【摘要】： 目的建立胚胎期Flu誘導(dǎo)SD鼠隱睪模型,研究Flu對生精小管管腔化、Sc成熟、細(xì)胞間連接蛋白Cox43表達(dá)的影響;以及T3對Cox43表達(dá)及Sc功能成熟的干預(yù)調(diào)控作用。 方法①GD12-21SD孕鼠,皮下注射Flu(25mg/kg·d)誘導(dǎo)建立隱睪模型;PD1-13幼鼠,皮下注射T3(15μg/kg·d)干預(yù)。②應(yīng)用Real-Time PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)法,分析PD13、PD15、PD17、PD20睪丸Cox43 mRNA表達(dá)及蛋白質(zhì)定位分布差異。③HE染色觀察PD10生精小管管腔化指數(shù),生精小管直徑和面積,以及管腔內(nèi)Gonocytes分布。④采用Real-Time PCR技術(shù),分析PD13、PD15、PD17 Sc SGP-2 mRNA表達(dá)。⑤采用免疫組織化學(xué)法,定量檢測PD13、PD15、PD17 Sc細(xì)胞核BrdU摻合情況,Sertoli細(xì)胞增殖指數(shù)。 結(jié)果 ①PD13、PD15 Flu誘導(dǎo)組睪丸Cox43 mRNA表達(dá)均明顯低于正常對照組(P㩳0.05);PD17 Flu誘導(dǎo)組睪丸Cox43 mRNA表達(dá)與正常對照組無顯著性差異(P㧐0.05)。PD20 Flu誘導(dǎo)隱睪組睪丸Cox43mRNA表達(dá)明顯低于正常對照組(P㩳0.05)和非隱睪組(P㩳0.01),但是,PD20 Flu誘導(dǎo)非隱睪組睪丸Cox43 mRNA表達(dá)與正常對照組無顯著差異(P㧐0.05)。T3干預(yù)后,PD13 Flu誘導(dǎo)組睪丸Cox43 mRNA表達(dá)明顯升高,與正常對照組無顯著差異(P㧐0.05)。T3干預(yù)后,PD20 Flu誘導(dǎo)隱睪組睪丸Cox43 mRNA表達(dá)明顯高于非干預(yù)組(P㩳0.05),與正常對照組表達(dá)無顯著差異(P㧐0.05);而PD20 Flu誘導(dǎo)T3干預(yù)非隱睪組與非干預(yù)組、正常對照組比較,Cox43 mRNA表達(dá)均無顯著差異(P㧐0.05)。 ②PD13、PD 15 Flu誘導(dǎo)組生精小管內(nèi)Cox43蛋白表達(dá)強度明顯低于正常對照組(圖1-5A、B和1-6A、B);PD17、PD20正常對照組生精小管基底膜精原細(xì)胞層無Cox43蛋白分布,而Flu誘導(dǎo)各組生精小管基底膜精原細(xì)胞層均有Cox43蛋白分布(圖1-6C、D和1-7A、B、C)。T3干預(yù)后,PD13 Flu誘導(dǎo)組生精小管內(nèi)Cox43蛋白表達(dá)強度明顯升高,與正常對照組相似(圖1-5C)。PD20 Flu誘導(dǎo)T3干預(yù)非隱睪組Cox43蛋白表達(dá)分布無異常,而Flu誘導(dǎo)T3干預(yù)隱睪組,基底膜精原細(xì)胞層仍有Cox43蛋白表達(dá)(圖1-7D、E)。 ③隨PD13-17時間推移,正常對照組和Flu誘導(dǎo)組Sc增殖指數(shù)均呈下降趨勢。PD13、PD15、PD17 Flu誘導(dǎo)組Sc增殖指數(shù)明顯高于正常對照組(P㩳0.01,圖2-7)。T3干預(yù)后,PD13 Flu誘導(dǎo)組Sc增殖指數(shù)明顯低于Flu誘導(dǎo)未干預(yù)組和正常對照組(P㩳0.01)。PD13正常對照組與Flu誘導(dǎo)組睪丸SGP-2 mRNA表達(dá)無顯著差異(P㧐0.05);而PD15、PD17 Flu誘導(dǎo)組睪丸SGP-2 mRNA表達(dá)明顯低于正常對照組(P㩳0.01)。T3干預(yù)后,PD13 Flu誘導(dǎo)組睪丸SGP-2 mRNA表達(dá)明顯高于未干預(yù)組和正常對照組(P㩳0.01)。 結(jié)論 ①胚胎期Flu暴露導(dǎo)致睪丸Cox43 mRNA表達(dá)下降和生精小管內(nèi)Cox43蛋白表達(dá)分布異常。T3能上調(diào)Cox43表達(dá),維持其正常表達(dá)。 ②胚胎期Flu暴露導(dǎo)致Sc功能成熟延遲或障礙,T3能夠促進(jìn)Sc功能成熟。 ③胚胎期Flu暴露導(dǎo)致生精小管腔化延遲、管腔中央Gonocytes殘存,T3能夠促進(jìn)腔化延遲的生精小管正常管腔化。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R726.9
【圖文】：

1-1：實時定量 PCR 檢測 T3 干預(yù) Flutamide 誘導(dǎo) SD 鼠睪丸 Connexin43 基因表達(dá)。二圖為標(biāo)準(zhǔn)曲線；中圖為熔解曲線；下圖為擴增曲線g1-1: Expression of Connexin43 gene in SD rat testis detected by Real time PCR, the testiduced by Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; medial fig: melrve; lower fig: amplification plot 1-2：PCR 產(chǎn)物特異性驗證。（β-actin 產(chǎn)物長度為 150bp；Connexin43 產(chǎn)物長度為 233bp；P-2 產(chǎn)物長度為 141bp）100bp200bp300bpβ-actin Cox43 SGP-2 Marker

時定量 PCR 檢測 T3 干預(yù) Flutamide 誘導(dǎo) SD 鼠睪丸 Connexin43 基因標(biāo)準(zhǔn)曲線；中圖為熔解曲線；下圖為擴增曲線xpression of Connexin43 gene in SD rat testis detected by Real time Py Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; mer fig: amplification plotβ-actin Cox43 SGP-2 Marker

2-1：實時定量 PCR 檢測 T3 干預(yù) Flutamide 誘導(dǎo) SD 鼠睪丸 SGP-2 基因表達(dá)。上二圖為標(biāo)曲線；中圖為熔解曲線；下圖為擴增曲線g2-1: Expression of SGP-2 gene in SD rat testis detected by Real time PCR, the testiduced by Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; medial fig: melrve; lower fig: amplification plot1.2 SGP-2 基因的 mRNA 表達(dá)情況結(jié)果顯示（表 2-2，圖 2-2）：PD13 Flu 誘導(dǎo)組 Sc 經(jīng) T3 干預(yù)后，SGP-2 mRNA達(dá)量較正常對照組和未干預(yù)組均明顯升高（P㩳0.01），而正常對照組與 Flu 誘導(dǎo) SGP-2 mRNA 表達(dá)無明顯差異（P㧐0.05）；PD15、PD17 Flu 誘導(dǎo)組 Sc 中 SGP-RNA 表達(dá)量明顯低于正常組（P㩳0.01）。表 2-2：實時定量 PCR 檢測各組睪丸組織 SGP-2 基因相對表達(dá)水平（n=6， x ±s）Table2-2：Expression of SGP-2 gene in each group detected by Real Time PCR(n=6, x ±s)samples ΔCT2-ΔΔCT（RQ）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 章必成,張曉暉;CDK抑制蛋白研究新進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1997年01期

本文編號：2774493