缺鋅促進(jìn)SENP5過表達(dá)致小鼠胚胎心臟發(fā)育異常的研究

發(fā)布時間：2020-08-06 10:17

【摘要】：目的:1.觀察缺鋅是否造成心臟發(fā)異常。2.觀察SENPs各成員在胚胎心臟發(fā)育過程中的變化趨勢及重要性。3.探討缺鋅是否通過誘導(dǎo)SENP5過表達(dá)導(dǎo)致小鼠胚胎心臟發(fā)育異常。研究內(nèi)容及方法:1.缺鋅對心肌細(xì)胞增殖、凋亡及分化的影響提取小鼠心肌細(xì)胞,進(jìn)行原代培養(yǎng),通過免疫熒光雙標(biāo)記實驗鑒定提取出的原代心肌細(xì)胞是否為心肌干細(xì)胞,建立缺鋅模型,利用CCK8和流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞在正常和缺鋅兩種不同的情況下的活性及凋亡情況,Western Blotting檢測原代心肌細(xì)胞的分化情況。2.SENPs各成員在小鼠胚胎心臟發(fā)育過程中的表達(dá)水平及變化趨勢收集E10.5至P7發(fā)育階段的小鼠胚胎心臟標(biāo)本,通過免疫組化及Western Blotting檢測SENPs蛋白在心臟中的表達(dá)情況。3.缺鋅時SENP5蛋白表達(dá)變化及其對心肌細(xì)胞活性及分化的影響建立心肌細(xì)胞H9c2的缺鋅模型,在正常和缺鋅兩種不同的情況下,通過Western Blotting檢測心肌細(xì)胞中SENP5蛋白的不同表達(dá)情況。創(chuàng)建SENP5干涉質(zhì)粒,對心肌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。通過CCK8檢測在SENP5干涉的情況下心肌細(xì)胞的活性情況,Western Blotting檢測心肌細(xì)胞的分化情況。結(jié)果:1.免疫熒光結(jié)果顯示原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞絕大部分表明都帶有Sca1和c-kit特異性標(biāo)記物,證實為心肌干細(xì)胞。CCK8及流式結(jié)果顯示,與正常對照組相比,缺鋅時心肌細(xì)胞的活性明顯降低,凋亡數(shù)量增加。Western Blotting結(jié)果示,與正常對照組相比,缺鋅時心肌干細(xì)胞的分化能力下降。2.免疫組化及Western Blotting結(jié)果顯示,在E10.5-E19.5發(fā)育階段,SENP5在小鼠胚胎心臟中的表達(dá)量逐漸上升,在P1-P7發(fā)育階段,SENP5的表達(dá)量逐漸升高,表明在正常胚胎心臟發(fā)育的重要階段,SENP5的表達(dá)水平隨著心肌干細(xì)胞分化能力的減弱而升高,間接說明了SENP5在胚胎心臟發(fā)育過程中的重要作用。3.Western Blotting結(jié)果證實,相比于正常對照組,心肌細(xì)胞內(nèi)SENP5的表達(dá)量在缺鋅時明顯增加。CCK8及Western Blotting結(jié)果顯示,與正常對照組相比,缺鋅時,正常心肌干細(xì)胞活性下降,分化能力減弱;而SENP5干涉的心肌干細(xì)胞在缺鋅狀態(tài)下,其活性度及分化能力與正常對照組略有下降,但高于正常細(xì)胞缺鋅組;正常狀態(tài)下,SENP5干涉心肌干細(xì)胞的活性和分化能力與正常對照組相比無明顯差別。結(jié)論:缺鋅通過誘導(dǎo)SENP5過表達(dá)導(dǎo)致小鼠胚胎心臟發(fā)育異常。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R722.1
【圖文】：

缺鋅,標(biāo)記物,活性度,紡錘

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文一、缺鋅對心肌細(xì)胞圖 1.免疫熒光檢測心肌干細(xì)胞。A、原代細(xì)胞圖像，可見紡錘緣向外伸展；B、第二代傳代細(xì)胞，可見其間混雜有多角形或第四代傳代細(xì)胞，可見細(xì)胞形態(tài)逐漸均一化，細(xì)胞增殖旺盛胞表達(dá)心肌干細(xì)胞特異性標(biāo)記物 Sca1；E、可見大部分細(xì)胞表性標(biāo)記物 c-kit 表達(dá)。1.2.2 CCK8 結(jié)果CCK8 結(jié)果顯示，與正常對照組相比，缺鋅時心肌細(xì)胞濃度時活性度即下降到 40%以上，見圖 2。P＜0.05，有統(tǒng)計

心肌細(xì)胞凋亡,流式,情況,缺鋅

圖 3.流式檢測心肌細(xì)胞凋亡情況。圖 A 為正常心肌細(xì)胞處理組；圖 B 為缺鋅心肌細(xì)胞處理組。1.2.4 Western Blotting 結(jié)果見圖 4，與正常對照組相比，缺鋅時，心肌干細(xì)胞中干性維持指標(biāo) Sca1、c-kit蛋白表達(dá)量升高，而分化指標(biāo) GATA4 蛋白的表達(dá)量下降。用 Image J 軟件分析WB 條帶，SPSS 分析所得數(shù)據(jù)，P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

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