【摘要】：第一章兒童白血病WWOX、FHIT的mRNA表達(dá)研究 目的：了解包含WW域的氧化還原酶(WW domain-containing oxidoreductase, WWOX)基因和脆性組氨酸三聯(lián)體(fragile histidine triad, FHIT)基因在兒童白血病中的表達(dá),分析WWOX、FHIT基因與兒童白血病的關(guān)系；探討WWOX與FHIT基因在兒童白血病中的發(fā)病機(jī)制。 方法：收集2009年1月至2011年3月白血病的兒童51例作為白血病組,同期湖南省人民醫(yī)院非白血病兒童10例作為對(duì)照組,檢測(cè)兩組兒童骨髓單個(gè)核細(xì)胞(Bone marrow mononuclear cells, BMMCs)中WWOX和FHIT基因的mRNA表達(dá)。 結(jié)果： 1.白血病組的WWOXmRNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組(31.37% vs 100.00%,P0.01)。 2.白血病緩解組WWOXmRNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組(33.33%vs 100%,P0.01)。 3.白血病組WWOXmRNA表達(dá)陽(yáng)性率在不同性別、年齡、白血病類型、治療階段、腫瘤負(fù)荷組別間無(wú)顯著差異(P0.05)。 4.白血病組FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組(54.90% vs100.00%,P0.05)。 5.白血病緩解組FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率為66.67%,對(duì)照組FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率為100.00%,兩組間無(wú)明顯差異(P0.05) 6.白血病組FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率在不同性別、年齡、白血病類型、治療階段組別間無(wú)顯著差異(P0.05)。 7.高腫瘤負(fù)荷組FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于低腫瘤負(fù)荷組(33.33% vs 66.67%,P0.05)。 8.51例白血病兒童FHITmRNA與WWOXmRNA同時(shí)表達(dá)缺失的有15例。 結(jié)論： 1.WWOXmRNA、FHITmRNA在兒童白血病中低表達(dá)。 2. WWOXmRNA表達(dá)陽(yáng)性率在不同性別、年齡、白血病類型、治療階段、腫瘤負(fù)荷的白血病兒童間無(wú)差異。 3.FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率在不同性別、年齡、白血病類型、治療階段的白血病兒童間無(wú)差異。 4.高腫瘤負(fù)荷的白血病患兒FHITmRNA表達(dá)陽(yáng)性率低于低腫瘤負(fù)荷患兒。 第二章Zebularine對(duì)K562、Jurkat細(xì)胞WWOX、FHIT表達(dá)的影響 目的：研究1-(β-D-呋喃核糖苷)-1,2-二氫嘧啶-2-酮(Zebularine, Zeb)干預(yù)K562和Jurkat后WWOX和FHIT的表達(dá)變化,分析zeb作用于WWOX和FHIT基因的機(jī)制；探討zeb在白血病治療中的意義。 方法：K562與Jurkat按Zeb的不同干預(yù)濃度各分為三個(gè)組,分別為control組、250μM組(Zeb終濃度為250μM)、500μM組(Zeb終濃度為500μM)。巢式PCR (nested PCR)方法檢測(cè)細(xì)胞Zeb干預(yù)48小時(shí)后WWOX和FHITmRNA的表達(dá)；Western-Blot方法檢測(cè)細(xì)胞Zeb干預(yù)48小時(shí)后WWOX和FHIT蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1.在k562中,control組未檢測(cè)到有WWOXmRNA表達(dá),而250μM組和500μM組能檢測(cè)到WWOXmRNA的表達(dá),但250μM組與control組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而500μM)組表達(dá)高于control與250μM組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2.在Jurkat中,control組和250μM組未檢測(cè)到有WWOXmRNA表達(dá),而500μM組能檢測(cè)到WWOXmRNA的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 3.K562與Jurkat在Zeb干預(yù)48h后,250μM組、500μM組與control組相比,WWOX與FHIT蛋白表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義(P0.01),500μM組與250μM組相比,WWOX與FHIT蛋白表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義(P0.01)。 結(jié)論： Zeb能夠上調(diào)WWOXmRNA、FHITmRNA與WWOX、FHIT蛋白的表達(dá),并有一定的濃度依賴性。 第三章Zebularine對(duì)K562、Jurkat細(xì)胞增殖及凋亡的影響 目的：研究Zeb對(duì)K562、Jurkat增殖及凋亡的影響；探討Zeb在白血病中的的抑癌機(jī)制；探討其在白血病治療中的價(jià)值。 方法：K562與Jurkat按Zeb的不同干預(yù)濃度各分為三個(gè)組,分別為control組、250μM組(Zeb終濃度為250μM)、500μM組(Zeb終濃度為500μM)。MTT試劑盒檢測(cè)12h、24h、36h、48h和72h后兩種細(xì)胞株的OD570值；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞Zeb干預(yù)48h后的細(xì)胞形態(tài)；用Annexin V/FITC試劑盒與細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞Zeb干預(yù)48h后的細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1.k562與Jurkat在zeb干預(yù)48h后,隨著Zeb處理濃度的增加,細(xì)胞OD570值明顯降低。 2.Zeb干預(yù)48h后倒置顯微鏡觀察,K562與Jurkat中,control組生長(zhǎng)良好,成團(tuán)分布,250μM組細(xì)胞成團(tuán)分布細(xì)胞減少,呈分散趨向,500μM細(xì)胞散在分布,未見成團(tuán)分布的細(xì)胞。 3.K562與Jurkat在Zeb干預(yù)48h后,250μM組、500μM組與control組相比,早期凋亡細(xì)胞比例與細(xì)胞凋亡峰(APO峰)值明顯增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),500μM組與250μM組相比,早期凋亡細(xì)胞比例與細(xì)胞凋亡峰(APO峰)值明顯增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論： Zeb可抑制K562與Jurkat的增殖,促進(jìn)其凋亡,并有一定的濃度依賴性。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2778802