【摘要】： 目的 本實(shí)驗(yàn)通過制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型,腹腔注射外源性別嘌呤醇(ALLO),觀察ALLO對(duì)新生HIBD大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羥自由基(·OH)及caspase-3基因表達(dá)的影響,以探討ALLO保護(hù)腦組織的機(jī)制,以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。 方法 1.制備HIBD模型:將新生7日齡Wistar大鼠行頸部正中切口,分離結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后給予低氧(8%O_2,92%N_2)處理2小時(shí),制成HIBD模型。觀察缺氧時(shí)動(dòng)物行為變化。 2.行為能力檢查:分別于手術(shù)前及缺氧后1小時(shí)對(duì)每只新生大鼠進(jìn)行翻身能力、夾尾左旋測(cè)試。 3.腦大體形態(tài)檢查:分別于處死時(shí)觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)。 4.SOD、MDA、·OH及caspase-3基因表達(dá)測(cè)定:56只新生7日齡Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、生理鹽水對(duì)照組(NS)和ALLO干預(yù)組(ALLO)。假手術(shù)組(8只)只予分離但不結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,于手術(shù)恢復(fù)后24h處死。其余兩組于缺氧結(jié)束后1h和24h兩次腹腔注射生理鹽水或ALLO,并于末次給藥后0.5h、24h以及72h處死(每組8只動(dòng)物),以患側(cè)腦組織為標(biāo)本,應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD,應(yīng)用改良的硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA,應(yīng)用Fenton反應(yīng)測(cè)定·OH,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測(cè)定caspase-3基因的表達(dá)。 結(jié)果 1.行為能力檢查術(shù)前每只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測(cè)定,56只全部正常。sham組測(cè)定結(jié)果同前。經(jīng)歷缺氧缺血的48只大鼠,26只不能翻身,38只出現(xiàn)夾尾左旋,16只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時(shí)存在。 2.腦大體檢查新生大鼠HIBD后NS對(duì)照組結(jié)扎側(cè)半球腦組織受損嚴(yán)重,在24h時(shí)蒼白、水腫明顯,體積明顯大于對(duì)側(cè),72h可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)液化壞死灶;ALLO干預(yù)組大鼠未見上述改變或僅見結(jié)扎側(cè)腦半球輕微的水腫;sham組大鼠大腦半球左右對(duì)稱,未見任何病理變化。 3.SOD、MDA、·OH表達(dá)檢測(cè)結(jié)果與sham組比較,MDA、·OH在HIBD后24h、72h NS對(duì)照組的表達(dá)明顯增高(P＜0.05),而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組低(P＜0.05)�？係OD活力在HIBD后24h、72h NS對(duì)照組明顯降低,與sham組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組有所回升(P＜0.05)。HIBD后0.5h NS對(duì)照組與ALLO干預(yù)組及sham組兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.caspase-3基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果與sham組比較,caspase-3基因在HIBD后24h、72h NS對(duì)照組表達(dá)明顯增高(P＜0.05),而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組低(P＜0.05)。HIBD后24h、72h NS對(duì)照組與假手術(shù)組、與同時(shí)間點(diǎn)ALLO干預(yù)組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而HIBD后0.5h NS對(duì)照組與ALLO干預(yù)組及sham組兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。 2.新生大鼠HIBD后MDA、·OH表達(dá)增高,SOD活力降低,證實(shí)存在自由基的損傷;caspase-3 mRNA升高,證實(shí)存在細(xì)胞凋亡。 3.ALLO可能通過抑制MDA、·OH的表達(dá)、保護(hù)SOD并下調(diào)caspase-3基因表達(dá)、抑制腦細(xì)胞凋亡起到腦保護(hù)作用,為ALLO臨床治療新生兒HIBD提供了進(jìn)一步的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

明顯的降低(P<0.001)，而ALLO治療組(28.54土1.23，30.06士1.55，30.78士1.67)與相同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組分別比較均有明顯的回升(尸<0.05)，見表1及圖1; 3.2MDA含量伍m口l/mgProt夕:與sham組相比 (1.08士0.15)，不同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組MDA含量 (3.24士0.23，2.04士0.41， 1.97士0.57)均有明顯的升高(P<0.01)，而ALLO治療組(1.83士0.53，1.60士0.15，1.37士0.07)與相同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組分別比較均有明顯的降低(尸<O，05)

圖4瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注:DLZ000Marker6條電泳帶由上往下依次為Z000bp、I000bp、75Obp、SOObp、25Obp、IO0bp;日一aetin產(chǎn)物長(zhǎng)度為15Obp;樣本產(chǎn)物長(zhǎng)度為147bp，與隊(duì)aetin相當(dāng)，均在25Obp與IOObp之l‘司。.2PCR結(jié)果一與sham組相比(23.06士10.62)，不同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組CasPase一3的相量(100.86士24.94，189.86士31.55，136.60士11.63)均有明顯的升高(P<1)，而刁淚同時(shí)}‘司點(diǎn)的ALLO組(65.96士20.88，39.31士23.83，32.52士18.12)S對(duì)照組分別比較均有明顯的降低(尸<0.腸)，見圖5一9、表2及圖10。

圖4瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注:DLZ000Marker6條電泳帶由上往下依次為Z00I000bp、75Obp、SOObp、25Obp、IO0bp;日一aetin產(chǎn)物長(zhǎng)15Obp;樣本產(chǎn)物長(zhǎng)度為147bp，與隊(duì)aetin相當(dāng)，均在2與IOObp之l‘司。PCR結(jié)果一與sham組相比(23.06士10.62)，不同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組C(100.86士24.94，189.86士31.55，136.60士11.63)均有明顯)，而刁淚同時(shí)}‘司點(diǎn)的ALLO組(65.96士20.88，39.31士23.83，3對(duì)照組分別比較均有明顯的降低(尸<0.腸)，見圖5一9、表2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2779324