【摘要】：目的:從膽汁酸自身反饋調(diào)節(jié)角度探討利膽合劑對(duì)α-萘異硫氰酸酯(ANIT)誘導(dǎo)的急性肝內(nèi)膽汁淤積模型幼齡大鼠FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因及蛋白表達(dá)的影響,觀察大鼠血清生化指標(biāo)及肝臟組織病理變化,明確利膽合劑治療嬰兒膽汁淤積性肝病的作用靶點(diǎn)。研究?jī)?nèi)容與方法:1.造模:根據(jù)淤膽型肝炎動(dòng)物模型的建立方法,將30只雌雄各半、體重70-90g的SPF級(jí)離乳后幼齡SD大鼠,入住SPF屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng),不同藥物干預(yù)第5天時(shí),除正常組外,一次性予ANIT灌胃建立肝內(nèi)膽汁淤積模型。2.動(dòng)物分組及干預(yù)方法:將30只雌雄各半SPF級(jí)離乳后幼齡SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后予稱(chēng)重,將大鼠按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、熊去氧膽酸組、利膽合劑高劑量組、利膽合劑低劑量組,每組六只,雌雄各半。正常組(N):予生理鹽水連續(xù)灌胃6天模型組(M):予生理鹽水灌胃4天,第5天予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃給藥1次熊去氧膽酸組(UDCA):0.3%熊去氧膽酸(2ml/100g)灌胃6天,第5天灌胃后間隔4-6小時(shí)另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃給藥1次利膽合劑高劑量組(LDM-H):利膽合劑(7.4g/2ml)灌胃6天,第5天灌胃后間隔4-6小時(shí)另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃給藥1次利膽合劑低劑量組(LDM-L):利膽合劑(7.4g/4ml)灌胃6天,第5天灌胃后間隔4-6小時(shí)另予ANIT溶液1ml/100g)灌胃給藥1次3.檢測(cè)指標(biāo):(1)檢測(cè)大鼠的TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP;(2)各組大鼠肝臟蘇木精伊紅染色,觀察肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。(3)實(shí)時(shí)PCR方法檢測(cè)肝臟FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因表達(dá)水平。(4)Western blotting方法檢測(cè)肝臟FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.利膽合劑高劑量組可以改善肝內(nèi)膽汁淤積的癥狀,降低TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP的水平優(yōu)于熊去氧膽酸組,并能減輕膽汁淤積造成的肝臟損害、修復(fù)受損的肝臟組織,有明顯的利膽保肝作用。2.利膽合劑高劑量組、利膽合劑低劑量組、熊去氧膽酸組FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表達(dá)水平均顯著高于模型組;利膽合劑高劑量組、利膽合劑低劑量組FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表達(dá)水平顯著高于熊去氧膽酸組;且利膽合劑高劑量組FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表達(dá)水平均高于利膽合劑低劑量組。3.利膽合劑高劑量組FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表達(dá)水平高于熊去氧膽酸組,利膽合劑低劑量組FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表達(dá)水平與熊去氧膽酸組相比兩者無(wú)顯著差異;且利膽合劑高劑量組SHP、UGT2B4蛋白表達(dá)水平顯著高于利膽合劑低劑量組。結(jié)論:利膽合劑對(duì)ANIT誘導(dǎo)的急性肝內(nèi)膽汁淤積模型幼齡大鼠具有保肝利膽的功效,對(duì)膽汁淤積及其引起的肝損害有明顯的治療作用,其機(jī)制可能為利膽合劑通過(guò)干預(yù)FXR上調(diào)SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白的表達(dá)來(lái)促進(jìn)膽汁酸在肝內(nèi)的排泄,修復(fù)膽汁淤積引起的肝損害。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R272
【圖文】：

圖 2 FXR 調(diào)節(jié)膽汁酸代謝圖第二部分 利膽合劑基于 FXR 調(diào)節(jié)膽汁酸代謝的實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)將根據(jù)嬰兒膽汁淤積性肝病的中西醫(yī)臨床基礎(chǔ)建立較為對(duì)應(yīng)的幼齡大鼠模型，研究利膽合劑對(duì) FXRSHP、UGT2B4、BSEP 基因及蛋白表達(dá)

各組大鼠血清生化指標(biāo)水平柱狀圖

圖 4：各組大鼠肝臟病理表現(xiàn)（蘇木精-伊紅染色，x200）注：正常組：肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞及匯管區(qū)未見(jiàn)明顯異常；模型組：肝細(xì)胞彌漫脂肪變性，部分肝細(xì)胞嗜酸性變，并見(jiàn)碎片狀壞死( )，匯管區(qū)纖維組織增生及炎

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳成偉;成軍;竇曉光;段鐘平;范建高;傅青春;高春芳;韓濤;韓英;侯金林;胡和平;胡錫琪;黃建榮;賈繼東;劉玉蘭;陸倫根;馬雄;茅益民;南月敏;�？∑�;邱德凱;任紅;尚佳;唐紅;王貴強(qiáng);王建設(shè);王吉耀;王磊;王宇明;魏來(lái);謝青;謝渭芬;許建明;徐銘益;徐小元;楊長(zhǎng)青;楊云生;尤紅;曾民德;張文宏;張躍新;莊輝;周新民;鄒曉平;;膽汁淤積性肝病診斷和治療共識(shí)(2015)[J];臨床肝膽病雜志;2015年12期

2 閔劍斌;陳浩;石思;劉方樂(lè);趙威;宓穗卿;祝晨

本文編號(hào)：2784571