【摘要】： 目的早產(chǎn)兒圍生期腦損傷多伴有運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)行為和認(rèn)知發(fā)育異常，以往關(guān)于早產(chǎn)兒腦損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究多注重腦組織形態(tài)學(xué)和生化指標(biāo)的改變，但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦損傷后神經(jīng)行為、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知發(fā)育評(píng)價(jià)也同樣重要。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谟^察3日齡未成熟大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈缺氧缺血腦損傷后少突膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及腦白質(zhì)組織學(xué)變化，了解存在腦損傷的未成熟大鼠幼鼠期、青春期、成熟期神經(jīng)行為、運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知損害程度，建立用于早產(chǎn)兒缺氧缺血腦損傷研究的合適動(dòng)物模型，探討相關(guān)時(shí)期腦白質(zhì)病理變化與大鼠行為運(yùn)動(dòng)障礙的關(guān)系。 方法將3日齡SD未成熟新生大鼠共30窩(共360只)通過(guò)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為兩組：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組僅切開(kāi)頸部皮膚，而實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。采用透射電鏡染色、組織切片HE染色、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞O_4標(biāo)記和細(xì)胞凋亡免疫組化雙標(biāo)、免疫組化標(biāo)記髓鞘堿性蛋白，觀察未成熟大鼠腦白質(zhì)損傷的超微結(jié)構(gòu)病理變化、少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡、髓鞘蛋白的表達(dá)水平。生后1周至3周檢查兩組大鼠體重、睜眼、豎耳、門齒萌出等生理發(fā)育情況，檢測(cè)眼瞼反射、耳廓反射、驚跳反射、翻正反射、四肢放置及抓握反射、趨地反射等原始反射，并進(jìn)行神經(jīng)行為發(fā)育評(píng)價(jià)；生后3周至6周通過(guò)步伐失誤實(shí)驗(yàn)、垂直網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)、平衡木實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)評(píng)估兩組大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性、伸肌功能、平衡能力和運(yùn)動(dòng)耐力發(fā)育；生后7周至13周通過(guò)水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠腦損傷遠(yuǎn)期認(rèn)知水平發(fā)育。 結(jié)果①對(duì)照組存活率為100％(120只／120只)，實(shí)驗(yàn)組存活率為51.3％(123只／240只)。實(shí)驗(yàn)組有87.8％(108只／123只)存在眼部發(fā)育障礙。②生后1至3周實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增長(zhǎng)較對(duì)照組明顯緩慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。生后3周實(shí)驗(yàn)組腦重較對(duì)照組減輕，實(shí)驗(yàn)組為1.06克±0.02克，對(duì)照組為1.46±0.04克，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。③透射電鏡術(shù)后6小時(shí)見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠腦室周白質(zhì)少突膠質(zhì)細(xì)胞及其線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體水腫明顯，見(jiàn)線粒體數(shù)目減少和空泡現(xiàn)象，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。術(shù)后12小時(shí)實(shí)驗(yàn)組少突膠質(zhì)細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞核染色質(zhì)分布不均。術(shù)后24小時(shí)實(shí)驗(yàn)組少突膠質(zhì)細(xì)胞廣泛核固縮。④組織切片HE染色見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組早期皮質(zhì)下、腦室周白質(zhì)疏松，后期膠質(zhì)細(xì)胞增生、腦室擴(kuò)大、白質(zhì)軟化灶形成；凋亡細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記后顯示為少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞；生后3周實(shí)驗(yàn)組大鼠髓鞘相關(guān)蛋白表達(dá)減少。⑤實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)眼瞼反射的日齡為11.0±0.6天，相比對(duì)照組8.0±0.4天有明顯延遲，差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)驚跳反射的時(shí)間為11.2±0.9天，對(duì)照組為8.4±0.3天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。下肢放置反射出現(xiàn)的時(shí)間實(shí)驗(yàn)組為10.6±0.7天，對(duì)照組為8.1±0.4天，兩組有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)上肢抓握反射的時(shí)間為9.4±0.2天，對(duì)照組為7.5±0.2天。實(shí)驗(yàn)組下肢抓握反射出現(xiàn)時(shí)間為10.4±0.7天，對(duì)照組為8.1±0.4天，兩組差異都有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組完成趨地性反射的日齡為19.0±2.0天，對(duì)照組為10.8±0.5天，兩組差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。對(duì)照組大鼠步態(tài)反射陽(yáng)性的日齡是生后10.5±0.5天，實(shí)驗(yàn)組為生后13.5±0.3天，實(shí)驗(yàn)組步態(tài)反射出現(xiàn)的日齡較對(duì)照組有延遲，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。⑥生后3周至6周實(shí)驗(yàn)組大鼠抓握能力的正常發(fā)育趨勢(shì)緩慢，同日齡實(shí)驗(yàn)組大鼠能夠抓住網(wǎng)屏的時(shí)間較對(duì)照組明顯減少兩組差異比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖16)。實(shí)驗(yàn)組大鼠在網(wǎng)格上行走時(shí)出現(xiàn)較多的踩空現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組大鼠生后3周到6周前肢步伐失誤率及后肢步伐失誤率較對(duì)照組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組大鼠平衡能力較對(duì)照組明顯減退。在大鼠生后3周至6周進(jìn)行平衡木實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠得分明顯高于對(duì)照組，差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組的大鼠轉(zhuǎn)棒能力增長(zhǎng)緩慢，且生后3周至6周實(shí)驗(yàn)組大鼠轉(zhuǎn)棒總路程及轉(zhuǎn)棒平均速度較對(duì)照組均明顯下降(P＜0.05)。⑦水迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠游泳曲線、上臺(tái)成功率、站臺(tái)周游泳時(shí)間比例及游泳平均速度各方面指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)組大鼠青春期、成熟期認(rèn)知功能較對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)。 結(jié)論①3日齡未成熟SD新生大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈后早期以少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡、彌漫性腦白質(zhì)損傷為主；腦損傷后期出現(xiàn)腦室擴(kuò)大和腦白質(zhì)內(nèi)軟化灶形成。②實(shí)驗(yàn)組大鼠幼鼠期出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育障礙，睜眼延遲及眼部發(fā)育異常，存在原始神經(jīng)反射受抑制，甚至驚厥。運(yùn)動(dòng)能力在生后2周有一定代償現(xiàn)象，但隨日齡增長(zhǎng)出現(xiàn)進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)功能缺陷。③在生后3周至6周即兒童期，實(shí)驗(yàn)組大鼠運(yùn)動(dòng)耐力、伸肌功能、平衡力和運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力下降。④在生后7周至13周即青春期、成熟期階段，實(shí)驗(yàn)組大鼠存在持續(xù)的空間認(rèn)知功能及遠(yuǎn)期記憶缺陷。⑤本文結(jié)果為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)早產(chǎn)兒腦損傷后神經(jīng)病理和少突膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化與運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知行為的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R722.6
【圖文】：

(一)分組從復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)得清潔級(jí)3日齡(P3)SD大鼠30窩，共360只，體重6.5一129，性別不拘。取同窩P3大鼠應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為兩組:1、正常對(duì)照組(假手術(shù)組，簡(jiǎn)稱對(duì)照組)2、雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎組(簡(jiǎn)稱實(shí)驗(yàn)組)(二)造模方法1、將P3SD大鼠用無(wú)水乙醚麻醉后，2、無(wú)菌條件下作頸腹側(cè)正中切口，取仰臥位，安爾碘皮膚消毒劑消毒頸部皮膚。無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)約o.scm長(zhǎng)的切口。3、逐層分離皮下組織，找到血管神經(jīng)束，分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈。4、對(duì)照組縫合皮膚，實(shí)驗(yàn)組用9一0絲線完全結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈后縫合皮膚。爾術(shù)后在37℃水浴箱內(nèi)放置10分鐘，至體溫和活動(dòng)恢復(fù)正常，返籠飼養(yǎng)。(圖l)

前后爪放平時(shí)記時(shí)停止，為大鼠完成翻正反射的時(shí)間。6、負(fù)向趨地性 (NegativegeotaXis):大鼠頭朝下放置在長(zhǎng)30厘米傾斜45“的木板中心，記錄大鼠轉(zhuǎn)身頭向上將四爪放平并能夠爬至木板頂端的日齡(圖2)。如果

平衡木高40cm，長(zhǎng)40cm，寬ICm，兩端各有一平臺(tái)(圖3)。大鼠放置在平衡木上，觀察120秒。根據(jù)大鼠在平衡木上的表現(xiàn)評(píng)分，得分越高說(shuō)明平衡能力越差。平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下(表2)。圖3平衡木實(shí)驗(yàn)設(shè)施表2平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)實(shí)實(shí)驗(yàn)表現(xiàn) 現(xiàn)得分分能能夠到達(dá)平臺(tái)或能維持正常平衡姿勢(shì) 勢(shì)0分 分抓抓住平衡木的一側(cè) 側(cè)1分 分懸懸于平衡木并有一肢體摔下平衡木 木2分 分懸懸于平衡木并有兩肢體摔下平衡木或在平平3分 分衡衡木上旋轉(zhuǎn)>60秒 秒4分 分試試圖在平衡木上保持平衡>40秒，但摔下 下5分 分試試圖在平衡木上保持平衡>20秒，但摔下 下6分 分直直接摔下:無(wú)保持平衡意圖 圖 圖4、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn) (Rotarodtest):應(yīng)用轉(zhuǎn)棒分析系統(tǒng)進(jìn)行大鼠轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)(圖4)。轉(zhuǎn)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉艷兵;喻云;陳曉;;早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

本文編號(hào)：2769181