【摘要】：背景: B系急性淋巴白血病(B-linage acute lymphocytic leukemia,B-ALL)是表達早期白細胞分化抗原的惡性克隆性疾病,其發(fā)病率居兒童惡性腫瘤之首。隨著流式細胞術(flow cytometry,FCM)的發(fā)展及系列相關單克隆抗體的應用,作為傳統(tǒng)的形態(tài)學和細胞化學檢查的必要補充,免疫分型已成為研究急性淋巴細胞白血病的基本手段之一。由于白血病細胞是腫瘤細胞,會出現與正常細胞表面抗原不同的免疫表型特征,既白血病相關免疫表型(Leukemia associated immunophenotype,LAIP)。LAIP一方面可以成為白血病的診斷依據,另一方面也為今后微小殘留病(minimal residual disease, MRD)的監(jiān)測提供了依據。通過免疫分型不僅可以確定B-ALL的細胞類型和分化階段,而且依據初診免疫分型時檢查出的LAIP,也成為了MRD檢測的重要手段之一。 以往B系急性淋巴細胞白血病LAIP的檢測主要是利用三色或四色流式細胞術進行。近年來,隨著新的熒光標記抗體技術的出現、多色熒光標記抗體的開發(fā)和流式細胞儀設備的改進,使利用六色流式細胞術進行LAIP的檢測成為可能。本研究在以往我院三色流式細胞術免疫分型的基礎上,探討六色流式細胞技術在B系急性淋巴細胞白血病相關免疫表型檢測中的應用。 目的: 1、探討廣州地區(qū)105例B-ALL患兒白血病相關免疫表型體征,為利用六色流式細胞術進行白血病相關免疫表型檢測的抗體組合選擇提供參考和依據。 2、評價六色流式細胞術在B系急性淋巴細胞白血病檢測中抗體陽性率的穩(wěn)定性,探討六色流式細胞術在B系急性淋巴細胞白血病相關免疫表型檢測中的優(yōu)勢,為運用六色流式細胞術進行MRD檢測提供參考和依據。 方法: 1、回顧分析廣州市婦女兒童醫(yī)療中心2008.8-2010.2收治的105例三色流式細胞術診斷為B-ALL初診患兒免疫分型結果,以10例非白血病患兒骨髓檢測結果為對照。 2、利用CD20/CD34/CD10/CD22/CD45/CD19、CD7/CD5/CD13/CD33/CD45/ CD19兩組六色抗體組合對25例三色流式細胞術免疫分型診斷為B-ALL的患兒骨髓標本進行六色流式細胞術檢測,以10例非白血病患兒骨髓標本檢測結果為對照。 結果: 1、105例患兒中98例可檢測出LAIP,LAIP的表達特征為:CD19、CD10、CD34、CD22、HLA-DR過陽性表達率分別為25%、47%、33%、11%、9%;CD45、CD38、HLA-DR弱陽性或缺失表達異常表達率分別為66%、16%、5%;CD34、CD20共陽性跨階段異常表達率為25%;髓系相關抗原CD13、CD33、CD15、CD64跨系列表達率分別為23%、18%、16%、1%,T系相關抗原CD7跨系列表達率為1%。 2、三色流式細胞術免疫分型中CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、CD33、CD34、CD45的陽性檢出率分別為96%、100%、76%、40%、4%、36%、36%、84%、36%;六色流式細胞術中CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、CD33、CD34、CD45的陽性檢出率分別為100%、96%、80%、40%、4%、44%、32%、84%、40%。三色流式細胞術免疫分型使用23種抗體共檢測出CD19~(strong)、CD10~(strong)、CD34~(strong)、CD22~(strong)、CD45~(-/dim)、CD34~+/CD38-、CD13~+、CD15~+、CD33~+、CD34~+/CD20~+ 10種LAIP。25例中23例可檢測出LAIP,其中1個LAIP者1例,2個LAIP者4例,3個LAIP者7例,4個LAIP者5例,5個LAIP者5例,6個LAIP者1例。六色流式細胞術使用10種抗體共檢測出CD10~(strong)、CD34~(strong)、CD22~(strong)、CD45~(-/dim)、CD19~+/CD13~+、CD19~+/CD33~+、CD34~+/CD20~+、CD34~+/CD22~+~+、CD10~+~+/CD20~+、19~+/CD10~+~+/CD22~+~+、19~+/CD34~+/CD10dim~+、CD 19~+/CD45~(-/dim)~+/CD34~(-/dim)~+、19~+/CD10-/CD20-/CD34- 13種LAIP。25例中23例可檢測出LAIP,其中1個LAIP者1例,2個LAIP者2例,3個LAIP者4例,4個LAIP者4例,5個LAIP者2例,6個LAIP者5例,7個LAIP者4例,8個LAIP者1例。 結論: 1、廣州地區(qū)B-ALL患兒LAIP中抗體的過陽性表達異常以CD10、CD34、CD19多見,比例分別為47%、33%、25%;抗體的弱陽性或缺失表達異常以CD45多見,比例為66%;跨系抗原表達異常中以伴髓系相關抗原CD13、CD33多見,比例分別為23%、18%。 2、六色流式細胞術抗體陽性檢出率穩(wěn)定,與三色流式細胞術免疫分型比較各抗體陽性檢出率無顯著性差異。六色流式細胞術雖所使用的抗體總數較少,但通過FSC/SSC、SSC/CD45、SSC/CD19設門,對幼稚細胞群、CD19~+細胞群在多個雙參數點圖上進行分析,能發(fā)現比三色流式細胞術更多的LAIP,并且六色流式細胞術可在同一管中同時檢測六種抗原,能根據患兒初診免疫分型時檢測出的LAIP進行靈活調整抗體組合的選擇,更有利于運用FCM進行化療獲得形態(tài)學緩解后MRD的檢測。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R733.71
【圖文】：

附圖 1：在FFS/SSC、CD45/SSC雙參數二小于成熟粒細胞的原／幼細胞，分別在各雙參數二維I、K、M、N、P 分別表示 CD45dim+、CD34strong、CCD33+、CD22strong。D、G、J、L、O、Q 分別表示骨疫分型中 CD34、CD20 不在同一管組合中，不能在雙種 LAIP 雙參數二維點圖

附圖 2：在 FFS/SSC、CD45/SSC、CD19/SSC 雙參數二維點圖中設門分析一群 CD45 弱表達于淋巴細胞、SSC 小于成熟粒細胞的原／幼細胞和 CD19+細胞群，分別在各雙參數二維點圖中分析原/幼細胞群和 CD19+細胞群。D、F、G、I、K、M、O、R、S、U、W、Y、Z 分別表示 CD45-/dim、CD10strong、CD34strong、CD19+/CD34+/CD22++、CD19+/CD10++/CD20+、CD19+/CD34+/CD20+、CD19+/CD13+、CD19+/CD33+、CD22strong、CD19+/CD10++/CD22++、CD19+/CD34+/CD10dim+、CD19+/CD45-/dim+/CD34-/dim+、CD19+/CD10-/CD20-/CD34-13種 LAIP。E、H、J、L、N、P、Q、T、V、X、AB、AC 分別為正常再生幼稚細胞各相應抗原的表達。

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