【摘要】： 目的早產(chǎn)兒圍生期腦損傷多伴有運動、神經(jīng)行為和認(rèn)知發(fā)育異常，以往關(guān)于早產(chǎn)兒腦損傷的動物實驗研究多注重腦組織形態(tài)學(xué)和生化指標(biāo)的改變，但實驗動物腦損傷后神經(jīng)行為、運動、認(rèn)知發(fā)育評價也同樣重要。本實驗?zāi)康脑谟谟^察3日齡未成熟大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈缺氧缺血腦損傷后少突膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及腦白質(zhì)組織學(xué)變化，了解存在腦損傷的未成熟大鼠幼鼠期、青春期、成熟期神經(jīng)行為、運動和認(rèn)知損害程度，建立用于早產(chǎn)兒缺氧缺血腦損傷研究的合適動物模型，探討相關(guān)時期腦白質(zhì)病理變化與大鼠行為運動障礙的關(guān)系。 方法將3日齡SD未成熟新生大鼠共30窩(共360只)通過隨機數(shù)字表隨機分為兩組：對照組和實驗組。對照組僅切開頸部皮膚，而實驗組結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。采用透射電鏡染色、組織切片HE染色、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞O_4標(biāo)記和細(xì)胞凋亡免疫組化雙標(biāo)、免疫組化標(biāo)記髓鞘堿性蛋白，觀察未成熟大鼠腦白質(zhì)損傷的超微結(jié)構(gòu)病理變化、少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡、髓鞘蛋白的表達水平。生后1周至3周檢查兩組大鼠體重、睜眼、豎耳、門齒萌出等生理發(fā)育情況，檢測眼瞼反射、耳廓反射、驚跳反射、翻正反射、四肢放置及抓握反射、趨地反射等原始反射，并進行神經(jīng)行為發(fā)育評價；生后3周至6周通過步伐失誤實驗、垂直網(wǎng)屏實驗、平衡木實驗、轉(zhuǎn)棒實驗評估兩組大鼠運動協(xié)調(diào)性、伸肌功能、平衡能力和運動耐力發(fā)育；生后7周至13周通過水迷宮實驗評價大鼠腦損傷遠(yuǎn)期認(rèn)知水平發(fā)育。 結(jié)果①對照組存活率為100％(120只／120只)，實驗組存活率為51.3％(123只／240只)。實驗組有87.8％(108只／123只)存在眼部發(fā)育障礙。②生后1至3周實驗組大鼠體重增長較對照組明顯緩慢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。生后3周實驗組腦重較對照組減輕，實驗組為1.06克±0.02克，對照組為1.46±0.04克，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。③透射電鏡術(shù)后6小時見實驗組大鼠腦室周白質(zhì)少突膠質(zhì)細(xì)胞及其線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體水腫明顯，見線粒體數(shù)目減少和空泡現(xiàn)象，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。術(shù)后12小時實驗組少突膠質(zhì)細(xì)胞可見細(xì)胞核染色質(zhì)分布不均。術(shù)后24小時實驗組少突膠質(zhì)細(xì)胞廣泛核固縮。④組織切片HE染色見實驗組早期皮質(zhì)下、腦室周白質(zhì)疏松，后期膠質(zhì)細(xì)胞增生、腦室擴大、白質(zhì)軟化灶形成；凋亡細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記后顯示為少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞；生后3周實驗組大鼠髓鞘相關(guān)蛋白表達減少。⑤實驗組大鼠出現(xiàn)眼瞼反射的日齡為11.0±0.6天，相比對照組8.0±0.4天有明顯延遲，差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。實驗組出現(xiàn)驚跳反射的時間為11.2±0.9天，對照組為8.4±0.3天，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。下肢放置反射出現(xiàn)的時間實驗組為10.6±0.7天，對照組為8.1±0.4天，兩組有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。實驗組出現(xiàn)上肢抓握反射的時間為9.4±0.2天，對照組為7.5±0.2天。實驗組下肢抓握反射出現(xiàn)時間為10.4±0.7天，對照組為8.1±0.4天，兩組差異都有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。實驗組完成趨地性反射的日齡為19.0±2.0天，對照組為10.8±0.5天，兩組差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。對照組大鼠步態(tài)反射陽性的日齡是生后10.5±0.5天，實驗組為生后13.5±0.3天，實驗組步態(tài)反射出現(xiàn)的日齡較對照組有延遲，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑥生后3周至6周實驗組大鼠抓握能力的正常發(fā)育趨勢緩慢，同日齡實驗組大鼠能夠抓住網(wǎng)屏的時間較對照組明顯減少兩組差異比較有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(圖16)。實驗組大鼠在網(wǎng)格上行走時出現(xiàn)較多的踩空現(xiàn)象。實驗組大鼠生后3周到6周前肢步伐失誤率及后肢步伐失誤率較對照組明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。實驗組大鼠平衡能力較對照組明顯減退。在大鼠生后3周至6周進行平衡木實驗，實驗組大鼠得分明顯高于對照組，差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。實驗組的大鼠轉(zhuǎn)棒能力增長緩慢，且生后3周至6周實驗組大鼠轉(zhuǎn)棒總路程及轉(zhuǎn)棒平均速度較對照組均明顯下降(P＜0.05)。⑦水迷宮實驗對大鼠游泳曲線、上臺成功率、站臺周游泳時間比例及游泳平均速度各方面指標(biāo)進行評價，實驗組大鼠青春期、成熟期認(rèn)知功能較對照組明顯降低(P＜0.05)。 結(jié)論①3日齡未成熟SD新生大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈后早期以少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡、彌漫性腦白質(zhì)損傷為主；腦損傷后期出現(xiàn)腦室擴大和腦白質(zhì)內(nèi)軟化灶形成。②實驗組大鼠幼鼠期出現(xiàn)生長發(fā)育障礙，睜眼延遲及眼部發(fā)育異常，存在原始神經(jīng)反射受抑制，甚至驚厥。運動能力在生后2周有一定代償現(xiàn)象，但隨日齡增長出現(xiàn)進行性運動功能缺陷。③在生后3周至6周即兒童期，實驗組大鼠運動耐力、伸肌功能、平衡力和運動協(xié)調(diào)能力下降。④在生后7周至13周即青春期、成熟期階段，實驗組大鼠存在持續(xù)的空間認(rèn)知功能及遠(yuǎn)期記憶缺陷。⑤本文結(jié)果為進一步認(rèn)識早產(chǎn)兒腦損傷后神經(jīng)病理和少突膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化與運動、認(rèn)知行為的關(guān)系提供實驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R722.6
【圖文】：

(一)分組從復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院實驗動物中心購得清潔級3日齡(P3)SD大鼠30窩，共360只，體重6.5一129，性別不拘。取同窩P3大鼠應(yīng)用隨機數(shù)字表隨機分為兩組:1、正常對照組(假手術(shù)組，簡稱對照組)2、雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎組(簡稱實驗組)(二)造模方法1、將P3SD大鼠用無水乙醚麻醉后，2、無菌條件下作頸腹側(cè)正中切口，取仰臥位，安爾碘皮膚消毒劑消毒頸部皮膚。無菌手術(shù)刀切開約o.scm長的切口。3、逐層分離皮下組織，找到血管神經(jīng)束，分離出雙側(cè)頸總動脈。4、對照組縫合皮膚，實驗組用9一0絲線完全結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈后縫合皮膚。爾術(shù)后在37℃水浴箱內(nèi)放置10分鐘，至體溫和活動恢復(fù)正常，返籠飼養(yǎng)。(圖l)

前后爪放平時記時停止，為大鼠完成翻正反射的時間。6、負(fù)向趨地性 (NegativegeotaXis):大鼠頭朝下放置在長30厘米傾斜45“的木板中心，記錄大鼠轉(zhuǎn)身頭向上將四爪放平并能夠爬至木板頂端的日齡(圖2)。如果

平衡木高40cm，長40cm，寬ICm，兩端各有一平臺(圖3)。大鼠放置在平衡木上，觀察120秒。根據(jù)大鼠在平衡木上的表現(xiàn)評分，得分越高說明平衡能力越差。平衡木實驗評分標(biāo)準(zhǔn)見下(表2)。圖3平衡木實驗設(shè)施表2平衡木實驗評分標(biāo)準(zhǔn)實實驗表現(xiàn) 現(xiàn)得分分能能夠到達平臺或能維持正常平衡姿勢 勢0分 分抓抓住平衡木的一側(cè) 側(cè)1分 分懸懸于平衡木并有一肢體摔下平衡木 木2分 分懸懸于平衡木并有兩肢體摔下平衡木或在平平3分 分衡衡木上旋轉(zhuǎn)>60秒 秒4分 分試試圖在平衡木上保持平衡>40秒，但摔下 下5分 分試試圖在平衡木上保持平衡>20秒，但摔下 下6分 分直直接摔下:無保持平衡意圖 圖 圖4、轉(zhuǎn)棒實驗 (Rotarodtest):應(yīng)用轉(zhuǎn)棒分析系統(tǒng)進行大鼠轉(zhuǎn)棒實驗(圖4)。轉(zhuǎn)

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉艷兵;喻云;陳曉;;早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷發(fā)病機制的研究進展[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

本文編號：2769181