發(fā)布時(shí)間：2020-08-14 09:55

【摘要】：目的 神經(jīng)干細(xì)胞是一種多能干細(xì)胞,在體外培養(yǎng)可保持不斷增殖狀態(tài),并一直保持干細(xì)胞的特征,其在一定誘導(dǎo)因素的作用下具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。 鈣調(diào)蛋白(CaM)作為細(xì)胞內(nèi)重要的一種Ca~(2+)結(jié)合蛋白一直被人們所關(guān)注。CaM是鈣離子受體蛋白,具有多種功能,介導(dǎo)了很多Ca~(2+)調(diào)節(jié)的生理過程�，F(xiàn)已證明,腦和一些內(nèi)分泌器官是CaM含量最豐富的器官。典型的動(dòng)物細(xì)胞含有10~7以上CaM分子,占細(xì)胞蛋白總量高達(dá)1%。CaM有廣泛的靶物,在不同組織細(xì)胞、不同生理狀態(tài)下及不同的發(fā)育階段所起的作用均不相同。 有資料表明,細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度與肌動(dòng)蛋白的功能發(fā)揮密切相關(guān),故而作為Ca~(2+)受體的CaM與肌動(dòng)蛋白功能發(fā)揮亦有相關(guān)性。肌動(dòng)蛋白是一種普遍存在的細(xì)胞骨架蛋白,其主要參與微絲的形成,并與中間絲、微管共同構(gòu)成和維持細(xì)胞的正常功能。肌動(dòng)蛋白作為一種骨架蛋白在細(xì)胞生長和發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用,其不僅與細(xì)胞形態(tài)密切相關(guān),而且參與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)以及細(xì)胞分裂、分化、基因表達(dá)等多種功能。 許多報(bào)道證實(shí)CaM是DNA重組以來最重要的發(fā)現(xiàn)之一,但有關(guān)CaM在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)和定向分化過程中的作用,這方面的研究國內(nèi)外尚無報(bào)道。本研究擬探討CaM在大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元過程中的時(shí)空表達(dá)對豐富神經(jīng)干細(xì)胞的理論內(nèi)容和搞清神經(jīng)干細(xì)胞特性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、新生大鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞原代及繼代培養(yǎng):無菌取新生大鼠
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R722.1
【圖文】：

折光性很強(qiáng)。以后細(xì)胞集落不斷增大、增多，培養(yǎng)至第7d時(shí)，每個(gè)集落細(xì)胞可達(dá)數(shù)十，甚至數(shù)百個(gè)細(xì)胞不等。細(xì)胞集落呈球形或卵圓形、�？盃�、懸浮生長(圖1)，生長活力很好。這些細(xì)胞集落經(jīng)neatni免疫組化染色后，免疫反應(yīng)強(qiáng)陽性(圖2)。1.2神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元及鑒定:將神經(jīng)干細(xì)胞機(jī)械吹打，改用含有血清及誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4h左右見細(xì)胞已貼壁，第2天可有細(xì)胞分化成有突起的細(xì)胞，分化的細(xì)胞中，可見三種類型的細(xì)胞:有的細(xì)胞較大，似平鋪在蓋玻片上，細(xì)胞突起較多、較粗，細(xì)胞數(shù)量很多;有的細(xì)胞較小

落細(xì)胞可達(dá)數(shù)十，甚至數(shù)百個(gè)細(xì)胞不等。細(xì)胞集落呈球形或卵圓形、�？盃�、懸浮生長(圖1)，生長活力很好。這些細(xì)胞集落經(jīng)neatni免疫組化染色后，免疫反應(yīng)強(qiáng)陽性(圖2)。1.2神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元及鑒定:將神經(jīng)干細(xì)胞機(jī)械吹打，改用含有血清及誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4h左右見細(xì)胞已貼壁，第2天可有細(xì)胞分化成有突起的細(xì)胞，分化的細(xì)胞中，可見三種類型的細(xì)胞:有的細(xì)胞較大，似平鋪在蓋玻片上，細(xì)胞突起較多、較粗，細(xì)胞數(shù)量很多;有的細(xì)胞較小，細(xì)胞突起較少，但突起很長，折光性較強(qiáng)，有的在較大細(xì)胞之上，細(xì)胞數(shù)量較少;還有一種最小的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量也最少，細(xì)胞突起較短、較細(xì)較少(圖3)。分化細(xì)胞經(jīng)NSE免疫組化染色后

細(xì)胞突起較少，但突起很長，折光性較強(qiáng)，有的在較大細(xì)胞之上，細(xì)胞數(shù)量較少;還有一種最小的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量也最少，細(xì)胞突起較短、較細(xì)較少(圖3)。分化細(xì)胞經(jīng)NSE免疫組化染色后，見較小細(xì)胞，為NES免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞，即為神經(jīng)元(圖4)，胞體較小、呈橢圓或三角形，可見2一4個(gè)突起且較長。2.鈣調(diào)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元的過程中，分化第l天，細(xì)胞體積較小，突起較短，CaM蛋白主要分布于細(xì)胞核及核周(圖5一A)，分化第3、5、7天

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2792874