發(fā)布時(shí)間：2020-08-06 20:33

【摘要】： 【目的】1.探討宮內(nèi)發(fā)育遲緩（Intrauterine Growth Retardation, IUGR）大鼠在胚胎期和出生后Insulin/Fox01/Pdx1/MafA基因的表達(dá)。2.探討宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠在胚胎期和出生后microRNA(miRNA)的表達(dá)。 【方法】實(shí)驗(yàn)一：（1）妊娠全程食物限制法制備宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠模型：清潔級(jí)SD大鼠，雌雄鼠1:3合籠交配，孕鼠按受孕順序隨機(jī)分為兩組（IUGR組和對(duì)照組）。IUGR組自妊娠第1天至分娩給予對(duì)照組飼料進(jìn)食量的半量；對(duì)照組妊娠全程任意攝取飼料；（2）標(biāo)本的采集：應(yīng)用顯微分離技術(shù)提取大鼠胚胎發(fā)育14.5天（E14.5），19.5天（E19.5）及新生大鼠胰腺組織；（3）胰腺組織形態(tài)學(xué)的觀(guān)察：采用HE染色，光鏡觀(guān)察E14.5、E19.5及新生大鼠胰腺形態(tài)學(xué)變化；（4）大鼠胰腺發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)：使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胚胎發(fā)育E14.5、E19.5及新生大鼠胰腺I(mǎi)nsulin/Fox01/Pdx1/MafA基因的表達(dá)情況；（5）不同時(shí)期大鼠胰腺Pdx1、MafA蛋白表達(dá)的檢測(cè)：采用Western-blot方法檢測(cè)胚胎發(fā)育E14.5、E19.5及新生大鼠胰腺Pdx1、MafA的蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)二：（1）妊娠全程食物限制法制備宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠模型：同實(shí)驗(yàn)一；（2）標(biāo)本的采集：應(yīng)用顯微分離技術(shù)提取大鼠胚胎發(fā)育14.5天（E14.5），19.5天（E19.5）及新生大鼠胰腺組織并成功提取RNA；（3）miRNA的檢測(cè)：采用丹麥Exiqon公司miRCURY. LNA miRNA表達(dá)譜芯片，對(duì)各樣本RNA進(jìn)行miRNA表達(dá)水平的檢測(cè)；（4）芯片檢測(cè)結(jié)果的驗(yàn)證：用實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)選取的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。 【結(jié)果】實(shí)驗(yàn)一：（1）與對(duì)照組大鼠相比，IUGR組在胰腺發(fā)育E14.5、E19.5及新生時(shí)均有形態(tài)學(xué)上的改變，表現(xiàn)為組織松散，結(jié)構(gòu)不清晰，胰島數(shù)量及面積減少；（2）Insulin/Fox01/Pdx1/MafA基因全程均有表達(dá)；（3）Insulin、MafA基因隨胎齡的增長(zhǎng)表達(dá)量增多，與對(duì)照組相比，IUGR組Insulin基因表達(dá)無(wú)明顯差異（P0.05），而MafA基因表達(dá)較之減少（P0.05）；（4）Fox01、Pdx1基因均在胚胎早期表達(dá)較多，隨胎齡的增長(zhǎng)表達(dá)量下降，且與對(duì)照組相比，IUGR組Pdx1基因表達(dá)無(wú)明顯差異（P0.05），F(xiàn)ox01表達(dá)較對(duì)照組減少（P0.05）；（5）MafA蛋白隨胎齡的增長(zhǎng)表達(dá)量增多，且IUGR組表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P0.05）；Pdx1蛋白隨胎齡的增長(zhǎng)表達(dá)量減少，IUGR組與對(duì)照組表達(dá)無(wú)明顯差異（P0.05）。實(shí)驗(yàn)二：（1）宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠在胚胎期和新生后miRNA的表達(dá)：對(duì)照組中，E19.5與E14.5相比，上調(diào)的miRNA有48個(gè)，下調(diào)的28個(gè)；新生鼠與E14.5相比，上調(diào)的64個(gè)，下調(diào)55個(gè)；新生鼠與E19.5相比，上調(diào)40個(gè)，下調(diào)52個(gè)。同時(shí)，與對(duì)照組相比，IUGR組中E14.5上調(diào)的miRNA有10個(gè)，下調(diào)的有26個(gè)；E19.5上調(diào)22個(gè)，下調(diào)15個(gè)；新生鼠上調(diào)9個(gè)，下調(diào)13個(gè)；（2）對(duì)選取的miR-124、let-7d*驗(yàn)證：對(duì)照組中，miR-124在新生鼠均比E14.5、E19.5顯著上調(diào)（FoldChange=1.5），而IUGR組較對(duì)照組表達(dá)無(wú)明顯差異（0.67FoldChange
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 袁慶新;劉超;滕麗萍;劉翠萍;周錦勇;郭靖;程梅;德偉;;大鼠胰腺發(fā)育過(guò)程中Munc13-1對(duì)胰島素釋放功能的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年09期

2 崔蘊(yùn)璞;低出生體重與胰島素抵抗[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2003年01期

3 陳璐;劉翠萍;袁慶新;徐寬楓;劉超;;宮內(nèi)發(fā)育遲緩對(duì)新生大鼠胰腺發(fā)育及功能的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年03期

4 袁慶新;仲燕;劉超;劉翠萍;袁櫟;周錦勇;滕麗萍;胡靜靜;德偉;;大鼠胚胎胰腺發(fā)育后期基因表達(dá)譜的研究[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年39期

5 孫凱;汪謙;;液相芯片技術(shù)在小分子RNA檢測(cè)分析中的應(yīng)用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年20期

本文編號(hào)：2782930