法,具有良好的穩(wěn)定性、特異性和敏感性,操作相對簡單、快速,適合臨床推廣應(yīng)用。 2.建立了外周血白細(xì)胞六種常見MPS酶活性正常參考值。 3.在32例MPS患兒中,首次發(fā)現(xiàn)MPS IVA型最常見,其次是MPS II型,發(fā)現(xiàn)國內(nèi)首例MPS VII型患兒。 4.除少數(shù)IVA型患兒外,尿GAG定量和電泳仍是一種經(jīng)濟(jì)、快速、可靠的MPS篩查方法。 5.僅少數(shù)MPS患兒血清殼三糖苷酶輕度增高,該酶尚不能作為MPS常規(guī)生化標(biāo)記物用于疾病篩查和診斷。 6. MPS的臨床表現(xiàn)具有顯著異質(zhì)性,常累積多個器官,多學(xué)科合作可提高疾病診治水平,改善患兒預(yù)后。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R725.8
【圖文】：

結(jié) 果1. 六種 MPS 酶活性測定方法的建立及正常參考值：在激發(fā)光波長 355nm，發(fā)射光長 460nm 條件下，4-甲基傘形酮的熒光強(qiáng)度及濃度呈正相關(guān)，見圖 1。六種酶活性測定方法的批間及批內(nèi)變異系數(shù)均<10%, 其正常參考值見表 1.

電泳分析顯示 31 例異常，其中 I、II、VI、VII 型患兒尿 DS 陽性，11 例 IVA 型患兒尿 CS 陽性，另 1 例 IVA 型結(jié)果正常。尿 GAG 定量與電泳分析陽性符合率 100%，見表 3, 圖 2。表 3 32 例 MPS 患兒尿 GAG 含量、GAG/Cr 比值及電泳結(jié)果疾病分型平均年齡（歲）例數(shù) 尿 GAG(mg/L)尿 GAG/ Cr(mg/mmol)尿 GAG 電泳I 3.9 4 212.4±90.7 84.6±36.1 DS+～DS+++II 4.0 11 495.2±22.5 98.7±30.7 DS+～DS+++IVA 4.9 12 165.7±56.6 35.2±29.4 陰性～CS+VI 4.0 4 389.1±83.2 66.5±13.0 DS++～ DS+++VII 0.2 1 532.8 161.3 DS+++

D E 3：黏多糖病 IVA 型 患兒 X 線表現(xiàn)（A：椎體扁小，椎間隙相對增寬肋骨前肋變闊； B：腰椎前凸明顯；C 肋骨前肋變闊，如飄帶狀；D：撓骨下端骨骺向尺側(cè)成角，致尺撓骨遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)面呈相對的傾斜位。掌、指骨增粗，掌骨近端，指骨遠(yuǎn)端變細(xì)變尖，呈子彈頭狀；E: 骨盆髖臼變淺，髖外翻）

【參考文獻(xiàn)】

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1 歐瑞明;王玲;鄭麗玲;姚孟冬;蔣衛(wèi)桃;周長華;;異基因造血干細(xì)胞移植治療粘多糖病I型1例報(bào)告[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2006年03期

2 趙小媛;黃永蘭;李社勇;林文春;周志紅;劉麗;;尿粘多糖定量測定及其臨床應(yīng)用[J];中國兒童保健雜志;2010年11期

3 林群娣,光煒,蔣瑋瑩;瓊脂糖凝膠電泳檢測尿粘多糖方法的建立[J];廣東醫(yī)學(xué);1999年09期

4 尹宛洛,衛(wèi)潔,張森;1713例尿篩查分析[J];實(shí)用兒科臨床雜志;1991年02期

5 施惠平;;溶酶體貯積癥[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2007年08期

6 王和;;粘多糖貯積癥Ⅳ型酶學(xué)診斷與產(chǎn)前診斷[J];中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版);2006年01期

7 郭奕斌;;黏多糖病的診斷及防治策略[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2009年10期

8 董貴章;遺傳代謝病的實(shí)驗(yàn)室檢查[J];中國實(shí)用兒科雜志;1993年05期

9 郭玉鳳，施惠平，張為民，羅會元，韓璐亞,趙時敏;粘多糖貯積癥Ⅵ型的病例診斷與產(chǎn)前診斷[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;1995年02期

本文編號：2794362